雙光子熒光顯微鏡是結合了激光掃描共聚焦顯微鏡和雙光子激發(fā)技術的一種新技術,。雙光子激發(fā)的基本原理是：在高光子密度的情況下，熒光分子可以同時吸收2個長波長的光子,，在經(jīng)過一個很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時間后,，發(fā)射出一個波長較短的光子；其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的,。雙（多）光子成像優(yōu)勢在于,，具有更深的組織穿透深度，利用紅外光,，能夠在層面檢測極限達1mm的組織區(qū)域,；因信號背景比高，而具有更高的對比度,；因激發(fā)體積小,，具有定點激發(fā)的特性，具有更少的光毒性,；激發(fā)波長由紫外,、可見光調整為紅外激發(fā)，能夠更加地安全,。雙光子顯微鏡在組織透明化成像中應用,。美國2PPLUS雙光子顯微鏡分辨率是多少

雙光子顯微鏡是激光掃描共聚焦顯微鏡和雙光子激發(fā)技術相結合的新技術。雙光子激發(fā)的基本原理是:在光子密度較高的情況下,，熒光分子可以同時吸收兩個波長較長的光子,，經(jīng)過短暫的所謂激發(fā)態(tài)壽命后，發(fā)射一個波長較短的光子,；效果和用波長為長波長一半的光子激發(fā)熒光分子是一樣的,。雙(多)光子成像的優(yōu)點是具有更深的組織穿透深度，紅外光可以在平面上探測到極限為1mm的組織區(qū)域,；因為信號背景比高,，所以具有更高的對比度；由于激發(fā)體積小,，具有定點激發(fā),、光毒性小的特點；激發(fā)波長由紫外,、可見光調整為紅外激發(fā),，更加安全。國外雙光子顯微鏡光子探測雙光子顯微鏡角膜成像,。

隨著技術的發(fā)展,，雙光子顯微鏡的性能不斷優(yōu)化。結合其特點，大致可以分為兩個方面:深入和主動改進,。為了使激發(fā)激光進入更深的層次,，可以從器件優(yōu)化和標本改造兩個方面入手。關于器件的優(yōu)化,，我們可以把激光束做得更細,，集中能量，讓激光穿透得更深,。對于樣品,，物質的吸收和散射是影響光傳播的主要因素。為了解決這個問題,，我們需要將樣本透明化,。一種方法是用某種物質浸泡標本，使其中的物質(主要是脂質)被破壞或溶解,。另一種方法是通過電泳電解脂類,，從而提高標本的“透明度”。

2020年,，臨研所,、病理科和科研處邀請北京大學王愛民副教授做了題目為“新一代微型雙光子顯微成像系統(tǒng)介紹及其在臨床醫(yī)療診斷”的學術報告。學術報告由臨研所醫(yī)學實驗研究平臺潘琳老師主持,。王愛民,，北京大學信息科學技術學院副教授，畢業(yè)于北京大學物理系,，獲學士、碩士學位,，后于英國巴斯大學物理系獲博士學位,。該研究組研發(fā)的微型雙光子顯微鏡，第1次在國際上獲得了小鼠大腦神經(jīng)元和神經(jīng)突觸清晰穩(wěn)定的動態(tài)信號,，該成果獲得了2017年度“中國光學進展”和“中國科學進展”,，并被NatureMethods評為2018年度“年度方法--無限制行為動物成像”。目前,，該研究組正在研究新一代雙光子顯微成像技術在臨床診斷中的應用,，為未來即時病理、離體組織檢測,、術中診斷等提供新的影像手段和分析方法,。雙光子顯微鏡品牌有哪些？

要想讓激發(fā)激光進入更深的層面,，大致可從兩個方面入手,，裝置優(yōu)化與標本改造。關于裝置優(yōu)化，我們可以把激光束變得更細,，使能量更加集中,，就能讓激光穿透更深。關于標本,，其中影響光傳播的主要是物質吸收和散射,，解決這個問題，我們需要對樣本進行透明化處理,。一種方法是運用某種物質將標本浸泡,，使其中的物質（主要是脂質）被破壞或溶解。另一種方法是運用電泳將脂質電解,，讓標本“透明度”提高,。高光子密度帶來的高能量容易損傷細胞，所以雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器,。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,，其脈沖達到最大值所持續(xù)的周期只有十萬億分之一秒，而其頻率可以達到80至100兆赫,，這樣即能達到雙光子激發(fā)的高光子密度要求,，又能不損傷細胞，使掃描能更好地進行,。雙光子顯微鏡比單光子共聚焦顯微鏡較大的不同在于無須使用孔限制光學散射,。國外雙光子顯微鏡光刺激

雙光子顯微鏡中，同樣每個時刻只有焦平面上一個點的信號被探測,，并且連焦平面外的熒光信號也不會有,。美國2PPLUS雙光子顯微鏡分辨率是多少

摻雜可以明顯影響碳點（CDs）的發(fā)射和激發(fā)特性，使雙光子碳點（TP-CDs）具有本征雙光子激發(fā)特性和605nm的紅光發(fā)射特性,。在638nm激光照射下,，除了長波激發(fā)和發(fā)射外，還可以實現(xiàn)活性氧（ROS）的產(chǎn)生,，這為光動力技術提供了巨大的可能性,。更重要的是，通過各種表征和理論模擬證實,，摻雜誘導的N雜環(huán)在TP-CDs與RNA的親和力中起關鍵作用,。這種親和力不僅為實現(xiàn)核仁特異性自我靶向提供了可能，而且通過ROS斷裂RNA鏈解離TP-CDs@RNA復合物,，賦予治療過程中的熒光變異,。TP-CDs結合了ROS的產(chǎn)生能力、光動力療法（PDT）過程中的熒光變化,、長波激發(fā)和發(fā)射特性以及核仁的特異性自靶向性,，可以認為是一種結合核仁動態(tài)變化實時處理的智能CDs,。美國2PPLUS雙光子顯微鏡分辨率是多少