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細胞轉染的原理、操作步驟以及小技巧：一,、脂質體(Liposome)轉染方法原理脂質體作為體內和體外輸送載體的工具,，已經(jīng)研究的十分普遍，中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA,，借助脂質膜將DNA導入細胞膜內,。帶正電的陽離子脂質體，DNA并沒有預先包埋在脂質體中,，而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,，形成DNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面,，經(jīng)過內吞被導入細胞,。優(yōu)點:與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復性,，它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,，是目前條件下較方便的轉染方法之一瞬時轉染后，可在48h-72h細胞長滿之后,，提取細胞蛋白或者RNA,。鄭州正規(guī)細胞高效轉染試劑...

細胞轉染的注意事項：細胞狀態(tài)這點非常重要,，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態(tài)再做,。有文獻說傳代不要超過17代,。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態(tài)較好，不要用傳了很多代的細胞去做,，細胞的形態(tài)都會發(fā)生變化,。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物,。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化,。如果隨時間發(fā)現(xiàn)這種變化,，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。因此,，如果觀察到轉染效率降低,，可以試著轉染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結果?；蛘撸瑤追N來源于經(jīng)篩選,，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現(xiàn)...

細胞轉染實驗的方法有哪些：1..電穿孔法,。通過短暫的高電場電脈沖處理細胞，沿細胞膜的電壓差異會導致細胞膜的暫時穿孔,。DNA被認為是穿過孔擴散到細胞內的,。電脈沖和場強的優(yōu)化對于成功的轉染非常重要，因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細胞膜而裂解細胞,。理論上說電穿孔法可用于各種細胞,，且不需要另外采購特殊試劑，但需要昂貴的電轉儀,。此法每次轉染需要更多的細胞和DNA,，因為細胞的死亡率高。每種細胞電轉的條件都需要進行多次優(yōu)化,。2.細菌介導的傳染,。傳染需要將目的基因克隆到特定的細菌體系中，經(jīng)過包裝細胞的包裝得到改造后的細菌,，再進行傳染,。對于真核生物，轉染就是原核生物中轉化的同義詞,。石家莊正規(guī)細胞...

轉染的注意事項：培養(yǎng)基中的物品物品,，比如青霉素和鏈霉素,，是影響轉染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒,，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性,，導致轉染效率低,。所以，在轉染培養(yǎng)基中不能使用物品,，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品,。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞,。對于穩(wěn)定轉染,，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑,。另外,，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量,。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養(yǎng)在實驗...

轉染的注意事項：用于蛋白生產(chǎn)的細胞的轉染可以在添加有血清或無血清培養(yǎng)基中進行,。但更傾向于使用無血清培養(yǎng)基表達蛋白,，因為血清蛋白會干擾下游表達蛋白的純化。無血清培養(yǎng)基一般針對某一特定細胞類型優(yōu)化并有幾類無血清培養(yǎng)基不需要添加血清,，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培養(yǎng)基低得多）,。無蛋白培養(yǎng)基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化學成分的培養(yǎng)基不含有蛋白或未知組成的成分,。多種多樣的配方使您可以選擇較適合您應用的一種,。在含血清時轉染的細胞可以適應無血清培養(yǎng)基，無蛋白培養(yǎng)基或限定化學成分的培養(yǎng)基,。在部分情況下（如293-F,，293-H，COS-7和CHO-S）,，對于已適應無血清或無蛋白培...

細胞轉染的注意事項：細胞狀態(tài)這點非常重要,，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態(tài)再做,。有文獻說傳代不要超過17代,。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態(tài)較好，不要用傳了很多代的細胞去做,，細胞的形態(tài)都會發(fā)生變化,。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總染色體重組或基因調控變化等而演化,。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發(fā)現(xiàn)這種變化,，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性,。因此，如果觀察到轉染效率降低,，可以試著轉染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結果,。或者,，幾種來源于經(jīng)篩選,，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現(xiàn)...

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況,。毛博當年做轉染整整半年,，百思不得其解。較后發(fā)現(xiàn),，原來是Lipofectamine2000過期了,。換了之后，立馬成功,。根據(jù)我的經(jīng)驗,，盡量使用開封半年內的，因為過了半年后,，就算沒有過失效期，但是細胞毒性較大增加,，而轉染效率卻較大下降,。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈,。2.未加血清轉染后未及時加入血清,，會導致細胞大量死亡。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基,。根據(jù)毛博的經(jīng)驗,，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候,，較好不要換液,，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息,。但是也不能過早加入...

細胞轉染實驗注意事項：1.如為貼壁生長細胞,，一般要求在轉染前一日,，必須應用胰酶處理成單細胞懸液，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶,，轉染當日的細胞密度以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜,，較好在轉染前4h換一次新鮮培養(yǎng)液。2.用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質,，無RNA和其他化學物質的污染,，OD260/280比值應在1.8以上。3.培養(yǎng)基中的血清在開始準備DNA和陽離子脂質體試劑稀釋液時要使用無血清的培養(yǎng)基,，因為血清會影響復合物的形成,。其實，只要在DNA-陽離子脂質體復合物形成時不含血清,，在轉染過程中是可以使用血清的,。由于脂質體對細胞有一定的毒性，所以轉染時間一般不超過...

細胞轉染操作方法：轉染,，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術,。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉染大致可分為物理介導,、化學介導和生物介導三類途徑,。電穿孔法,、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質體轉染方法,、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法,，有較為原始的原生質體轉染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,，應該具有轉染效率高,、細胞毒性小等優(yōu)點。細菌介導的轉染技術,，是目前轉染效率較高的方法,，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是,，細菌轉染方法的準備程序復雜,，常常對細胞類型有...

轉染的注意事項：培養(yǎng)基中的物品物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對于真核細胞無毒,，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞,。這降低了細胞的活性,，導致轉染效率低。所以,，在轉染培養(yǎng)基中不能使用物品,，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣,，在轉染前也不必潤洗細胞,。對于穩(wěn)定轉染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑,。另外，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長,，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量,。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物,。細胞培養(yǎng)在實驗...

轉染的注意事項：細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或應用而異,。一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%,，懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好,。確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感,，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要,。鋪板細胞數(shù)目的增加可以增加轉染活性和細胞產(chǎn)量。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的,，CAT活性也較高,。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應增加了。這些結果說明,，對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異,。瞬時表達分析檢測未重組質粒DNA上基因的表...

轉染的注意事項：培養(yǎng)基中的物品物品,，比如青霉素和鏈霉素,，是影響轉染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒,，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低,。所以,，在轉染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品,。這樣,，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩(wěn)定轉染,，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，因為這些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外,，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長,，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物,。細胞培養(yǎng)在實驗...

細胞轉染為什么不能加血清：傳統(tǒng)的轉染試劑一般會增加細胞的通透性，這樣會把血清中的成分帶入細胞,，造成細胞毒性,。陽離子脂質體，轉染的過程是帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞,。血清中含有大量的蛋白質,，在轉染過程中，帶負電的蛋白質可能干擾陽離子脂質體對核酸的吸附,，影響轉染效率,。同時，也會將血清中的蛋白帶入細胞,，引發(fā)細胞毒性,，故不能有血清轉染。這些轉染試劑要求在轉染前換無血清培養(yǎng)基,，轉染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基,，這其實是為了減輕轉染造成的細胞毒性和轉染效率的降低。因為DNA攝入效率和表達水平在不同實驗中差異較大,，實驗必須很小心,。金華正規(guī)細胞高效轉染試劑哪里買細胞轉染效率低下的...

細胞轉染為什么不能加血清：不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗,，比如：HeLa,，293，CHO,，COS7,，MCF－7,，HepG2等細胞，是否加血清,，對不同的細胞是有不同的影響的,，有些細胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響,。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,，其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡,。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用,，轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優(yōu)勢生長,，過晚會引起較多細胞死亡,。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清其可降解性對體內應用也具有重要的意義,。徐州正規(guī)細胞高效轉...

如何有效提高細胞轉染實驗效率：1.選擇高效的轉染方法不同轉染試劑有不同的轉染方法,，但大多大同小異。轉染時應跟據(jù)具體轉染試劑推薦的方法,，但也要注意,，因不同實驗室培養(yǎng)的細胞性質不同，質粒定量差異,，操作手法上的差異等,，其轉染效果可能不同，應根據(jù)實驗室的具體條件來確定較佳轉染條件,。2.確保所構建載體的質量,。轉染載體的構建（細菌載體，質粒DNA,，RNA,，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉染結果,。細菌載體對特定宿主細胞傳染效率較高,，但不同細菌載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細胞周期,，如逆轉錄細菌需侵染分裂期的宿主細胞,，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）。除載體構建外,，載體的形態(tài)及大小對轉染效率也有不...

細胞轉染為什么不能加血清：傳統(tǒng)的轉染試劑一般會增加細胞的通透性,，這樣會把血清中的成分帶入細胞，造成細胞毒性,。陽離子脂質體,，轉染的過程是帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。血清中含有大量的蛋白質,，在轉染過程中,，帶負電的蛋白質可能干擾陽離子脂質體對核酸的吸附，影響轉染效率,。同時,，也會將血清中的蛋白帶入細胞，引發(fā)細胞毒性,，故不能有血清轉染,。這些轉染試劑要求在轉染前換無血清培養(yǎng)基，轉染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基,，這其實是為了減輕轉染造成的細胞毒性和轉染效率的降低,。一類是瞬時轉染，一類是穩(wěn)定轉染（很長轉染）,。合肥細胞高效轉染試劑細胞轉染的注意事項：1.細胞鋪板密度用于轉染的較佳...

細胞轉染實驗注意事項：1.如為貼壁生長細胞,，一般要求在轉染前一日，必須應用胰酶處理成單細胞懸液,，重新接種于培養(yǎng)皿或瓶,，轉染當日的細胞密度以70-90%（貼壁細胞）或2×106-4×106細胞/ml（懸浮細胞）為宜，較好在轉染前4h換一次新鮮培養(yǎng)液,。2.用于轉染的質粒DNA必須無蛋白質,，無RNA和其他化學物質的污染，OD260/280比值應在1.8以上,。3.培養(yǎng)基中的血清在開始準備DNA和陽離子脂質體試劑稀釋液時要使用無血清的培養(yǎng)基,，因為血清會影響復合物的形成。其實,，只要在DNA-陽離子脂質體復合物形成時不含血清,，在轉染過程中是可以使用血清的。使用基質珠做為固相支持可以使貼壁細胞懸浮生長,。濟南正...

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉染效率低下,，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當年做轉染整整半年,，百思不得其解,。較后發(fā)現(xiàn)，原來是Lipofectamine2000過期了,。換了之后,，立馬成功。根據(jù)我的經(jīng)驗,，盡量使用開封半年內的,，因為過了半年后,，就算沒有過失效期，但是細胞毒性較大增加,，而轉染效率卻較大下降,。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈,。2.未加血清轉染后未及時加入血清,，會導致細胞大量死亡。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養(yǎng)基,。根據(jù)毛博的經(jīng)驗,，其實也可以在原來的無血清培養(yǎng)基里面滴加血清。這個時候,，較好不要換液,，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息,。但是也不能過早加入...

轉染效率：線型PEI(LinePEI,LPEI)與其衍生物用作基因轉染載體的研究比分枝狀PEI(BranchedPEI,BPEI)要早一些,，過去的研究認為在不考慮具體條件，LPEI/DNA轉染復合物的細胞毒性較低,，有利于細胞定位,，因此與BPEI相比應該轉染效率高一些。但較近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉染復合物,，從而提高轉染效率,，但同時細胞毒性也增大。超很高枝的,、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基,，在染實驗中發(fā)現(xiàn)這種PEI的毒性低，但轉染效率卻較高,。GenEscort是采用各種分枝狀和超很高枝狀的小分子PEI與各種含有生理條件下可降解鍵的交聯(lián)劑交聯(lián),，合成出的一系列很高枝的...

細胞轉染實驗簡介實驗步驟：1、細胞傳代(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),，酒精棉球,，廢液缸，試管架,，微量移液器,，記號筆，培養(yǎng)皿,，離心管,。(2)棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用1ml的PBS溶液洗滌兩次,。(3)用Tip頭加入1mlTrypsin液,，消化1分鐘(37,。C，5%CO2),。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁,，觀察到細胞完全從壁上脫落下來為止。(4)加入1ml的含血清培養(yǎng)基終止反應,。(5)用頭多次吹吸，使細胞完全分散開,。(6)將培養(yǎng)液裝入離心管中,，1000rpm離心5min。(7)用培養(yǎng)液重懸細胞,，細胞計數(shù)后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養(yǎng)皿,。(8)將合適體積完全...

細胞轉染實驗簡介：實驗原理外源基因進入細胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法和細菌介導法,。電擊法是在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入;磷酸鈣法和脂質體法是利用不同的載體物質攜帶質粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進入細胞;細菌法是利用包裝了外源基因的細菌傳染細胞的方法使得其進入細胞,。但是由于電擊法和磷酸鈣法的實驗條件控制較嚴、難度較大;細菌法的前期準備較復雜,、而且可能對于細胞有較大影響;所以現(xiàn)在對于很多普通細胞系,，一般的瞬時轉染方法多采用脂質體法能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內,。重慶正規(guī)細胞高效轉染試劑瞬時轉染和轉染效率的監(jiān)測：基因的瞬時表達在24-...

細胞轉染簡介：轉染,，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,，轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑,。電穿孔法,、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術,；生物介導方法,，有較為原始的原生質體轉染，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術,。理想細胞轉染方法,，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點,。細菌介導的轉染技術,，是目前轉染效率較高的方法,，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是,，細菌轉染方法的準備程序復雜,，常常對細胞類型有很強...

細胞轉染的注意事項：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素,，是影響轉染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,，使物品可以進入細胞,。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低,。所以,，在轉染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品,。這樣,，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩(wěn)定轉染,，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外,，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長,，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量~直到外源基因在細胞分裂過程中因各種因素丟失為止。無錫唐山細胞高效轉染試劑細胞轉染：(1)轉染試劑的準備A.將400u...

細胞轉染的注意事項：1.細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或應用而異,。因轉染試劑對細胞有毒害作用,，細胞太少，容易死,。一般轉染時,，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2-4×106細胞/ml,，確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期,。因為轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要,。鋪板細胞數(shù)目的增加可以增加轉染活性和細胞產(chǎn)量,。細胞的融合度必須要達到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動子在大多數(shù)細胞類型中可以獲得高表達活性,。同其他啟動子,，如SV40和RSV(勞斯肉瘤細菌)相比，在BHK-2...

細胞轉染常用步驟：1.轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物,。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩,。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞,。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑,，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘,。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。5.加入混合液,，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時,。6.到時后,，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時~脂質體轉染法陽離...

細胞轉染簡介：轉染，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術,。隨著基因與蛋白功能研究的深入,，轉染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導,、化學介導和生物介導三類途徑,。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例,；化學介導方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法,、和多種陽離子物質介導的技術,；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術,。對大多數(shù)細胞而言，均需要在轉染當天或前現(xiàn)在鋪板,，第二天上午進行轉染,。重慶細胞高效轉染試劑報價細胞轉染實驗簡介實驗步驟：1、細胞傳代(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上...

細胞轉染的注意事項：轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術,。分為物理介導方法：電穿孔法,、顯微注射和基因；化學介導方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質體轉染方法,、和多種陽離子物質介導的技術,；生物介導方法：有較為原始的原生質體轉染，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術,。理想細胞轉染方法,，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點,。細菌介導的轉染技術,，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢,。但是細菌轉染方法的準備程序復雜,，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及,。其它物理和化學介導的轉染方法,，則各有其特點。需要指出的一點,，無論采用哪種轉染技術,，要獲得較優(yōu)的轉染結果，可能都需要...

轉染方式：細胞由帶負電荷的磷脂雙分子層構成,，這對大分子物質來說是個不可透過的屏障,，比如DNA和RNA的磷酸骨架，其也帶負電荷,。為了使核酸穿過細胞膜,，研究人員開發(fā)了多種技術，大致分為三類：化學方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷,。生物方法---利用基因工程細菌轉染非細菌基因到細胞中,。物理方法---在細胞膜表面產(chǎn)生一個瞬時的孔從而導入DNA。然而,，沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗,，理想的方法應根據(jù)您的細胞類型和實驗需要進行選擇，理想的方法應具有高轉染效率,，低細胞毒性和對正常生理學的影響較小,，并且易于使用和可重復性等特點。果觀察到轉染效率降低,，可以試著轉染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳...

細胞轉染的注意事項：1.細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據(jù)不同的細胞類型或應用而異,。因轉染試劑對細胞有毒害作用，細胞太少,，容易死,。一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2-4×106細胞/ml,，確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期,。因為轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要,。鋪板細胞數(shù)目的增加可以增加轉染活性和細胞產(chǎn)量,。細胞的融合度必須要達到90%才能做啟動子的選擇獲得高轉染活性所需選擇的啟動子依賴于選用的細胞系和要表達的蛋白。CMV啟動子在大多數(shù)細胞類型中可以獲得高表達活性,。同其他啟動子,，如SV40和RSV(勞斯肉瘤細菌)相比，在BHK-2...

細胞轉染,，你至少要掌握以下幾點：主要有下面幾種方法：：化學法：磷酸鈣法,、DEAE-右旋糖苷法、陽離子脂質體法,；物理法：電穿孔法,、顯微注射法、顆粒傳遞法,；細菌介導法：逆轉錄細菌,、腺細菌A.陽離子脂質體法：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。特點：簡單通用,，適用性廣,，轉染效率高,，重復性好,，但轉染時需除血清，轉染效率隨細胞類型變化大,。由于脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會遠大于懸浮細胞,，所以貼壁比懸浮轉染效率要高。懸浮細胞建議使用電穿孔法,。B.電穿孔法：利用高壓電脈沖對細胞膜的干擾,，使其形成利于核酸進入的微孔。蛋白表達和培養(yǎng)基的選擇哺乳動物細胞系合成可溶的,。廣州細胞高效轉染試劑報...