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胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)重要的培養(yǎng)基且不可替代,它是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血,。此時(shí)胎牛各臟器正處生長(zhǎng)分化階段,血中含有豐富的生長(zhǎng)發(fā)育因子,,非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng),。因此,如何在使用過(guò)程中保護(hù)這些因子的活性,,達(dá)到較為大的細(xì)胞培養(yǎng)效果,,就需要正確地使用胎牛血清。正確地使用胎牛血清可分為以下四個(gè)方面:正確儲(chǔ)存,,避免反復(fù)凍融:血清在-20°C凍存,。血清避免反復(fù)凍融,以免降低因子活性,。如一次用不完,,應(yīng)進(jìn)行分裝。血清和培養(yǎng)基應(yīng)盡可能“現(xiàn)用現(xiàn)配”,,配好的培養(yǎng)液,,應(yīng)于一周內(nèi)用完。血清避免在4°C或更高溫度靜置過(guò)久,,否則會(huì)破壞血清中有效活性成分,,影響血清品質(zhì)。胎牛血清指的是取自未出生,,母牛剖腹得來(lái)的胎牛,。連云港去外泌體胎牛血清
未經(jīng)檢疫的胎牛血清可能攜帶傳染性物質(zhì),一旦流入境內(nèi),,將會(huì)對(duì)人民**的生命健康造成重大威脅,,如可能帶有瘋牛病病毒、牛病毒性腹瀉病毒,、牛細(xì)小病毒,、狂犬病毒或其他傳染性物質(zhì),具有極高的檢疫風(fēng)險(xiǎn),。此外,,不合格的血清對(duì)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性,、穩(wěn)定性和真實(shí)性也會(huì)造成嚴(yán)重影響。無(wú)合格質(zhì)檢的胎牛血清存在支原體,、病毒等污染,,這對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)造成嚴(yán)重不良影響;工藝不規(guī)范導(dǎo)致溶血,,溶血較嚴(yán)重的血清含有許多胞內(nèi)產(chǎn)物,,對(duì)細(xì)胞有刺激作用,影響實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和數(shù)據(jù)的真實(shí)性,;血清批次不穩(wěn)定,,實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以重復(fù)。連云港去外泌體胎牛血清血清的保存應(yīng)該注意:需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中,。
國(guó)際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性,,不會(huì)產(chǎn)生沉淀,同時(shí)能縮短血清融化時(shí)間,。關(guān)于胎牛血清的滅活:真正的胎牛血清因?yàn)樘ヅ](méi)有形成有效補(bǔ)體,,如果針對(duì)補(bǔ)體滅活的話,就不需要,。其他情況根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來(lái)決定,。胎牛血清的濃度:胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,混合后配成完全培養(yǎng)基,。曾有文獻(xiàn)報(bào)道,,不同胎牛血清濃度對(duì)細(xì)胞存在一定的影響,尤其是干細(xì)胞和原代細(xì)胞,。具體很好濃度需要用戶根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)來(lái)確定,,以既保證培養(yǎng)的效果,又避免血清的浪費(fèi),。
多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的,。很多場(chǎng)合下,熱滅活并不會(huì)改善細(xì)胞的生長(zhǎng),,卻降低了支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力,。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下,其促進(jìn)的比率也是微不足道的,。另外,,血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染,從而給用戶和供應(yīng)商都帶來(lái)不必要的麻煩,。所以胎牛血清不推薦熱滅活,。熱滅活一般是指在做免疫相關(guān)的試驗(yàn)中,通過(guò)加熱滅活掉血清中的補(bǔ)體,,以避免對(duì)免疫試驗(yàn)的影響,。在胎牛血清中,,由于胎齡原因,尚未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng),,因此,,胎牛血清不會(huì)真正干預(yù)免疫試驗(yàn)。故不需滅活,。并且,,熱滅活反而可能導(dǎo)致胎牛血清中部分重要的生長(zhǎng)因子的活性衰減,進(jìn)而影響細(xì)胞培養(yǎng)效果,。血清中含有抗蛋白酶成分,,起到中和作用。
血清的保存應(yīng)該注意:血清中的沉淀物,、絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量,可用離心3000rpm,,5分鐘去除,,也可不用處理,,顯微鏡下"小黑點(diǎn)",。經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì)明顯增多,。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",,常誤認(rèn)為血清受污染,一般情況下,,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,,更換另一批號(hào)的血清,。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破壞而影響血清質(zhì)量,。胎牛血清的其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,。連云港去外泌體胎牛血清
血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,,若非必要,可以無(wú)須做此步驟,。連云港去外泌體胎牛血清
胎牛血清與其它牛血清有何區(qū)別,?根據(jù)牛出生時(shí)間和血清采集分離方法分為:胎牛血清:胎牛血清是指懷孕3-8個(gè)月的母牛被屠宰后,發(fā)育未完全的胎牛心臟密閉穿刺后,,通過(guò)一系列工藝處理較為終獲得,。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(zhǎng)發(fā)育因子,,一旦胚胎發(fā)育完全這些因子會(huì)自動(dòng)消失。新生牛血清:出生14小時(shí)內(nèi)未進(jìn)食的新生牛,,通常采用頸動(dòng)脈采集血液分離得到的血清,。小牛血清:出生后3天至6月齡小牛動(dòng)脈分離血清。成年牛血清指的是屠宰時(shí)收集全血后分離得到血清,。連云港去外泌體胎牛血清