4）待圖像分析前,，向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,，37℃孵育5-10min，然后進(jìn)行圖像分析,。2.活ti成像分析1）用無(wú)菌的DPBS(w/oMg2+,、Ca2+)配制15mg/mL的熒光素的儲(chǔ)存液，混勻,。2）用μm濾膜過濾除菌,。立即使用，或分裝于-20℃避光保存,，避免反復(fù)凍融,。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,，以小鼠為例,，每只小鼠體重假定20g，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析,。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期,。注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲熒光素（beetleluciferin）,、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn),。2）注射方式,、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，確定更佳信號(hào)平臺(tái)期和更佳的檢測(cè)時(shí)間,。3）如果要進(jìn)行ATP的檢測(cè),，盡量避免外源ATP的污染，如操作時(shí)戴手套并使用ATP-free的實(shí)驗(yàn)耗材,，在進(jìn)行熒光素的溶解時(shí)應(yīng)使用ATP-free無(wú)菌水,。4）為避免反復(fù)凍融，本產(chǎn)品配制成溶液后建議適當(dāng)分裝后-20℃或-80℃保存,。為防止氧化,，如有條件，可以對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤夂蟊４?。D-熒光素鉀鹽如何選擇合作公司,？專業(yè)做D-熒光素鉀鹽公司

    螢火蟲熒光素酶（Luciferase）是一種常用的信號(hào)分子，可以用來(lái)標(biāo)記腫瘤細(xì)胞.一．細(xì)胞方法將帶有熒光素luc轉(zhuǎn)酶報(bào)告基因的真核表達(dá)重組質(zhì)粒pRc/CMV2-7,，利用G418篩選,，獲得穩(wěn)染人乳腺哎細(xì)胞株MCF-7-luc，并在穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶基因的細(xì)胞克隆MCF-7體外評(píng)價(jià)其發(fā)光能力,。通過建立裸鼠移植瘤模型,，利用活題生物發(fā)光成像系統(tǒng)檢測(cè)腫大的瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移情況，為下一步監(jiān)測(cè)裸鼠移植瘤對(duì)藥物作用的變化情從而為分析藥物對(duì)腫大的瘤的治的好效果提供理想的狀況.G418篩選濃度的確定：37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中常培養(yǎng),G418按0,、200,、400、600,、800,、1000μg/ml設(shè)置6個(gè)濃度梯度。在細(xì)胞接種24h后,，加入6孔板中,，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)孔在10～14d內(nèi)全部死亡。每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,，死亡更低的G418濃度,，即為篩選質(zhì)粒轉(zhuǎn)染克隆MCF－7細(xì)胞的濃度。1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF－7細(xì)胞,，將細(xì)胞接種于6孔板內(nèi)待細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%孔培養(yǎng)板中,，TM即可轉(zhuǎn)染。按照Lipofectamine2000試劑盒操作指南進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。在250μl無(wú)血清,、無(wú)雙抗的DMEM培培養(yǎng)基中加入luc質(zhì)粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl無(wú)血清、無(wú)雙抗的DMEM培養(yǎng)基中加入10μlLipofectamineTM2000,，室溫培育5min,。將上述2種稀釋液混勻。淮安體外研究D-熒光素鉀鹽生物公司D-熒光素鉀鹽的活題成像技術(shù),。

    我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽，具有多種功能,，例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí),，可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展,，人們認(rèn)識(shí)到可以利用該系統(tǒng)通過結(jié)合免疫測(cè)定的組分檢測(cè)多種分析物。由此產(chǎn)生的平臺(tái)（現(xiàn)稱為“Lumit”）提供了具有高靈敏度的簡(jiǎn)化免疫檢測(cè)法,。螢光素酶（英語(yǔ)：Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱,，其中**有代表性的是一種學(xué)名為Photinuspyralis的螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶。在相應(yīng)化學(xué)反應(yīng)中,，熒光的產(chǎn)生是來(lái)自于螢光素的氧化,，有些情況下反應(yīng)體系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。沒有螢光素酶的情況下,，螢光素與氧氣反應(yīng)的速率非常慢,，而鈣離子的存在常常可以進(jìn)一步加速反應(yīng)（與肌肉收縮的情況相似）,。螢光生成反應(yīng)通常分為以下兩步：螢光素+ATP→螢光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi螢光素化腺苷酸+O2→氧螢光素+AMP+光這一反應(yīng)非常節(jié)省能量,，幾乎所有輸入反應(yīng)的能量都被轉(zhuǎn)化為光。與之形成鮮明對(duì)比的是人類使用的白熾燈,，只有約10%的能量被轉(zhuǎn)化為光,，剩余的能量都變?yōu)闊崮芏焕速M(fèi)。螢光素或螢光素酶不是特定的分子,。

    8．取剩余裂解液測(cè)定LacZ的活性,，其讀數(shù)作為內(nèi)標(biāo)用以矯正熒光素酶的讀數(shù)。9.用矯正后的讀數(shù)作圖,，分析數(shù)據(jù),。注：熒光素見光易氧化，已稀釋未用的熒光素應(yīng)丟棄,。注意事項(xiàng)：1．熒光素酶檢測(cè)試劑需在15-25℃條件下預(yù)平衡后再進(jìn)行反應(yīng),，而后依據(jù)具體條件進(jìn)行自動(dòng)或手動(dòng)檢測(cè)。當(dāng)用液閃計(jì)數(shù)儀時(shí),，加入熒光素酶檢測(cè)試劑后立即輕輕混勻,。2．如果細(xì)胞裂解后不能立即對(duì)提取物進(jìn)行檢測(cè)，樣品可以在冰上保存大約5h,，在-70℃可保存數(shù)月,。不要反復(fù)凍融以避免酶活性的降低。3．利用上述方法檢測(cè)冷的樣品時(shí)，其信號(hào)強(qiáng)度將下降5-15%,。4．在熒光素酶活性較高的情況下,，導(dǎo)致信號(hào)超出線性范圍（信號(hào)溢出）可用裂解液將樣品進(jìn)行稀釋。5．不要儲(chǔ)存稀釋過的樣品,。如果必須保存,，要在稀釋的樣品中加入BSA至終濃度為，這樣可以保持樣品的穩(wěn)定性,。6．一些熒光儀在進(jìn)行檢測(cè)前需要1-2s的穩(wěn)定,，因此建議在開機(jī)后過一段時(shí)間再進(jìn)行檢測(cè)操作。熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)主要有哪些用途,？a.啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析,，將啟動(dòng)子區(qū)域序列（通常2k左右）進(jìn)行分段截短，或?qū)μ囟ㄎ稽c(diǎn)進(jìn)行突變,，再分別構(gòu)建入luciferase報(bào)告載體,，檢測(cè)其啟動(dòng)子活性。b.啟動(dòng)子SNP分析,，一些基因的啟動(dòng)子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性,。南京靠譜的D-熒光素鉀鹽測(cè)試公司。

    LAR）Promega公司推出的第一種螢光素酶檢測(cè)試劑LuciferaseAssaySystem（LAR）,，為靈敏,、非放射性的報(bào)告基因檢測(cè)拉開了序幕。LAR與螢火蟲螢光素酶（luc）報(bào)告基因一起,，為研究人員開始了解基因表達(dá)調(diào)控因子提供了首要的工具,。[1]1995Dual-Luciferase?報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)（DLR）DLR是第一種允許在單個(gè)樣本中依次檢測(cè)兩個(gè)報(bào)告基因的試劑。通過允許螢光素酶活性的內(nèi)部歸一化,，在提高報(bào)告基因檢測(cè)的可靠性方面取得了關(guān)鍵進(jìn)展,。此外，pGL3報(bào)告基因載體系列具有改良后的螢火蟲螢光素酶基因,，luc+,。這個(gè)改造一種報(bào)告基因以實(shí)現(xiàn)性能改進(jìn)的例子后來(lái)被進(jìn)一步應(yīng)用到pGL4和luc2報(bào)告基因上，通過生物信息學(xué)和合成方法,，實(shí)現(xiàn)了更大的改進(jìn),。[1]1999ENLITEN?/UltraGlo?重組螢光素酶Promega公司在早期推出的一種重組螢火蟲螢光素酶（Enliten）基礎(chǔ)上，改造出了一種稱為UltraGlo?的熱穩(wěn)定性螢光素酶,。UltraGlo?的開發(fā)是在各種檢測(cè)和儲(chǔ)藏條件下進(jìn)行一步法“加樣-讀數(shù)”檢測(cè)的關(guān)鍵,。此后，通過開發(fā)新的方法來(lái)改變螢火蟲螢光素酶檢測(cè)的信號(hào)動(dòng)力學(xué),，例如Bright-Glo?,、Steady-Glo?和Dual-Glo?允許使用微孔板進(jìn)行檢測(cè)。而“加樣-讀數(shù)”的形式簡(jiǎn)化了樣品處理。D-熒光素鉀鹽使用濃度怎么樣,？淮安體外研究D-熒光素鉀鹽生物公司

D-熒光素鉀鹽的發(fā)射波長(zhǎng)是多少,？專業(yè)做D-熒光素鉀鹽公司

    常見的熒光素酶有兩種，分別是螢火蟲熒光素酶（fireflyluciferase,，編碼基因是luc）和海腎熒光素酶（Renillaluciferase,，編碼基因是Rluc），前者的底物是D-Luciferin,，后者的底物是Coelenterazine,。它們共同的作用原理是在ATP和熒光素酶的催化作用下，底物被氧化發(fā)光（不同底物光的顏色和波長(zhǎng)不同）,，當(dāng)?shù)孜镞^量時(shí),，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。***成像技術(shù)（opticalinvivoimaging）目前主要采用生物發(fā)光（bioluminescence）與熒光（fluorescence）兩種技術(shù),，生物發(fā)光法是基于熒光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化學(xué)發(fā)光的原理，將體外能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株植入動(dòng)物體內(nèi),，與后期注射入體內(nèi)的底物發(fā)生反應(yīng),，利用光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)光強(qiáng)度，間接反映出細(xì)胞數(shù)量的變化或細(xì)胞的定位,。這項(xiàng)技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域常用的有**或疾病動(dòng)物模型的建立,，并可用于病毒學(xué)研究、siRNA研究,、干細(xì)胞研究,、蛋白質(zhì)相互作用研究等。以下主要介紹D-Luciferin（D熒光素）的分類：D-Luciferin：有三種,，分別是D-Luciferin,SodiumSalt/D熒光素鈉鹽,、D-Luciferin,PotassiumSalt/D-熒光素鉀鹽和D-LuciferinFirefly,freeacid/D-螢火蟲熒光素。專業(yè)做D-熒光素鉀鹽公司

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