轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異,。一般轉(zhuǎn)染時(shí),，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%，懸浮細(xì)胞密度為2×106-4×106細(xì)胞/ml時(shí)效果較好,。確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長(zhǎng)滿或處于靜止期,。因?yàn)檗D(zhuǎn)染效率對(duì)細(xì)胞密度很敏感，所以在不同實(shí)驗(yàn)間保持一個(gè)基本的傳代步驟很重要,。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量,。在三種不同密度進(jìn)行細(xì)胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高,。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了,。這些結(jié)果說明,，對(duì)于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會(huì)因細(xì)胞密度而異,。震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩,。徐州石家莊細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率影響因素：1.細(xì)胞密度一般來說,，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到60%～80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染可以取得較高的轉(zhuǎn)染效率，過低或過高都會(huì)影響轉(zhuǎn)染效果,。2.細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)這點(diǎn)非常關(guān)鍵,，很多時(shí)候傳代次數(shù)太少或者太多都將導(dǎo)致細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)染試劑敏感度的改變。因此,，為了提高轉(zhuǎn)染效率以及轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性,、降低細(xì)胞毒性，應(yīng)盡量使用適度傳代的細(xì)胞系,，并在不同次實(shí)驗(yàn)時(shí)保持細(xì)胞傳代次數(shù)的一致性,。3.細(xì)胞種類不同細(xì)胞種類的細(xì)胞在做轉(zhuǎn)染時(shí)所需要的轉(zhuǎn)染體系是不同的，不能一種體系用在所有類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)成都細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑價(jià)格再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個(gè)大坑：1.準(zhǔn)備不足做脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的時(shí)候,，在開展正式實(shí)驗(yàn)前要多做預(yù)試驗(yàn)，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,。優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件包括：脂質(zhì)體的用量,、DNA密度、細(xì)胞密度,、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時(shí)間等等,。2.電壓過大做電轉(zhuǎn)的時(shí)候，如果電壓太大，往往會(huì)發(fā)生細(xì)胞大量死亡的情況,。不同的細(xì)胞,，需要的電壓是不一樣的。這就要求我們多做預(yù)實(shí)驗(yàn),，多摸索條件,。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞來說，其較佳電壓位于250-1250v/cm,。另外,，就是進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞的抗損傷能力是較強(qiáng)的,。細(xì)胞濃度應(yīng)該處于5x106到1x107／mL之間,。每次轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒應(yīng)該控制在4-6μg，如果﹥10μg,，轉(zhuǎn)染效率也較大降低,。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：血清A、DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時(shí)不能含血清,，因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成,。B、一般細(xì)胞對(duì)無血清培養(yǎng)可以耐受幾個(gè)小時(shí)沒問題,，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加,，但血清一度曾被認(rèn)為會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對(duì)條件進(jìn)行優(yōu)化,。C,、對(duì)于對(duì)血清缺乏比較敏感的細(xì)胞，可以使用營(yíng)養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基,，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清,。對(duì)血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑,。有條件的話,，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細(xì)胞兩遍，注意洗的時(shí)候要輕,，靠邊緣緩緩加入液體,，然后不要吹吸細(xì)胞而是轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)板讓液體滾動(dòng)在細(xì)胞表面。如果洗的太厲害,，細(xì)胞又損失一部分,，加了脂質(zhì)體后，細(xì)胞受影響就更大了,，死亡細(xì)胞會(huì)增多大部分細(xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個(gè)小時(shí)內(nèi)保持健康,。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的方法有哪些：1.脂質(zhì)體法。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA，借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi),。帶正電的陽離子脂質(zhì)體則不同,，DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電的DNA自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,，形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物,，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞,。脂質(zhì)體法始于1987年,，此法的出現(xiàn)使得轉(zhuǎn)染效率、轉(zhuǎn)染的穩(wěn)定性和可重復(fù)性較大提高,。陽離子脂質(zhì)體細(xì)胞毒性相對(duì)較高,，對(duì)不同的細(xì)胞可能會(huì)干擾細(xì)胞的代謝。2.非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,。較新的納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑,，如Entranster試劑，納米材料,，細(xì)胞毒性小,，轉(zhuǎn)染效率高，漸漸成為各大實(shí)驗(yàn)室的選擇轉(zhuǎn)染試劑,。瞬時(shí)表達(dá)分析檢測(cè)未重組質(zhì)粒DNA上基因的表達(dá),。無錫石家莊細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

因?yàn)镈NA攝入效率和表達(dá)水平在不同實(shí)驗(yàn)中差異較大,，實(shí)驗(yàn)必須很小心,。徐州石家莊細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法：轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù),。隨著基因與蛋白功能研究的深入,，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑,。電穿孔法、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例,；化學(xué)介導(dǎo)方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法,、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù),；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn),。細(xì)菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù),，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì),。但是,，細(xì)菌轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對(duì)細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性,，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及,。徐州石家莊細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑