TOPTICAFemtoFiberultra920超快光纖激光器是一種易于操作且無需維護(hù)的激光系統(tǒng),。其輸出波長為920nm,，非常適合常規(guī)熒光基團(tuán)（如GFP，eGFP,，Eosin,，GCaMP，CFP,，Calcein或者Venus）的雙光子激發(fā),。能給熒光基團(tuán)提供比較高的峰值功率，常用于神經(jīng)科學(xué)和其他與激光有關(guān)的生物光子學(xué)學(xué)科,。而且其獨特設(shè)計（制造簡單且經(jīng)濟(jì)高效的光源）對雙光子熒光顯微鏡發(fā)展的革新具有潛在的可能,。在雙光子顯微鏡中，峰值功率就是亮度,！如果您希望獲得比較好的圖像亮度,，那么你就需要短脈沖，高功率,，較重要的是需要干凈的時間脈沖形狀,。FemtoFiberultra920具有足夠高的輸出功率，較短的脈沖和獨特的Clean-Pulse技術(shù),，以及具有相對比較高的峰值功率,，使得其在雙光子顯微鏡中可以實現(xiàn)****的亮度，而不會對樣品造成不必要的加熱,。FemtoFiberultra920交鑰匙,，完全集成的色散補(bǔ)償（可確保樣品處的脈沖較短），內(nèi)置的功率控制,，操作直觀以及其堅固而緊湊的設(shè)計,，使該系統(tǒng)具有極為友好的用戶體驗，是非線性顯微鏡應(yīng)用的較好解決方案,。例如熒光蛋白的雙光子激發(fā)和基于SHG的對比機(jī)制,。雙光子顯微鏡還可以對一些具有特性的染料細(xì)胞進(jìn)行實驗，還有一些短波長可以利用雙光子特性進(jìn)行特定實驗,。熒光激光雙光子顯微鏡價格

雙光子顯微鏡為什么穿透能力強(qiáng),？生物組織在近紅外波段存在兩個窗口,第1個近紅外窗口對應(yīng)波長在700nm-900nm,第2個近紅外窗口對應(yīng)波長在1000nm-1400nm之間。舉例說明就是單晶硅對于可見光幾乎是不透明的，但是對于紅外波段就像是“水晶”一樣通透性很好了,。原因有兩點：1.生物組織對紅外光的吸收弱,，對可見光吸收強(qiáng)。類似的,，平時用手電筒照射手指,，會看到手通透紅亮，也是由于生物組織對長波長的紅光吸收少,。2.生物組織對紅外光的散射弱,。因為瑞利散射的強(qiáng)度反比于波長λ的四次方。類似的,，早晨的太陽非常紅,，也就是因為長波長的紅光穿透力更強(qiáng)。這兩點共同導(dǎo)致長波長的紅外光比可見光對生物組織的穿透能力強(qiáng),。美國investigator雙光子顯微鏡成像原理雙光子顯微鏡的原理是什么,？

從雙光子的原理和特點我們就可以明顯的得出雙光子的優(yōu)點：☆光損傷小：由于雙光子顯微鏡使用的是可見光或近紅外光作為激發(fā)光源,，這一波段的光對細(xì)胞和組織的光損傷小,，適用于長時間的研究；☆穿透能力強(qiáng)：相對于紫外光,，可見光和近紅外光都具有更強(qiáng)的穿透能力,，因而受生物組織散射的影響更小，解決對生物組織中深層物質(zhì)的層析成像研究問題,；☆高分辨率：由于雙光子吸收截面很小,，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光，雙光子吸收只局限于焦點處的體積約為波長3次方的范圍內(nèi),；☆漂白區(qū)域?。河捎诩ぐl(fā)只存在于交點處，所以焦點以外的區(qū)域都不會發(fā)生光漂白現(xiàn)象,；☆熒光收集率高：與共聚焦成像相比,，雙光子成像不需要光學(xué)濾波器（共焦），這樣就提高了對熒光的收集率,，而收集率的提高直接導(dǎo)致圖像對比度的提高,；☆圖像對比度高：由于熒光波長小于入射波長，因而瑞利散射產(chǎn)生的背景噪聲只有單光子激發(fā)時的1/16,，明顯降低了散射的干擾,；☆光子躍遷具有很強(qiáng)的選擇激發(fā)性，所以可以對生物組織中一些特殊物質(zhì)進(jìn)行成像研究,；

雙光子顯微鏡的基本原理是：在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收 2 個長波長的光子,，在經(jīng)過一個很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時間后，發(fā)射出一個波長較短的光子,；其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的,。雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，為了不損傷細(xì)胞,，雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器,。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,，其脈沖寬度只有 100 飛秒,，而其周期可以達(dá)到 80至100兆赫茲。在使用高數(shù)值孔徑的物鏡將脈沖激光的光子聚焦時,，物鏡的焦點處的光子密度是比較高的,，雙光子激發(fā)只發(fā)生在物鏡的焦點上，所以雙光子顯微鏡不需要共聚焦,，提高了熒光檢測效率,。雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖器。

雙光子顯微鏡的基本原理是：在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收 2 個長波長的光子,，在經(jīng)過一個很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時間后，發(fā)射出一個波長較短的光子,；其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的,。雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，為了不損傷細(xì)胞,，雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器,。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量，其脈沖寬度只有 100 飛秒,，而其周期可以達(dá)到 80至100兆赫茲,。在使用高數(shù)值孔徑的物鏡將脈沖激光的光子聚焦時，物鏡的焦點處的光子密度是比較高的,，雙光子激發(fā)只發(fā)生在物鏡的焦點上,，所以雙光子顯微鏡不需要共聚焦***，提高了熒光檢測效率,。雙光子顯微鏡還可以對一些具有雙光子特性的染料細(xì)胞進(jìn)行特定實驗,；國內(nèi)激光熒光雙光子顯微鏡成像技術(shù)

雙光子顯微鏡已延伸到各個領(lǐng)域研究中，它能對樣品進(jìn)行三維觀察,。熒光激光雙光子顯微鏡價格

后續(xù)實驗使用碘化丙啶(PI)來指示細(xì)胞在7,、8、9和10分鐘的延時觀察后的損傷情況,，來驗證該光學(xué)系統(tǒng)對活細(xì)胞長期觀察的適用性,。在觀察期間,，88個焦點以100毫秒的曝光時間，曝光間隔1s照射樣品,，激發(fā)強(qiáng)度為3.21×104W/cm2,，激發(fā)波長為525nm，使用前文提到的60×物鏡及1.0AU孔徑,，圖5(a)-(d)為引入PI的成像圖,，(e)-(h)為相應(yīng)的相應(yīng)襯度圖。改變激發(fā)條件為每照射500ms間隔5s,，得到相應(yīng)的(i)-(p),。由圖像可知，延時觀察小于8分鐘的情況下不造成可見細(xì)胞損傷,，對于實際3D延時成像,，由于焦平面是移動的，所以預(yù)期細(xì)胞存活時間會更長,，可見這是一種在3D在體延時成像中具有很大優(yōu)勢的成像方案,。熒光激光雙光子顯微鏡價格