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江西FabULOUSIdeS蛋白酶

來源: 發(fā)布時間:2024-05-07

一些應(yīng)用(如結(jié)合研究)具有高度靈敏度,,因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此,,Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供,,可快速輕松地生成均質(zhì) F(ab')2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR (IdeS),,用于制備來自多種 IgG 的 F(ab')2 和 Fc 片段(對于兔 IgG,,請咨詢),而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進行處理 ,。 為了生成和純化完整的 F(ab')2 和 Fc/2 片段,使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗,,并通過 SDS-page 進行分析,。首先,在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘,,然后進行短離心步驟,。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F(ab')2 片段,并通過降低 pH 值,,然后立即調(diào)整回中性 pH 值,,一步洗脫結(jié)合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過程大約需要 1 小時Genovis提供FabRICATOR Fab2試劑盒,這是IgG片段生成和純化的強大工具,。江西FabULOUSIdeS蛋白酶

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與IdeS不同,,Genovis的IgMBRAZOR是一種獨特的IgM特異性蛋白酶,可在重鏈中CH2結(jié)構(gòu)域下方的一個特定位點消化人IgM,,產(chǎn)生均質(zhì)的F(ab')2和Fc片段,。該酶能夠?qū)?fù)雜和高分子量的人IgM進行中級分析,從而促進疫苗,、zhiliao和診斷等過程中的IgM表征,。獨特-可實現(xiàn)IgM的中級表征和質(zhì)量控制;快速–在30分鐘內(nèi)生成均勻的F(ab')2和Fc片段,;高度特異性–人IgM重鏈中的一個消化位點,。IgMBRAZOR是一種獨特的IgM特異性酶,可在重鏈中CH2結(jié)構(gòu)域下方的一個特定位點消化人IgM,,產(chǎn)生F(ab')2和Fc片段,。消化在30分鐘內(nèi)完成,并且由于酶的特異性,,如果孵育時間延長,,則不存在過度消化的風(fēng)險。該酶在pH值為5.5至9.0時具有活性,,不需要還原條件或輔助因子即可發(fā)揮活性,。良好的活性是在37°C下,但也可以在室溫下使用增加孵育時間進行消化,。IgMBRAZOR在大腸桿菌中表達,。該酶含有His標簽,分子量為38kDa,。山西GingisKHANIdeS蛋白酶Genovis的GlySERIAS 是一種獨特的酶,。

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大多數(shù)zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架,雙特異性和多特異性形式的開發(fā)正在迅速增加,。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性,,例如單價結(jié)合、二硫鍵擾亂和配對Fc糖基化,。傳統(tǒng)方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化,,這需要優(yōu)化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產(chǎn)量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性,,它在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1,,并產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性,,通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇,。所有底物均實現(xiàn)了完全消化,,包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗證了其在生物制藥開發(fā)中的用途,。

作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分,,IgA在自身免疫性疾病、過敏反應(yīng),、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發(fā)揮作用,。在天然條件和復(fù)雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫(yī)學(xué)和研究中具有重要價值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復(fù)雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具,。人IgA1和IgA2之間的一個顯著結(jié)構(gòu)差異是鉸鏈區(qū)域,。與IgA2相比,IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區(qū)域,。IgASAPSub1的消化位點位于該擴展區(qū)域,,使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在,,A2m1,、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸(P)和纈氨酸(V)之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區(qū)域,,但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸(R)殘基取代,,因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性??捎糜诳贵w高階結(jié)構(gòu)(HOS)結(jié)晶和NMR研究,、雙抗或多抗的表征、單價結(jié)合研究或完整Fc聚糖分析,。

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與IdeS不同,,在蛋白質(zhì)zhiliao藥物的質(zhì)量控制過程中,詳細分析和識別質(zhì)量屬性非常重要,。對于具有柔性連接子的融合蛋白療法,,這包括確認連接蛋白的質(zhì)量以及蛋白質(zhì)接頭的質(zhì)量。使用 Genovis的GlySERIAS 的連接子酶切可以通過分離連接的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域來幫助這種質(zhì)量控制,。然而,,連接子中的大量甘氨酸殘基提供了酶的許多潛在消化位點,導(dǎo)致連接子內(nèi)多個位點同時水解,。消化的產(chǎn)物通常由連接蛋白的幾種變體組成,,并保留不同程度的連接子。雖然觀察到的異質(zhì)性通常不會對蛋白質(zhì)亞基的詳細表征產(chǎn)生負面影響,,但有助于直接表征連接子,但有時需要更均勻的消化產(chǎn)物來詳細分析單個蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域,??捎糜谌鐔蝺r結(jié)合、二硫鍵擾亂和配對Fc糖基化等。湖北FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis的FabULOUS來源于化膿性鏈球菌,,在大腸桿菌中表達,,分子量為 29 kDa,該酶含有 His 標簽,。江西FabULOUSIdeS蛋白酶

Genovis提供色譜柱形式的FabRICATOR(IdeS)酶,,是在鉸鏈下方對IgG進行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR(IdeS)是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶,,可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體,,產(chǎn)生均質(zhì)的F(ab')2和Fc片段。酶解后,,可以使用反相HPLC,、質(zhì)譜或其他分析方法分析片段??贵w消化和亞基生成的自動化使生物反應(yīng)器的在線監(jiān)測應(yīng)用成為可能,,例如,作為2D-LC-MS設(shè)置的一部分,,將反應(yīng)器直接耦合到MS,。這種自動化的抗體亞基分析方法減少了操作人員的時間、樣品處理時間并提高了通量,。江西FabULOUSIdeS蛋白酶