對于含包膜的病毒載體,,如慢病毒LV,、逆轉(zhuǎn)錄病毒RV等,,在細(xì)胞培養(yǎng)上清液中收獲,。而M-SAN HQ中鹽核酸酶,,作為市場上更適合生理鹽條件的核酸酶,,所以,,M-SAN HQ成了包膜病毒載體生產(chǎn)的更好選擇,。優(yōu)勢在于:1. M-SAN HQ兼容多種細(xì)胞培養(yǎng)體系,,在細(xì)胞培養(yǎng)鹽濃度條件下具有更優(yōu)活性,;2. M-SAN HQ酶活更高、酶切速度更快,,縮短孵育時(shí)間,;3. M-SAN HQ能夠高效剪切染色質(zhì)到更小片段,簡化下游工藝流程,;4. 相比Benzonase,,M-SAN HQ用量減少1/2-2/3,,降低了酶用量及生產(chǎn)成本。鑒于biologics制品更嚴(yán)格的質(zhì)量要求,,廠家對M-SAN HQ中鹽核酸酶的生產(chǎn)及質(zhì)控符合更高標(biāo)準(zhǔn),。福建M-SAN HQ中鹽核酸酶70950-160
倫敦大學(xué)學(xué)院(UCL)的工藝開發(fā)團(tuán)隊(duì),在細(xì)胞藥物Car-T涉及的慢病毒(Lentivirus,,LV)生產(chǎn)過程中,,比較了Benzonase和M-SAN HQ中鹽核酸酶在酶活、酶切時(shí)間,、各階段LV的穩(wěn)定性等方面的表現(xiàn),,發(fā)現(xiàn)在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶酶活更高、酶切時(shí)間更短,,同時(shí)用納米顆粒分析(NTA)技術(shù)確認(rèn)M-SAN HQ組得到的LV病毒顆粒聚集更少,、穩(wěn)定性更高。他們會(huì)繼續(xù)探究HCD是否影響LV的穩(wěn)定性,,及對LV侵染效率和生命周期是否有影響,。通過更多研究,我們探究M-SAN HQ中鹽核酸酶助力LV生產(chǎn)的關(guān)鍵機(jī)制,。南通倍篤生物中鹽核酸酶采購浙江中鹽核酸酶款式哪家好呢,,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
在生物工藝流程中,,需要使用核酸酶去除終產(chǎn)品中的核酸污染,,而核酸酶作為外源成份,也需要在生產(chǎn)流程中去除,。核酸酶去除工藝包括熱滅活法,、酶抑制劑、離子交換和親合層析法等,。慢病毒LV的pI在6.0-6.5左右,,包裝了完整基因組DNA后的AAV病毒顆粒PI大致為5.9,來自于S.marcescens的全能核酸酶pI 6.85左右,,M-SAN HQ中鹽核酸酶pI 8.7左右,。因此,在同樣的條件下,,從LV/AAV溶液中去除M-SAN HQ中鹽核酸酶比去除Benzonase全能核酸酶更容易,、更徹底。
慢病毒大規(guī)模純化的捕獲步驟包括:膜過濾澄清,,隨后切向流過濾/超濾或者體積排阻色譜濃縮,。此外,需用核酸酶(benzonase或M-SAN HQ中鹽核酸酶)來去除細(xì)胞殘留的,、質(zhì)粒來源的DNA污染,。這兩個(gè)步驟順序可以調(diào)整,,依據(jù)項(xiàng)目工藝而定。兩種工藝路線各有優(yōu)缺點(diǎn):先用核酸酶消化的優(yōu)點(diǎn)是可去除大的DNA片段,,且后續(xù)步驟可以去除殘留核酸酶,;但所用的核酸酶的量也非常大。與此相反,,將核酸酶步驟后置的優(yōu)點(diǎn)是大幅降低核酸酶的量(成本降低),;但后面的步驟必須有將核酸酶去除的能力。此外,,后期用核酸酶的缺點(diǎn)是核酸污染可能會(huì)結(jié)合慢病毒顆粒形成沉淀,,進(jìn)而導(dǎo)致慢病毒在純化中流失,從而影響得率,。在150mM NaCl條件下,,M-SAN HQ中鹽核酸酶的酶切活性達(dá)到常規(guī)核酸酶的5倍左右。
M-SAN HQ中鹽核酸酶在生理鹽條件下的優(yōu)勢,,讓其成為生物生產(chǎn)工藝中去除核酸污染的更好選擇,。經(jīng)過多年的市場宣傳,M-SAN HQ中鹽核酸酶品質(zhì)已得到多個(gè)全球TOP CDMOs認(rèn)可,,納入其工藝開發(fā)篩選平臺,。此外,目前全球有10+臨床項(xiàng)目涉及的病毒載體生產(chǎn)用到M-SAN HQ中鹽核酸酶,。對于同一個(gè)項(xiàng)目,,用M-SAN HQ替代Benzonase全能核酸酶,酶量減少,、HCD去除效果更優(yōu),、病毒載體產(chǎn)量也有一定程度的提高,酶相關(guān)成本降為原有的1/5以內(nèi),,極大降低了病毒載體生產(chǎn)成本,。M-SAN HQ中鹽核酸酶的檢測標(biāo)準(zhǔn),都符合USP-EP要求,。鎮(zhèn)江70950-202中鹽核酸酶代理商
在已有工藝中,,不需做任何調(diào)整,用中鹽核酸酶能夠完全替換全能核酸酶,,且去除HCD效率更高,;福建M-SAN HQ中鹽核酸酶70950-160
核酸酶活性受到很多因素影響,如鹽濃度,、pH、底物,、溫度等,。因此,,不同客戶、不同項(xiàng)目中核酸酶的使用條件都不一,。目前,,生物制藥行業(yè)對Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉,如生理鹽或低鹽濃度,、脫鹽操作等,。對于大部分使用Benzonase的項(xiàng)目,使用M-SAN HQ中鹽核酸酶可以完全替代,,而且溫度,、Mg2+濃度等條件不用做任何調(diào)整,同樣酶量的M-SAN HQ對宿主細(xì)胞DNA(HCD)的去除效果更好,、病毒載體得率更高,。經(jīng)過工藝優(yōu)化后,可以將M-SAN HQ中鹽核酸酶的用量減少到原來的1/3-1/2,,且HCD去除效果及產(chǎn)品得率更高,。福建M-SAN HQ中鹽核酸酶70950-160