Flip-Tip翻轉(zhuǎn)技術(shù),、將一定密度的細(xì)胞懸液灌注在玻璃電極中,,下降到電極前列的單個(gè)細(xì)胞通過(guò)在電極外施加負(fù)壓可以與玻璃電極前列形成穩(wěn)定的高阻封接,打破露在玻璃電極前列開(kāi)口外的細(xì)胞膜就形成了全細(xì)胞記錄模式,。德國(guó)Flyion公司的Flyscreen8500系統(tǒng)采用的就是這一技術(shù),,其通量比較高為6,,即一次可同時(shí)記錄6個(gè)細(xì)胞。它的***特點(diǎn)是∶(1)仍然采用玻璃毛坯作為電極(2)藥物施加微量,、快速,。SealChip技術(shù);完全摒棄了玻璃電極,而是采用SealChip平面電極芯片一定密度的細(xì)胞懸液灌注在芯片上面,,隨機(jī)下降到芯片上約1-2μm的孔上并在自動(dòng)負(fù)壓的吸引下形成高阻封接,,打破孔下面的細(xì)胞膜形成全細(xì)胞記錄模式。采用這一技術(shù)的美國(guó)Axon(MDS)公司的PatchXpress7000A系統(tǒng)是高通量全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)的典范,,是離子通道藥物研發(fā)的**性工具,,在國(guó)外實(shí)驗(yàn)室和制藥廠***用于hERG通道藥理學(xué)的研究。其通量比較高為16,,即一次可同時(shí)記錄16個(gè)細(xì)胞同時(shí),,其藥物施加微量、快速,,不僅用于藥物篩選,,還大量用于離子通道的基礎(chǔ)研究。膜片鉗技術(shù)已成為研究離子通道的"金標(biāo)準(zhǔn)",。芬蘭可升級(jí)膜片鉗高阻抗封接
ePatch雖然設(shè)備非常小巧,,但功能完備,傳統(tǒng)膜片鉗設(shè)備能做的實(shí)驗(yàn),,用ePatch幾乎都能做,。具有voltage-clamp,current-clamp,,zero current-clamp三種模式,,自動(dòng)電極電壓飄移補(bǔ)償,C-fast-C-slow-R-series-P/N補(bǔ)償,,Bridge balance補(bǔ)償?shù)裙δ?。可以做全?xì)胞記錄也可以做單通道記錄,,膜片鉗技術(shù)常做的離子通道電流,,突觸后電流,動(dòng)作電位檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)都能輕松實(shí)現(xiàn),。公司還為此開(kāi)發(fā)了友好的控制和記錄軟件,,筆者上手接觸了一下,,發(fā)現(xiàn)跟AXON的軟件類(lèi)似,并且程序編輯更為簡(jiǎn)單易用,。所記錄到的數(shù)據(jù)可以直接使用Clampfit進(jìn)行分析,,可以說(shuō)對(duì)于使用過(guò)AXON設(shè)備的膜片鉗工作者來(lái)說(shuō),上手毫無(wú)難度,。進(jìn)口多通道膜片鉗市場(chǎng)價(jià)在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時(shí),,記錄到ACh啟動(dòng)的單通道離子電流,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù),。
膜片鉗技術(shù)原理:膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個(gè)離子通道,、面積為幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜通過(guò)負(fù)壓吸引封接起來(lái)(見(jiàn)右圖),由于電極前列與細(xì)胞膜的高阻封接,,在電極前列籠罩下的那片膜事實(shí)上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離,,因此,此片膜內(nèi)開(kāi)放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管,,用一個(gè)極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測(cè)量此電流強(qiáng)度,,就單一離子通道電流膜片鉗技術(shù)的建立,對(duì)生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革,。這是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的(或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù),。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起,同時(shí)又將神經(jīng)科學(xué)的不同分野必然地融匯在一起,,改變了既往各個(gè)分野互不聯(lián)系,、互不滲透,阻礙人們較全認(rèn)識(shí)能力的弊端,。這一技術(shù)的發(fā)現(xiàn)和基因克隆技術(shù)并架齊驅(qū),,給生命科學(xué)研究帶來(lái)了巨大的前進(jìn)動(dòng)力。
電壓鉗的原理∶用兩根前列直徑0.5um的電極插入細(xì)胞內(nèi),,一根電極用作記錄電極以記錄跨膜電位,,用另一根電極作為電流注入電極,以固定膜電位,。從而實(shí)現(xiàn)固定膜電位的同時(shí)記錄膜電流,。電位記錄電極引導(dǎo)的膜電位(Vm)輸入電壓鉗放大器的負(fù)輸入端,而人為控制的指令電位(Vc)輸入正輸入端,,放大器的正負(fù)輸入端子等電位,,向正輸入端子施加指令電位(Vc)時(shí),經(jīng)過(guò)短路負(fù)端子可使膜片等電較,,即Vm=Vc,,從而達(dá)到電位鉗制的目的,并可維持一定的時(shí)間,。Vc的不同變化將導(dǎo)致Vm的變化,,從而引起細(xì)胞膜上電壓依賴性離子通道的開(kāi)放,,通道開(kāi)放引起的離子流反過(guò)來(lái)又引起Vm的變化,致使Vm≠Vc,,Vc與Vm的任何差值都會(huì)導(dǎo)致放大器有電壓輸出,,將相反極性的電流注入細(xì)胞,以使Vc=Vm,,注入電流的大小與跨膜離子流相等,但方向相反,。因而注入的電流被認(rèn)為是標(biāo)本興奮時(shí)的跨膜電流值(通道電流),。對(duì)離子通道功能的研究,主要采用記錄離子通道電流來(lái)間接反映離子通道功能,。
對(duì)藥物作用機(jī)制的研究,,在通道電流記錄中,可分別于不同時(shí)間,、不同部位(膜內(nèi)或膜外)施加各種濃度的藥物,,研究它們對(duì)通道功能的可能影響,了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動(dòng)物生理功能的分子機(jī)理,。這是目前膜片鉗技術(shù)應(yīng)用普遍的領(lǐng)域,,既有對(duì)西藥藥物機(jī)制的探討,也普遍用在重要藥理的研究上,。如開(kāi)麗等報(bào)道細(xì)胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測(cè)到人參二醇組皂苷可控制正常和“缺血”誘導(dǎo)的大鼠大腦皮層神經(jīng)元L-型鈣通道的開(kāi)放,,從而減少鈣內(nèi)流,對(duì)缺血細(xì)胞可能有保護(hù)作用,。陳龍等報(bào)道采用細(xì)胞貼附式單通道記錄法發(fā)現(xiàn)烏頭堿對(duì)培養(yǎng)的Wistar大鼠心室肌細(xì)胞L-型鈣通道有阻滯作用,。膜電導(dǎo)測(cè)定的依據(jù)是電學(xué)中的歐姆定律。芬蘭可升級(jí)膜片鉗高阻抗封接
全細(xì)胞膜片鉗記錄是應(yīng)用較早,,也是普遍的鉗位技術(shù),。芬蘭可升級(jí)膜片鉗高阻抗封接
膜片鉗在通道研究中的重要作用用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開(kāi)閉時(shí)程、區(qū)分離子通道的離子選擇性,、同時(shí)可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,,并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計(jì)算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開(kāi)放概率,還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對(duì)離子通道開(kāi)閉及通道電流的影響等,。同時(shí)用于研究細(xì)胞信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制,。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究,。利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點(diǎn)的分析,。如神經(jīng)元煙堿受體為配體門(mén)控性離子通道,膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)通過(guò)記錄煙堿誘發(fā)電流,,可直觀地反映出神經(jīng)元煙堿受體活動(dòng)的全過(guò)程,,包括受體與其激動(dòng)劑和拮抗劑的親和力,,離子通道開(kāi)放、關(guān)閉的動(dòng)力學(xué)特征及受體的失敏等活動(dòng),。使用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)觀察拮抗劑對(duì)煙堿受體激動(dòng)劑量效曲線的影響,,來(lái)確定其作用的動(dòng)力學(xué)特征。然后根據(jù)分析拮抗劑對(duì)受體失敏的影響,,拮抗劑的作用是否有電壓依賴性,、使用依賴性等特點(diǎn),可從功能上區(qū)分拮抗劑在煙堿受體上的不同作用位點(diǎn),,即判斷拮抗劑是作用在受體的激動(dòng)劑識(shí)別位點(diǎn),,離子通道抑或是其它的變構(gòu)位點(diǎn)上。芬蘭可升級(jí)膜片鉗高阻抗封接
因斯蔻浦(上海)生物科技有限公司在nVista,,nVoke,,3D bioplotte,invivo一直在同行業(yè)中處于較強(qiáng)地位,,無(wú)論是產(chǎn)品還是服務(wù),,其高水平的能力始終貫穿于其中。公司位于中山北路1759號(hào)浦發(fā)廣場(chǎng)D座803,,成立于2019-05-27,,迄今已經(jīng)成長(zhǎng)為儀器儀表行業(yè)內(nèi)同類(lèi)型企業(yè)的佼佼者。公司主要提供生物科技,,醫(yī)藥科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā),、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù),、技術(shù)轉(zhuǎn)讓?zhuān)瑢?shí)驗(yàn)室設(shè)備,、儀器儀表、醫(yī)療器械,、計(jì)算機(jī),、軟件及輔助設(shè)備銷(xiāo)售,計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理,,貨物及技術(shù)進(jìn)出口業(yè)務(wù),。 成像平臺(tái): 1. Inscopix自由活動(dòng)超微顯微成像系統(tǒng) 2. DiveScope多通道內(nèi)窺鏡系統(tǒng) 3. 雙光子顯微鏡 動(dòng)物行為學(xué)平臺(tái): 1. PiezoSleep無(wú)創(chuàng)睡眠檢測(cè)系統(tǒng) 2. 自身給藥、條件恐懼,、斯金納,、睡眠剝奪、跑步機(jī),、各類(lèi)經(jīng)典迷宮等 神經(jīng)電生理: 1.NeuroNexus神經(jīng)電極 2.多通道電生理信號(hào)采集系統(tǒng) 3.膜片鉗系統(tǒng) 4.AO功能神經(jīng)外科臨床電生理平臺(tái) 顯微細(xì)胞: 1. UnipicK單細(xì)胞挑選及顯微切割系統(tǒng) 科研/臨床級(jí)3D打印 1. 德國(guó)envisionTEC 3D Bioplotter生物打印機(jī) 2. 韓國(guó)Invivo醫(yī)療級(jí)生物打印機(jī)等,。等領(lǐng)域內(nèi)的業(yè)務(wù),產(chǎn)品滿意,服務(wù)可高,,能夠滿足多方位人群或公司的需要,。滔博生物將以精良的技術(shù)、優(yōu)異的產(chǎn)品性能和完善的售后服務(wù),,滿足國(guó)內(nèi)外廣大客戶的需求,。