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細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入,，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑,。電穿孔法,、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù),；生物介導(dǎo)方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點,。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢,。但是,，細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項：血清A,、DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時不能含血清,，因為血清會影響復(fù)合物的形成。B,、一般細(xì)胞對無血清培養(yǎng)可以耐受幾個小時沒問題,，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認(rèn)為會降低轉(zhuǎn)染效率,，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進(jìn)行優(yōu)化,。C、對于對血清缺乏比較敏感的細(xì)胞,，可以使用營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基,，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞,，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑,。有條件的話，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細(xì)胞兩遍,，注意洗的時候要輕,，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細(xì)胞而是轉(zhuǎn)動培養(yǎng)板讓液體滾動在細(xì)胞表面,。如果洗的太厲害,，細(xì)胞又損失一部分,，加了脂質(zhì)體后，細(xì)胞受...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染簡介：轉(zhuǎn)染,，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法,、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例,；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到對數(shù)生長期的細(xì)胞,。南京深圳細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗簡介：實驗材料與器材：1,、材料293T細(xì)胞、MyoD表達(dá)質(zhì)粒和EGFP表達(dá)質(zhì)粒,、DMEM培養(yǎng)基...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用步驟：1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物,。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存,，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞,。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基,。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩,。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。5.加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時,。6.到時后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時~到時后,，根據(jù)細(xì)胞...

DNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟：1.提前現(xiàn)在細(xì)胞鋪板提前現(xiàn)在將細(xì)胞種植在24孔板中,，以轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度在60％左右為宜。2.轉(zhuǎn)染過程⑴將0.8μg的DNA用25μl無血清稀釋液稀釋,，充分混勻,，制成DNA稀釋液。注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM,、無血清DMEM或1640,。⑵將2μlEntransterTM-H4000用25μl無血清稀釋液體稀釋，充分混勻,，制成EntransterTM-H4000稀釋液,。室溫靜置5分鐘。⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中,，充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上）,，室溫靜置15分鐘。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成,。⑷將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到含...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項：1.細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異,。因轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞有毒害作用，細(xì)胞太少,，容易死,。一般轉(zhuǎn)染時，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%,，懸浮細(xì)胞密度為2-4×106細(xì)胞/ml,，確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉(zhuǎn)染效率對細(xì)胞密度很敏感,，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要,。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。細(xì)胞的融合度必須要達(dá)到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉(zhuǎn)染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細(xì)胞系和要表達(dá)的蛋白,。CMV啟動子在大多數(shù)細(xì)胞類型中可以獲得高表達(dá)活性,。同其他啟動子，如SV40和RSV(勞斯肉瘤細(xì)菌)相比,，在BHK-2...

轉(zhuǎn)染效率：線型PEI(LinePEI,LPEI)與其衍生物用作基因轉(zhuǎn)染載體的研究比分枝狀PEI(BranchedPEI,BPEI)要早一些,，過去的研究認(rèn)為在不考慮具體條件，LPEI/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的細(xì)胞毒性較低,，有利于細(xì)胞定位,，因此與BPEI相比應(yīng)該轉(zhuǎn)染效率高一些。但較近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉(zhuǎn)染復(fù)合物,，從而提高轉(zhuǎn)染效率,，但同時細(xì)胞毒性也增大。超很高枝的,、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基,，在染實驗中發(fā)現(xiàn)這種PEI的毒性低,，但轉(zhuǎn)染效率卻較高。GenEscort是采用各種分枝狀和超很高枝狀的小分子PEI與各種含有生理條件下可降解鍵的交聯(lián)劑交聯(lián),，合成出的一系列很高枝的...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染：(1)轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備A.將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物,。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,，使用前還需震蕩，,。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞,。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘,。(4)吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。(5)加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時,。(6)到時后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時,。細(xì)胞轉(zhuǎn)...

轉(zhuǎn)染效率：線型PEI(LinePEI,LPEI)與其衍生物用作基因轉(zhuǎn)染載體的研究比分枝狀PEI(BranchedPEI,BPEI)要早一些，過去的研究認(rèn)為在不考慮具體條件,，LPEI/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的細(xì)胞毒性較低,，有利于細(xì)胞定位，因此與BPEI相比應(yīng)該轉(zhuǎn)染效率高一些,。但較近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉(zhuǎn)染復(fù)合物,，從而提高轉(zhuǎn)染效率，但同時細(xì)胞毒性也增大,。超很高枝的,、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基，在染實驗中發(fā)現(xiàn)這種PEI的毒性低,，但轉(zhuǎn)染效率卻較高,。GenEscort是采用各種分枝狀和超很高枝狀的小分子PEI與各種含有生理條件下可降解鍵的交聯(lián)劑交聯(lián)，合成出的一系列很高枝的...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗的方法有哪些：1.電穿孔法,。通過短暫的高電場電脈沖處理細(xì)胞,，沿細(xì)胞膜的電壓差異會導(dǎo)致細(xì)胞膜的暫時穿孔。DNA被認(rèn)為是穿過孔擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)的。電脈沖和場強(qiáng)的優(yōu)化對于成功的轉(zhuǎn)染非常重要,，因為過高的場強(qiáng)和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞。理論上說電穿孔法可用于各種細(xì)胞,，且不需要另外采購特殊試劑,，但需要昂貴的電轉(zhuǎn)儀。此法每次轉(zhuǎn)染需要更多的細(xì)胞和DNA,，因為細(xì)胞的死亡率高,。每種細(xì)胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進(jìn)行多次優(yōu)化。2.細(xì)菌介導(dǎo)的傳染,。傳染需要將目的基因克隆到特定的細(xì)菌體系中,，經(jīng)過包裝細(xì)胞的包裝得到改造后的細(xì)菌，再進(jìn)行傳染,。優(yōu)點是轉(zhuǎn)染效率特別高,，尤其是難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞、細(xì)胞,。缺點是構(gòu)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染,，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑,。電穿孔法,、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例；化學(xué)介導(dǎo)方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù),；生物介導(dǎo)方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點,。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢,。但是,，細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.準(zhǔn)備不足做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的時候,，在開展正式實驗前要多做預(yù)試驗,，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：脂質(zhì)體的用量、DNA密度,、細(xì)胞密度,、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉(zhuǎn)的時候,，如果電壓太大,，往往會發(fā)生細(xì)胞大量死亡的情況,。不同的細(xì)胞,，需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預(yù)實驗,，多摸索條件,。對于大多數(shù)細(xì)胞來說,，其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外,，就是進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期,。處于對數(shù)生長期的細(xì)胞的抗損傷能力是較強(qiáng)的。細(xì)胞濃度應(yīng)該處于5x106到1x107／mL之間,。每次轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒應(yīng)該控制在4-6μg,，如果﹥10μg，轉(zhuǎn)染效率也較大降低,。震...

轉(zhuǎn)染的注意事項：細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異,。一般轉(zhuǎn)染時，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%,，懸浮細(xì)胞密度為2×106-4×106細(xì)胞/ml時效果較好,。確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉(zhuǎn)染效率對細(xì)胞密度很敏感,，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要,。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。在三種不同密度進(jìn)行細(xì)胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的,，CAT活性也較高,。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了。這些結(jié)果說明,，對于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會因細(xì)胞密度而異轉(zhuǎn)染 ,，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技...

轉(zhuǎn)染方式：細(xì)胞由帶負(fù)電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成，這對大分子物質(zhì)來說是個不可透過的屏障,，比如DNA和RNA的磷酸骨架,，其也帶負(fù)電荷。為了使核酸穿過細(xì)胞膜，研究人員開發(fā)了多種技術(shù),，大致分為三類：化學(xué)方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷,。生物方法---利用基因工程細(xì)菌轉(zhuǎn)染非細(xì)菌基因到細(xì)胞中。物理方法---在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生一個瞬時的孔從而導(dǎo)入DNA,。然而,，沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實驗，理想的方法應(yīng)根據(jù)您的細(xì)胞類型和實驗需要進(jìn)行選擇,，理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細(xì)胞毒性和對正常生理學(xué)的影響較小,，并且易于使用和可重復(fù)性等特點,。陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑，以其適用宿主范圍廣,。濟(jì)南...

大多數(shù)已建立的細(xì)胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達(dá)不同基因組合的細(xì)胞的混合物。細(xì)胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化,，這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化。如果隨時間發(fā)現(xiàn)這種變化,，融化一管新鮮的細(xì)胞可能會恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性,。比如，新鮮融化的NIH3T3細(xì)胞比傳代8次的細(xì)胞表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率,，融化細(xì)胞的進(jìn)一步傳代并沒有降低轉(zhuǎn)染效率,。因此，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低,，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果,。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到對數(shù)生長期的細(xì)胞。廈門細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪里買如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗效率：優(yōu)化細(xì)胞生長狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的原理,、操作步驟以及小技巧：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染操作步驟：(1)細(xì)胞培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿,，向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,，密度過大,，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。(2)轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug質(zhì)粒DNA,。B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體,。分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘,。(3)吸取B液加入至A液中,，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。(4)轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液,。(5)轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻,，37℃溫箱置6~...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項：1.細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異,。因轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞有毒害作用，細(xì)胞太少,，容易死,。一般轉(zhuǎn)染時，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%,，懸浮細(xì)胞密度為2-4×106細(xì)胞/ml,，確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉(zhuǎn)染效率對細(xì)胞密度很敏感,，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要,。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。細(xì)胞的融合度必須要達(dá)到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉(zhuǎn)染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細(xì)胞系和要表達(dá)的蛋白,。CMV啟動子在大多數(shù)細(xì)胞類型中可以獲得高表達(dá)活性,。同其他啟動子，如SV40和RSV(勞斯肉瘤細(xì)菌)相比,，在BHK-2...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑一般會增加細(xì)胞的通透性,，這樣會把血清中的成分帶入細(xì)胞，造成細(xì)胞毒性,。陽離子脂質(zhì)體,，轉(zhuǎn)染的過程是帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。血清中含有大量的蛋白質(zhì),，在轉(zhuǎn)染過程中,，帶負(fù)電的蛋白質(zhì)可能干擾陽離子脂質(zhì)體對核酸的吸附，影響轉(zhuǎn)染效率,。同時,，也會將血清中的蛋白帶入細(xì)胞，引發(fā)細(xì)胞毒性,，故不能有血清轉(zhuǎn)染,。這些轉(zhuǎn)染試劑要求在轉(zhuǎn)染前換無血清培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基,，這其實是為了減輕轉(zhuǎn)染造成的細(xì)胞毒性和轉(zhuǎn)染效率的降低,。轉(zhuǎn)染試劑與細(xì)胞不匹配細(xì)胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細(xì)胞。青島正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑供應(yīng)商細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實驗的幾點建議：1.電場...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑一般會增加細(xì)胞的通透性,，這樣會把血清中的成分帶入細(xì)胞,，造成細(xì)胞毒性,。陽離子脂質(zhì)體，轉(zhuǎn)染的過程是帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞,。血清中含有大量的蛋白質(zhì),，在轉(zhuǎn)染過程中，帶負(fù)電的蛋白質(zhì)可能干擾陽離子脂質(zhì)體對核酸的吸附,，影響轉(zhuǎn)染效率,。同時，也會將血清中的蛋白帶入細(xì)胞,，引發(fā)細(xì)胞毒性,，故不能有血清轉(zhuǎn)染。這些轉(zhuǎn)染試劑要求在轉(zhuǎn)染前換無血清培養(yǎng)基,，轉(zhuǎn)染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基,，這其實是為了減輕轉(zhuǎn)染造成的細(xì)胞毒性和轉(zhuǎn)染效率的降低。大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細(xì)胞分裂而稀釋,。成都細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑生產(chǎn)廠家細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率影響因素：1.細(xì)胞密度一...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.準(zhǔn)備不足做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的時候，在開展正式實驗前要多做預(yù)試驗,，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：脂質(zhì)體的用量、DNA密度,、細(xì)胞密度,、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時間等等。2.電壓過大做電轉(zhuǎn)的時候,，如果電壓太大,，往往會發(fā)生細(xì)胞大量死亡的情況。不同的細(xì)胞,，需要的電壓是不一樣的,。這就要求我們多做預(yù)實驗，多摸索條件,。對于大多數(shù)細(xì)胞來說,，其較佳電壓位于250-1250v/cm。另外,，就是進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期,。處于對數(shù)生長期的細(xì)胞的抗損傷能力是較強(qiáng)的。細(xì)胞濃度應(yīng)該處于5x106到1x107／mL之間,。每次轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒應(yīng)該控制在4-6μg,，如果﹥10μg，轉(zhuǎn)染效率也較大降低,。電...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染,，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法,、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例,；化學(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,，同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是,，細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜,，常常對細(xì)胞類型有...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預(yù)實驗,，比如：HeLa,，293，CHO,，COS7,，MCF－7，HepG2等細(xì)胞,，是否加血清,，對不同的細(xì)胞是有不同的影響的，有些細(xì)胞是可以有血清的,，有些加血清就會受影響,。轉(zhuǎn)染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基，其一因為普通轉(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞的毒性作用大,，其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡,。轉(zhuǎn)染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉(zhuǎn)染后可適時加入,。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢生長,，過晚會引起較多細(xì)胞死亡,。可實時觀察1/5細(xì)胞變圓的時候加入血清直到外源基因在細(xì)胞分裂過程中因各種因素丟失為止,。蘇州正規(guī)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗的方法有哪些：1..電穿孔法,。通過短暫的高電場電脈沖處理細(xì)胞，沿細(xì)胞膜的電壓差異會導(dǎo)致細(xì)胞膜的暫時穿孔,。DNA被認(rèn)為是穿過孔擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)的,。電脈沖和場強(qiáng)的優(yōu)化對于成功的轉(zhuǎn)染非常重要，因為過高的場強(qiáng)和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞,。理論上說電穿孔法可用于各種細(xì)胞,，且不需要另外采購特殊試劑，但需要昂貴的電轉(zhuǎn)儀,。此法每次轉(zhuǎn)染需要更多的細(xì)胞和DNA,，因為細(xì)胞的死亡率高。每種細(xì)胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進(jìn)行多次優(yōu)化,。2.細(xì)菌介導(dǎo)的傳染,。傳染需要將目的基因克隆到特定的細(xì)菌體系中，經(jīng)過包裝細(xì)胞的包裝得到改造后的細(xì)菌,，再進(jìn)行傳染,。重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，較好在轉(zhuǎn)染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液,。徐...

影響轉(zhuǎn)染試驗的因素：細(xì)胞狀態(tài)變化：（1）轉(zhuǎn)染試劑與細(xì)胞不匹配細(xì)胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細(xì)胞，也不是傳代很多次的細(xì)胞,。這是因為細(xì)胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化,。較適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到對數(shù)生長期的細(xì)胞,，細(xì)胞生長旺盛，較容易轉(zhuǎn)染,。（2）把握時機(jī)沒錯,！轉(zhuǎn)染也有適當(dāng)?shù)臅r機(jī)，相比較非分裂細(xì)胞——分裂細(xì)胞往往要比靜止細(xì)胞更易于攝取并表達(dá)外源DNA,。因此對大多數(shù)轉(zhuǎn)染操作而言,，細(xì)胞都在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在種板。同樣重要的是細(xì)胞在種板進(jìn)行轉(zhuǎn)染時不應(yīng)處于過度生長的狀態(tài),，如細(xì)胞數(shù)量過多,，互相疊加，營養(yǎng)物質(zhì)耗竭,，代謝廢物積聚,，轉(zhuǎn)...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染那些事兒：1.選擇傳代次數(shù)較低并處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。對大多數(shù)細(xì)胞而言，均需要在轉(zhuǎn)染當(dāng)天或前現(xiàn)在鋪板,，第二天上午進(jìn)行轉(zhuǎn)染,，48h后收集細(xì)胞進(jìn)行功能檢測。對于原代細(xì)胞,，可用促有絲分裂刺激物進(jìn)行細(xì)胞活化,。2.對于貼壁細(xì)胞，一般要求在轉(zhuǎn)染前一日,，用胰酶處理為單細(xì)胞懸液,，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶，較好在轉(zhuǎn)染前4小時換一次新鮮培養(yǎng)液,。3.支原體污染會嚴(yán)重降低細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率,，且支原體不會像細(xì)菌污染那么明顯，因而轉(zhuǎn)染前可用環(huán)丙沙星處理細(xì)胞以除去支原體,。加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。南京正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑服務(wù)電話細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗的方法有哪些：1..電穿孔法,。通過短暫的高電場電脈沖處理細(xì)...

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實驗的幾點建議：1.電場強(qiáng)度要合適合適的電場強(qiáng)度對于電轉(zhuǎn)染實驗非常重要,，電場強(qiáng)度不能過高，過高會增加細(xì)胞的死亡率,；也不能過低,，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場強(qiáng)值,，實驗前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場強(qiáng)度,。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）,。因為處于對數(shù)生長期的細(xì)胞分裂旺盛,，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差，電轉(zhuǎn)后,，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng),，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA.到時后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液,。南昌正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑銷售廠家細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉(zhuǎn)染效率低...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗的方法有哪些：1..電穿孔法,。通過短暫的高電場電脈沖處理細(xì)胞，沿細(xì)胞膜的電壓差異會導(dǎo)致細(xì)胞膜的暫時穿孔,。DNA被認(rèn)為是穿過孔擴(kuò)散到細(xì)胞內(nèi)的,。電脈沖和場強(qiáng)的優(yōu)化對于成功的轉(zhuǎn)染非常重要，因為過高的場強(qiáng)和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細(xì)胞膜而裂解細(xì)胞,。理論上說電穿孔法可用于各種細(xì)胞,，且不需要另外采購特殊試劑,，但需要昂貴的電轉(zhuǎn)儀。此法每次轉(zhuǎn)染需要更多的細(xì)胞和DNA,，因為細(xì)胞的死亡率高,。每種細(xì)胞電轉(zhuǎn)的條件都需要進(jìn)行多次優(yōu)化。2.細(xì)菌介導(dǎo)的傳染,。傳染需要將目的基因克隆到特定的細(xì)菌體系中,，經(jīng)過包裝細(xì)胞的包裝得到改造后的細(xì)菌，再進(jìn)行傳染,。優(yōu)點是轉(zhuǎn)染效率特別高,，尤其是難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞、細(xì)胞,。缺點是...

轉(zhuǎn)染方式：細(xì)胞由帶負(fù)電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成,，這對大分子物質(zhì)來說是個不可透過的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架,，其也帶負(fù)電荷,。為了使核酸穿過細(xì)胞膜，研究人員開發(fā)了多種技術(shù),，大致分為三類：化學(xué)方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷,。生物方法---利用基因工程細(xì)菌轉(zhuǎn)染非細(xì)菌基因到細(xì)胞中。物理方法---在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生一個瞬時的孔從而導(dǎo)入DNA,。然而,，沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實驗，理想的方法應(yīng)根據(jù)您的細(xì)胞類型和實驗需要進(jìn)行選擇,，理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率,，低細(xì)胞毒性和對正常生理學(xué)的影響較小，并且易于使用和可重復(fù)性等特點,。使用基質(zhì)珠做為固相支持可以使貼壁細(xì)胞懸浮生長,。蕪湖細(xì)胞高效...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染那些事兒：1.設(shè)置陰性和陽性對照：一般在轉(zhuǎn)染后24-48h,靶基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá),?？梢罁?jù)不同的實驗?zāi)康模?4-48h后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測等實驗。2.轉(zhuǎn)染后效率的檢測方法：觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞熒光情況,；qPCR驗證,；WB檢測敲減或過表達(dá)蛋白。3.轉(zhuǎn)染效率低,，可采取以下兩種方法：1)復(fù)轉(zhuǎn)染,，即轉(zhuǎn)染后12-24h再進(jìn)行轉(zhuǎn)染，前提是該細(xì)胞對脂質(zhì)體的耐受性較好,，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡數(shù)較少,。2)通過藥篩來殺死未轉(zhuǎn)入成功的細(xì)胞,，前提是該質(zhì)粒帶有物品抗性的基因。4.電轉(zhuǎn)時,，不同的細(xì)胞需要的電壓是不一樣的,，需要做預(yù)實驗，摸索較佳條件,。對于大多數(shù)細(xì)胞而言,，較佳電壓位于250-1250v/cm。電擊后,，應(yīng)該將DN...

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實驗的幾點建議：1.電場強(qiáng)度要合適合適的電場強(qiáng)度對于電轉(zhuǎn)染實驗非常重要,，電場強(qiáng)度不能過高，過高會增加細(xì)胞的死亡率,；也不能過低,，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場強(qiáng)值,，實驗前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場強(qiáng)度,。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）,。因為處于對數(shù)生長期的細(xì)胞分裂旺盛,，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差，電轉(zhuǎn)后,，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng),，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA.在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,，則各有其特點,。徐州昆明細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑影響轉(zhuǎn)染試驗的因素：細(xì)胞狀態(tài)變化：（...