包含鈣離子指示劑的細胞可以通過熒光顯微鏡(fluorescencemicroscope)觀測,，然后通過CCD攝像機捕捉、記錄圖像?，F(xiàn)在鈣成像技術主要在以下幾類神經(jīng)科學研究方面有廣泛應用：1.記錄培養(yǎng)的神經(jīng)元的活動,。2.記錄腦片上神經(jīng)元的活動。記錄神經(jīng)元的活動,。由于離體實驗本身的限制,，現(xiàn)在越來越多的神經(jīng)方面科學家傾向于做在體鈣成像實驗，希望能得到更準確且更能反應生理狀況的數(shù)據(jù),。得益于雙光子熒光顯微鏡的發(fā)展,，現(xiàn)在在實驗動物處于huoti狀態(tài)下的鈣成像技術取得了飛速進展。4.記錄神經(jīng)元樹突和樹突棘（spine）的活動,。由于對于實驗精度的要求,，有些科學家不僅只想記錄單個神經(jīng)元的反應，他們還想更確切地知道神經(jīng)元上哪些樹突和樹突棘參與了某個行為,，也就是說他們需要在huoti條件下,，對單根樹突以及某些spine進行鈣成像記錄實驗。由于雙光子熒光顯微鏡和GCaMP6基因編碼鈣離子指示劑的發(fā)展,，現(xiàn)在,，對樹突和樹突棘用鈣成像實驗進行記錄也成為了可能。隨著熒光顯微鏡技術的迅速發(fā)展,，在體鈣成像技術得到了蓬勃發(fā)展,。北京光遺傳鈣成像大概費用

鈣離子在很多生理活動中都發(fā)揮著重要作用,，除了在肌肉細胞收縮中扮演著重要角色，鈣離子也是神經(jīng)元活動的重要“風向標”之一：當神經(jīng)元膜電位發(fā)生去極化,，產(chǎn)生的動作電位傳導到神經(jīng)元軸突末梢時,，細胞膜上的電壓門控鈣離子通道打開，大量鈣離子內(nèi)流,，包含神經(jīng)遞質(zhì)的囊泡由突觸前膜釋放至后膜,，下游神經(jīng)元就得以接受到上游的信號。因此,，鈣離子成像可以追蹤神經(jīng)元動作電位,，從而幫助我們了解神經(jīng)元集群的活動，可以用于感知覺,，學習記憶,，社會性行為等各種各樣的研究中。北京超微顯微鈣成像價位通過鈣成像技術檢測活動動物記錄神經(jīng)元的活動,。

目前可用的指示劑較多,，根據(jù)熒光光譜、與鈣離子親和力及其化學特性的不同大致分為化學性鈣離子指示劑和基因編碼鈣離子指示劑,。前者指可特異性與鈣離子結合的小分子,，常用的有fura-2、indo-1等,；而后者主要指來源于綠色熒光蛋白GFP及其變異體的蛋白質(zhì),，可與鈣調(diào)蛋白和肌球蛋白輕鏈激酶M13域結合，常用的有GCaMP,、TN-XXL等,，其中GCaMP5G和GCaMP6被廣泛應用于在體鈣成像研究中。生物熒光蛋白：Aequorin是水母熒光素（coelenterazine）通過硫酸酯鍵或過氧化鍵緊緊連到脫輔水母發(fā)光蛋白上形成的,，遇到鈣離子就發(fā)出470nm藍光,，可以作為鈣離子的檢測試劑；化學鈣離子指示劑：Fura-2可在紫外光下被jihuo且發(fā)射出505-520nm光,；基于FRET的基因編碼的鈣指示劑,；單個熒光基因編碼的鈣指示劑。

目前有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法,，且都可以用于體內(nèi)和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個神經(jīng)元中,。此方法方便實驗者控制單個神經(jīng)元內(nèi)的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高,。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負載神經(jīng)元，觀察對象為一群神經(jīng)元,。盡管此方法可能導致一些膠質(zhì)細胞也被指示劑所標記,，但提高了整體神經(jīng)元的標記百分比,，使研究者得以觀察到一群神經(jīng)元內(nèi)動作電位相關性的活動。第三種也較為常用,，通過病毒轉染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑,。（A）單細胞注射法；（B）network loading法,；（C）通過病毒轉染使其基因編碼鈣離子指示劑（expression of genetically encoded calcium indicators, GECI）有了鈣成像技術,，原本悄無聲息的神經(jīng)活動就變成了一幅斑斕閃爍的壯觀影像。

靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細胞內(nèi)鈣離子濃度約為50-100nM,，而細胞興奮時鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍,，增加的鈣離子對于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質(zhì)的過程必不可少。眾所周知,，只有游離鈣才具有生物學活性,，而細胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定，同時也受鈣結合蛋白的影響,。細胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種,，其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體,、煙堿型膽堿能受體（nAChR）和瞬時受體電位C型通道（TRPC）等,。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來，以反映神經(jīng)元活性,。該方法可以同時觀察多個功能或位置相關的腦細胞,。鈣成像系統(tǒng)集成自動控制和精確計時的多模式輸入端口。深圳在體鈣成像聯(lián)系方式

鈣成像技術發(fā)現(xiàn)鈣離子產(chǎn)生各種各樣的胞內(nèi)信號,。北京光遺傳鈣成像大概費用

大家都知道,，只有游離鈣才具有生物學活性，而細胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定,，同時也受鈣結合蛋白的影響,。細胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種，其中包括電壓門控鈣離子通道,、離子型谷氨酰胺受體,、煙堿型膽堿能受體（nAChR）和瞬時受體電位C型通道（TRPC）等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強度表現(xiàn)出來,，以反映神經(jīng)元活性,。該方法可以同時觀察多個功能或位置相關的腦細胞。北京光遺傳鈣成像大概費用

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