細胞凍存是將細胞放在低溫環(huán)境,，減少細胞代謝,，以便長期儲存的一種技術(shù),。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一，起到了細胞保種的作用。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,，利用凍存技術(shù)可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗。目前現(xiàn)有技術(shù)中,，細胞凍存液中的主要成分有10％二甲基亞砜(DMSO),、20％～90％胎牛血清(FBS)、剩余組分為完全培養(yǎng)基,。培養(yǎng)基以及FBS可為細胞提供必要的營養(yǎng)物質(zhì),。DMSO是一種滲透性保護劑，能夠降低細胞冰點,，減少冰晶的形成,，從而達到降低細胞損傷的保護效果。但FBS屬于動物源性物質(zhì),，成分比較復(fù)雜,，在臨床應(yīng)用上存在潛在的風(fēng)險，也增加了污染的幾率,，并且由于凍存液中含有動物血清,，會導(dǎo)致凍存液的成分存在不穩(wěn)定的因素。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：可培養(yǎng)板整板凍存,，例如雜交瘤細胞凍存時可節(jié)省篩選過程,。廣州正規(guī)無血清細胞凍存液廠家供應(yīng)

細胞凍存液是如何保護細胞的：當(dāng)溫度進一步下降，細胞內(nèi)外都結(jié)冰,，產(chǎn)生冰晶損傷,。但是如果在溶液中加入冷凍保護劑，則可保護細胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷,。因為冷凍保護劑容易同溶液中的水分子結(jié)合,，從而降低冰點，減少冰晶的形成,，并且通過其摩爾濃度降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,，使細胞免受溶質(zhì)損傷,，細胞得以在較低溫條件下保存,。在復(fù)蘇時，一般以很快的速度升溫,，1-2分鐘內(nèi)即恢復(fù)到常溫,，細胞內(nèi)外不會重新形成較大的冰晶，也不會暴露在高濃度的電解質(zhì)溶液中過長的時間,，從而無冰晶損傷和溶質(zhì)損傷產(chǎn)生,，凍存的細胞經(jīng)復(fù)蘇后仍保持其正常的結(jié)構(gòu)和功能。廣州正規(guī)無血清細胞凍存液廠家供應(yīng)無血清細胞凍存液：凍存細胞復(fù)蘇率在90%以上。

無血清細胞凍存液,，細胞凍存與復(fù)蘇后,，平均活細胞回收比例超過80%。與含血清凍存液比較,，BI無血清凍存液細胞存活率都有較佳的表,，BI無血清細胞凍存液也適用于動物血清培養(yǎng)的細胞凍存。復(fù)蘇細胞：1.將細胞凍存管由液態(tài)氮中取出,，置于37度水浴快速溶解回溫,。此時可準備培養(yǎng)基、無菌15ml離心管,、培養(yǎng)瓶,。2.于生物安全柜內(nèi)，直接以少量培養(yǎng)基反復(fù)沖融,，使細胞團塊化凍,。3.先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基，再將化凍的細胞懸液加入離心管中,。以200~300g,，3分鐘離心收集細胞。4.倒去上清液,，以新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。5.隔天更換新鮮培養(yǎng)基,，并觀察細胞存活狀況,。

細胞凍存液的原理及配制方法：細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種,、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段,。在細胞建株和建系中，及時凍存原始細胞是十分重要的,。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,，雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是必不可少的實驗操作,。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候,，細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實驗失敗,，如果沒有原始細胞的凍存,，則因為上述的意外而前功盡棄。凍存細胞可直接存放于-80℃冰箱,，穩(wěn)定保存數(shù)年,。

細胞凍存,，我們應(yīng)該注意哪些事項：DMSO快速稀釋會對細胞造成滲透性損傷，使存活率下降50%,。對于DMSO凍存的細胞,，復(fù)蘇后應(yīng)緩慢稀釋成細胞懸液：1）凍存液：培養(yǎng)基=1:1稀釋成細胞懸液后離心，然后重懸至培養(yǎng)皿中培養(yǎng),，隔天換液,；2）凍存液：培養(yǎng)基=1:10稀釋成細胞懸液，不用離心,，直接放置到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)2-4小時后,，換液。上述兩種方法都是比較常用的細胞復(fù)蘇方法,，后者更適用于原代細胞或比較難養(yǎng)的細胞,。液氮內(nèi)的細胞凍存較長時間不要超過半年，凍存在液氮中的細胞應(yīng)一段時間內(nèi)進行更替,。一個細胞系在培養(yǎng)一個月后,，可復(fù)蘇一管新的細胞確保其質(zhì)量沒有發(fā)生太大變化，傳代幾次后,，再凍存留種,。細胞凍存管一定要保證完全密封，否則在復(fù)蘇過程中有可能會炸,。重慶無血清細胞凍存液

無血清細胞凍存液,，通用于人和各種動物細胞株。廣州正規(guī)無血清細胞凍存液廠家供應(yīng)

細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是“慢凍快融”,，這樣可以較大限度的保存細胞活力,。目前細胞凍存多用二甲基亞砜（DMSO）作為保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,；緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶對細胞的物理損傷,。復(fù)蘇細胞采用快速融化的方法可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。血清完全細胞凍存液,，通用于各種動物細胞株,。特別配方有效提高細胞存活率和活力。不含動物來源性蛋白,，能減少各類病毒,、霉菌和支原體等污染,，確保凍存細胞安全,。適合用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞,。廣州正規(guī)無血清細胞凍存液廠家供應(yīng)