在不同的鹽濃度條件下，AAV病毒載體的存在形式不同,。低鹽濃度條件下,，AAV病毒顆粒表面會通過電荷作用等非特異結(jié)合到HCD上，從而產(chǎn)生病毒顆粒團(tuán)聚現(xiàn)象,。隨著溶液鹽濃度上升,，AAV病毒顆粒與HCD的離子相互作用會被破壞，AAV病毒顆粒會逐漸解離,。當(dāng)鹽濃度升到更高范圍（>400mM左右）,，AAV病毒顆粒與HCD的結(jié)合更弱，AAV顆粒更穩(wěn)定,。因此,，在高鹽濃度溶液中，AAV顆粒更加穩(wěn)定,，且有數(shù)據(jù)表明高鹽濃度不會削弱AAV的侵染能力,。所以，我們推薦提高AAV病毒生產(chǎn)中的鹽濃度,。M-SAN HQ中鹽核酸酶的生產(chǎn)用原輔料是Non-animal和Non-plant來源的,。江西ArcticZymes中鹽核酸酶70950-160

基因藥物常用的AAV載體有三種生產(chǎn)方法，分別是三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)體系,、桿狀病毒表達(dá)載體體系和包裝細(xì)胞體系,。其中，20多年前開發(fā)的三質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)表達(dá)技術(shù)仍然占據(jù)腺相關(guān)病毒AAV生產(chǎn)的主流地位,，其三質(zhì)粒分別是Helper質(zhì)粒（含E2a/b,、E4和VARNA基因）、目標(biāo)基因表達(dá)質(zhì)粒及輔助質(zhì)粒（含Cap和Rep基因）,。雖然AAV病毒載體的血清型不同,，但AAV的生產(chǎn)流程基本一致，主要有質(zhì)粒共轉(zhuǎn)宿主細(xì)胞HEK293、293細(xì)胞生產(chǎn)病毒顆粒,、從細(xì)胞培養(yǎng)上清或/及細(xì)胞裂解液中收獲病毒載體,、純化/制劑/無菌過濾/灌裝等流程。廣東上海倍篤生物中鹽核酸酶M-SAN HQ中鹽核酸酶兼容常見細(xì)胞培養(yǎng)基,，在多種培養(yǎng)基條件下去除核酸污染效率更高,；

M-SAN HQ中鹽核酸酶發(fā)揮酶活性的條件比較廣。例如,，該酶適宜的鹽濃度（NaCl）范圍是0mM-225mM,，能耐受400mM NaCl濃度。適宜反應(yīng)溫度為20℃-37℃,，能耐受4℃-40℃,。Mg2+濃度大于0.5mM即可，在4-15mM范圍即可表現(xiàn)更高活性,。跟其他核酸酶不同,，M-SAN HQ中鹽核酸酶不是堿性核酸酶，其適宜pH為7.2-8.7,，能耐受6.3-8.7,。綜合這些特點，在生理鹽條件下,，M-SAN HQ的酶活是傳統(tǒng)全能核酸酶的5倍左右,。因此，可以說M-SAN HQ是更適合生理鹽條件下的核酸酶,。

核酸酶活性受到很多因素影響,，如鹽濃度、pH,、底物,、溫度等。因此,，不同客戶,、不同項目中核酸酶的使用條件都不一。目前,，生物制藥行業(yè)對Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉,，如生理鹽或低鹽濃度、脫鹽操作等,。對于大部分使用Benzonase的項目,，使用M-SAN HQ中鹽核酸酶可以完全替代，而且溫度,、Mg2+濃度等條件不用做任何調(diào)整,，同樣酶量的M-SAN HQ對宿主細(xì)胞DNA（HCD）的去除效果更好,、病毒載體得率更高。經(jīng)過工藝優(yōu)化后,，可以將M-SAN HQ中鹽核酸酶的用量減少到原來的1/3-1/2,，且HCD去除效果及產(chǎn)品得率更高。M-SAN HQ ELISA kit檢測產(chǎn)品靈敏度高,，定量范圍為0.12-7.5ng/ml,。

慢病毒大規(guī)模純化的捕獲步驟包括：膜過濾澄清，隨后切向流過濾/超濾或者體積排阻色譜濃縮,。此外,，需用核酸酶（benzonase或M-SAN HQ中鹽核酸酶）來去除細(xì)胞殘留的、質(zhì)粒來源的DNA污染,。這兩個步驟順序可以調(diào)整,，依據(jù)項目工藝而定。兩種工藝路線各有優(yōu)缺點：先用核酸酶消化的優(yōu)點是可去除大的DNA片段,，且后續(xù)步驟可以去除殘留核酸酶,；但所用的核酸酶的量也非常大。與此相反,，將核酸酶步驟后置的優(yōu)點是大幅降低核酸酶的量(成本降低)；但后面的步驟必須有將核酸酶去除的能力,。此外,，后期用核酸酶的缺點是核酸污染可能會結(jié)合慢病毒顆粒形成沉淀，進(jìn)而導(dǎo)致慢病毒在純化中流失,，從而影響得率,。生理鹽濃度下，M-SAN HQ中鹽核酸酶性能優(yōu)于常用核酸酶,。山西等滲條件中鹽核酸酶

US FDA指南要求：重組biologics終產(chǎn)品中,，核酸雜質(zhì)含量低于10ng/dose。江西ArcticZymes中鹽核酸酶70950-160

除了獲得載體的滴度及產(chǎn)量,，生產(chǎn)慢病毒更關(guān)心的指標(biāo)主要是各種污染物的去除,。總DNA污染的去除百分比在99.1-99.84%,，總蛋白污染物的去除百分比在99.85-99.9%,。針對宿主細(xì)胞的DNA（HCD）及蛋白（HCP），有報道其去除百分比分別為99.8%和99.4%,。因為不僅殘存的DNA可能是個問題,，而且DNA的大小以及由此引起的可能轉(zhuǎn)移整個有功能的開放閱讀框也是問題，因此監(jiān)管機(jī)構(gòu)對殘存DNA污染的分子量上限的要求越來越高,。例如,，F(xiàn)DA的指南‘生產(chǎn)用于傳染病適應(yīng)癥的病毒疫苗的細(xì)胞基質(zhì)和其他生物材料的特性和鑒定’中說明,，殘留的細(xì)胞宿主的DNA片段不能超過一個功能基因的長度，估計在200bp左右,。江西ArcticZymes中鹽核酸酶70950-160

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