指示劑是如何負(fù)載細(xì)胞,，目前有三種在神經(jīng)元上填充鈣離子指示劑的方法,，且都可以用于體內(nèi)和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個(gè)神經(jīng)元中,。此方法方便實(shí)驗(yàn)者控制單個(gè)神經(jīng)元內(nèi)的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高,。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負(fù)載神經(jīng)元，觀(guān)察對(duì)象為一群神經(jīng)元,。盡管此方法可能導(dǎo)致一些膠質(zhì)細(xì)胞也被指示劑所標(biāo)記,，但明顯提高了整體神經(jīng)元的標(biāo)記百分比,，使研究者得以觀(guān)察到一群神經(jīng)元內(nèi)動(dòng)作電位相關(guān)性的活動(dòng),。第三種也較為常用，通過(guò)病毒轉(zhuǎn)染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑,。（A）單細(xì)胞注射法,；（B）networkloading法；（C）通過(guò)病毒轉(zhuǎn)染使其基因編碼鈣離子指示劑（expressionofgeneticallyencodedcalciumindicators,GECI）雙光子顯微鏡有哪些分類(lèi)呢,？進(jìn)口2PPLUS雙光子顯微鏡聯(lián)系方式

共聚焦顯微可以呈現(xiàn)這么漂亮的圖像,，是不是什么樣品都可以用共聚焦顯微鏡拍拍拍.....得到各種各樣清晰漂亮的圖像呢？答案是否定的,，任何事物都有優(yōu)缺點(diǎn),，何況一臺(tái)儀器呢，共聚焦顯微鏡也是有自己的局限,共聚焦有哪些局限呢：1.共聚焦顯微鏡只能拍攝約200um以?xún)?nèi)的的樣品，對(duì)于厚的或者樣品不能進(jìn)拍攝,；2. 共聚焦顯微鏡由于是逐點(diǎn)進(jìn)行掃描,，對(duì)樣品的光毒性還是比較大的,，特別是拍攝活細(xì)胞樣品時(shí)就更容易對(duì)樣品進(jìn)行淬滅,；3. 由于光照射的區(qū)域幾乎能通過(guò)這個(gè)Z軸的層面,，所以對(duì)于空間定點(diǎn)光刺激的實(shí)驗(yàn)定點(diǎn)位置就不是特別精確,；并且激光共聚焦顯微鏡沒(méi)有純紫外進(jìn)行激發(fā)，對(duì)于一些特殊激發(fā)波長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn),，效率非常低。進(jìn)口2PPLUS雙光子顯微鏡聯(lián)系方式雙光子顯微鏡為什么穿透能力強(qiáng)?

雙光子顯微鏡的基本原理是：在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時(shí)吸收 2 個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光子,，在經(jīng)過(guò)一個(gè)很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時(shí)間后,，發(fā)射出一個(gè)波長(zhǎng)較短的光子,；其效果和使用一個(gè)波長(zhǎng)為長(zhǎng)波長(zhǎng)一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的,。雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，為了不損傷細(xì)胞,，雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,，其脈沖寬度只有 100 飛秒,，而其周期可以達(dá)到 80至100兆赫茲。在使用高數(shù)值孔徑的物鏡將脈沖激光的光子聚焦時(shí),，物鏡的焦點(diǎn)處的光子密度是比較高的，雙光子激發(fā)只發(fā)生在物鏡的焦點(diǎn)上,，所以雙光子顯微鏡不需要共聚焦,，提高了熒光檢測(cè)效率,。

在2020年12月22日，臨研所,、病理科和科研處邀請(qǐng)北京大學(xué)王愛(ài)民副教授做了題目為“新一代微型雙光子顯微成像系統(tǒng)介紹及其在臨床醫(yī)療診斷”的學(xué)術(shù)報(bào)告,。學(xué)術(shù)報(bào)告由臨研所醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究平臺(tái)潘琳老師主持,。王愛(ài)民，北京大學(xué)信息科學(xué)技術(shù)學(xué)院副教授,，畢業(yè)于北京大學(xué)物理系，獲學(xué)士、碩士學(xué)位,，后于英國(guó)巴斯大學(xué)物理系獲博士學(xué)位。該研究組研發(fā)的微型雙光子顯微鏡,，第1次在國(guó)際上獲得了小鼠大腦神經(jīng)元和神經(jīng)突觸清晰穩(wěn)定的動(dòng)態(tài)信號(hào),，該成果獲得了2017年度“中國(guó)光學(xué)進(jìn)展”和“中國(guó)科學(xué)進(jìn)展”，并被Nature Methods評(píng)為2018年度“年度方法--無(wú)限制行為動(dòng)物成像”。目前，該研究組正在研究新一代雙光子顯微成像技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用,，為未來(lái)即時(shí)病理,、離體組織檢測(cè)、術(shù)中診斷等提供新的影像手段和分析方法,。雙光子顯微鏡使用的是高能量鎖模脈沖器。

雙光子顯微鏡是結(jié)合了雙光子激發(fā)技術(shù)和激光掃描共聚顯微鏡的一種新型熒光顯微鏡，其原理大致是這樣的：首先,，讓我們來(lái)看看什么是熒光顯微鏡,。熒光顯微鏡是以紫外線(xiàn)為光源，照射被檢物體上的熒光物質(zhì)或是熒光染料,，使其發(fā)出熒光,。相比普通光學(xué)顯微鏡，熒光顯微鏡運(yùn)用了波長(zhǎng)更短的紫外線(xiàn),，再將可見(jiàn)光過(guò)濾掉,，提高了分辨力率。而當(dāng)被檢物體過(guò)厚時(shí),，從不同深度發(fā)出的熒光都會(huì)打在物鏡上,，使觀(guān)察到的像模糊,、發(fā)虛,，無(wú)法清楚的知道被檢物體的結(jié)構(gòu)。而激光掃描共聚顯微鏡就是在熒光顯微鏡的基礎(chǔ)上,，增加了激光掃描裝置,，從而解決了上述問(wèn)題。激光共聚掃描顯微鏡脫離了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的場(chǎng)光源和局部平面成像模式,，采用激光束作光源,，激光束經(jīng)照明孔,，經(jīng)由分光鏡反射至物鏡，并聚焦于樣品上,，對(duì)標(biāo)本焦平面上每一點(diǎn)進(jìn)行掃描,。組織樣品中的熒光物質(zhì)受到刺激后發(fā)出的熒光經(jīng)原來(lái)入射光路直接反向回到分光鏡，通過(guò)探測(cè)孔時(shí)先聚焦,，然后被光探頭收集,，轉(zhuǎn)化為信號(hào)輸送到計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理。這個(gè)裝置能讓通過(guò)探測(cè)***的只有焦平面上發(fā)出的熒光,，使成像更為清晰準(zhǔn)確,，同時(shí)通過(guò)改變物鏡的焦距，能對(duì)不同焦平面進(jìn)行掃描,，通過(guò)計(jì)算機(jī)繪出普通顯微鏡無(wú)法觀(guān)測(cè)的三維圖像,。雙光子顯微鏡能夠進(jìn)行指標(biāo)成像；雙光子顯微鏡成像視野是多少

用雙光子顯微鏡看看你的皮膚有沒(méi)有重?zé)ㄐ律?；進(jìn)口2PPLUS雙光子顯微鏡聯(lián)系方式

由于具有較高輸出功率的光源可以提高成像速度,，在我們的實(shí)驗(yàn)中，時(shí)間分辨率主要是受OPO輸出可見(jiàn)光激光功率的限制,。盡管在單點(diǎn)掃描系統(tǒng)中,，v2PE激發(fā)會(huì)使得空間分辨率提高，但多聚焦v2PE顯微鏡具有與1PE多聚焦顯微鏡近乎相同的橫向分辨率,，這主要是多聚焦成像和單點(diǎn)掃描技術(shù)之間的差異造成的,。由于v2PE的激發(fā)體積小于1PE，引入圖像掃描技術(shù)可以進(jìn)一步提高空間分辨率,，這種技術(shù)需要通過(guò)在陣列前引入額外的微透鏡陣列來(lái)實(shí)現(xiàn),。除此之外，由于可見(jiàn)光區(qū)域的共振效應(yīng),，可能會(huì)產(chǎn)生光漂白,，因而為了延長(zhǎng)觀(guān)察時(shí)間，系統(tǒng)還需要對(duì)激發(fā)強(qiáng)度和曝光時(shí)間做進(jìn)一步優(yōu)化,。進(jìn)口2PPLUS雙光子顯微鏡聯(lián)系方式

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