樣品制備的條件可能會(huì)在樣品中誘發(fā)偽影,，因此需要避免高溫和堿性pH值進(jìn)行質(zhì)譜分析,。如果可能的話，避免多個(gè)步驟并在一鍋反應(yīng)中進(jìn)行消化和還原也可能是有益的,。與IdeS不同,，為了探索Genovis的GingisREX對(duì)離液劑和去液劑的穩(wěn)定性和耐受性，在一系列試劑中測(cè)試了酶活性,，并使用底物測(cè)定進(jìn)行了評(píng)估,。數(shù)據(jù)顯示,，GingisREX在6M時(shí)耐受尿素，吐溫高達(dá)1%,，但活性在0.1%時(shí)受到SDC的負(fù)面影響,。該酶在 pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時(shí)顯示出活性,，在 pH 值為 6.5-8.0 之間,。綜上所述，GingisREX可用于一鍋反應(yīng),，以同時(shí)消化和變性6M尿素,。與Genovis的IdeS不同，雙特異性 T 細(xì)胞接合器 （BiTE） 分子是一種融合蛋白療法,，其中兩個(gè) scFv 融合,，形成一個(gè)雙特異性分子，其中一個(gè) scFv 靶向細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞,，另一個(gè)靶向Ai癥抗原,。該蛋白質(zhì)由四個(gè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域組成，兩個(gè) scFv 均由 VL 和 VH 區(qū)域組成,，總共由三個(gè)柔性 GS 連接子連接,。這種蛋白質(zhì)的大尺寸（54 kDa）可能對(duì)通過完整質(zhì)譜法進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)構(gòu)成挑戰(zhàn)，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)MS儀器可能無法提供蛋白質(zhì)的單同位素分辨率,。通過高分辨率質(zhì)譜進(jìn)行分離和鑒定：酶解曲線和更高的序列覆蓋率,。山西GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis的FabRICATOR是一種半胱氨酸蛋白酶，它對(duì)許多不同的物種和IgG亞類都有活性,，包括人IgG亞類1-4以及猴子,、兔子、大鼠和綿羊IgG的一些亞類,。FabRICATOR在鉸鏈下方的單個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行消化,，生成F(ab’)2和Fc/2子基，可以進(jìn)一步還原生成Fd’,，輕鏈和F/2子基是必需的,。FabRICATOR（IdeS）通過蛋白-蛋白相互作用與目標(biāo)抗體工作，這說明了它的高特異性,。事實(shí)上,，它在單個(gè)位點(diǎn)消化意味著使用FabRICATOR時(shí)沒有過度消化的風(fēng)險(xiǎn)，其高特異性也意味著相同的消化方案可以作為平臺(tái)方法應(yīng)用于許多不同的抗體,。FabRICATOR（IdeS）不需要還原條件來獲得良好活性,，也不需要任何額外的輔助因子，它將在不同生理緩沖中發(fā)揮作用,。這意味著按照下面的鉸鏈消解,，您將生成F(ab’)2和Fc/2片段用于分析或其他應(yīng)用。山西GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段，您需要另一種填料,。

Genovis是一家瑞典生物技術(shù)公司,，自2010年起，為生物制藥公司提供SmartEnzymes工具酶,。Genovis提供一系列獨(dú)特,、快速且易于使用的酶學(xué)工具，主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界,。我們?cè)谌蚍秶鷥?nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?,，用于單克隆抗體、ADC,、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發(fā),、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁面”獲得更多應(yīng)用信息,，如果您有興趣,，可以和我們一起做一個(gè)“SmartStories”，也可以聯(lián)系我們,。

與IdeS不同,，Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶,，可在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1,，而IgASAPSub1+2特異性消化鉸鏈上方的IgA1和IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段,。IgASAP酶能夠生成完整的單價(jià)Fab片段以及IgA的中級(jí)分析,，從而促進(jìn)IgA的表征，例如,，在疫苗,、zhiliao和診斷的開發(fā)過程中。獨(dú)特的酶促工具,，可實(shí)現(xiàn)IgA的中級(jí)表征和質(zhì)量控制,；生成均相的Fab和Fc片段，并保留免疫反應(yīng)性,；高度特異性–人IgA鉸鏈上方的一個(gè)消化位點(diǎn),。可消化精氨酸殘基的 C 末端蛋白質(zhì),，包括難以與其他酶消化的 Arg-Pro 鍵,。

大多數(shù)商業(yè)zhiliao性抗體屬于IgG類，在Fc結(jié)構(gòu)域中含有N-聚糖,。一個(gè)重要的關(guān)鍵質(zhì)量屬性是糖基化曲線,，因?yàn)樗鼤?huì)影響穩(wěn)定性,、溶解度、藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)特性,。這種翻譯后修飾可能發(fā)生在生物工藝開發(fā)和制造過程中,，因此需要密切監(jiān)測(cè)。Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶已成為一種被接受的快速表征單克隆抗體（mAb）的分析工具,。FabRICATOR在鉸鏈下方消化IgG,，產(chǎn)生F（ab'）2和Fc/2片段。單個(gè)FabRICATOR消解位點(diǎn)和質(zhì)量譜的后續(xù)精度使Fc糖基化譜能夠檢測(cè),，從而可以監(jiān)測(cè)批次間的一致性和其他關(guān)鍵質(zhì)量屬性,。Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與FabRICATOR活性兼容,。湖南GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

用FabDELLO消化市售的IgG1 risankizumab(在下鉸鏈區(qū)域具有LALA突變),。山西GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

蛋白酶用于生成肽，用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì),。這些應(yīng)用包括蛋白質(zhì)組學(xué)和生物制藥的深度表征,。由于遺漏了切割和樣品制備誘導(dǎo)的偽影，傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的,，因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱,。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶，可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基,。與胰蛋白酶肽相比,，所得肽更長(zhǎng)，并可能導(dǎo)致序列覆蓋率增加,。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對(duì)于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復(fù)雜的數(shù)據(jù)解釋至關(guān)重要,。作為模型底物，使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性,。胰島素氧化β鏈含有一個(gè)精氨酸和一個(gè)賴氨酸殘基,。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性,，即使在長(zhǎng)時(shí)間孵育過夜后,，酶與底物的比例也很高（1：5）。然而,，ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性,，但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1：20 和過夜孵育下,，證明了 ArgC 的額外非特異性活性,。在相同條件下，GingisREX未檢測(cè)到這種情況,。數(shù)據(jù)證實(shí)了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性,，并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化,。山西GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶