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全自動(dòng)膜片鉗電流鉗制

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-10-18

在形成高阻抗封接后,,記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果之前,,通常要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求進(jìn)行參數(shù)補(bǔ)償,,以期獲得符合實(shí)際的結(jié)果,。需要注意的是,,應(yīng)恰當(dāng)設(shè)置放大器的帶寬,,例如10kHz,,這樣在電流監(jiān)測(cè)端將觀察不到超越此頻帶以外的無(wú)用信息,。膜片鉗實(shí)驗(yàn)難度大,、技術(shù)要求高,,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,,經(jīng)過(guò)處理和分析,,得出有意義、有價(jià)值的結(jié)果和結(jié)論,,就顯得不那么容易,,有許多需要注意和考慮的問(wèn)題,包括減少噪音,,避免電極前端的污染,,提高封接成功率,具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還需要考慮如何選取記錄模式,,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi),、外液,如何選擇阻斷劑,、激動(dòng)劑,,如何進(jìn)行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問(wèn)題,還需在科研實(shí)踐中不斷地探索和解決,。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*56小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.離子通道研究,,從膜片鉗開始,開啟科學(xué)探索之旅!全自動(dòng)膜片鉗電流鉗制

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高阻封接問(wèn)題的解決不僅改善了電流記錄性能,,還隨之出現(xiàn)了研究通道電流的多種膜片鉗方式,。根據(jù)不同的研究目的,可制成不同的膜片構(gòu)型,。細(xì)胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細(xì)胞膜表面上,,形成高阻封接,在細(xì)胞膜表面隔離出一小片膜,,既而通過(guò)微管電極對(duì)膜片進(jìn)行電壓鉗制,,分辨測(cè)量膜電流,稱為細(xì)胞貼附膜片,。由于不破壞細(xì)胞的完整性,,這種方式又稱為細(xì)胞膜上的膜片記錄。此時(shí)跨膜電位由玻管固定電位和細(xì)胞電位決定,。因此,,為測(cè)定膜片兩側(cè)的電位,需測(cè)定細(xì)胞膜電位并從該電位減去玻管電位,。從膜片的通道活動(dòng)看,,這種形式的膜片是極穩(wěn)定的,因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過(guò)程是完整的,,所受的干擾小,。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*65小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.多通道膜片鉗電流鉗制準(zhǔn)確、穩(wěn)定,、高效,,膜片鉗技術(shù)讓您的研究更上一層樓!

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膜片鉗技術(shù)是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域非常重要的一項(xiàng)技術(shù),,1976年由國(guó)馬普生物物理研究所Neher和Sakmann發(fā)明,,從而在活細(xì)胞上記錄到單個(gè)離子通道的電流。近半個(gè)世紀(jì)來(lái),,膜片鉗技術(shù)已經(jīng)成為神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域較常用也是較實(shí)用的技術(shù)之一,,具有極大的精確性和靈活性,能夠揭示離子通道,,單細(xì)胞突觸反應(yīng),,及神經(jīng)環(huán)路連接等多層次的電生理特性。做過(guò)膜片鉗的人都知道,,膜片鉗的信號(hào)采集設(shè)備一般由前置放大器,,放大器,模數(shù)/數(shù)模轉(zhuǎn)換器等構(gòu)成,,神經(jīng)元電信號(hào)先通過(guò)前置放大器(headstage)初步放大,,后傳輸入放大器進(jìn)一步放大,,再傳入模數(shù)轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號(hào),后被計(jì)算機(jī)采集,。下圖顯示的是我們較常使用的AXON和HEKA膜片鉗的一個(gè)信號(hào)傳輸路徑,。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*64小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.

現(xiàn)在這塊全新的芯片被放置在了跟前置放大器大小類似的小盒子中,便成就了這款全球較小的膜片鉗放大器ePatch,。體積大幅縮減只是一個(gè)表面,,由于細(xì)胞電信號(hào)在被電極記錄到后,直接進(jìn)入了芯片,,以較短的路徑直接從模擬信號(hào)轉(zhuǎn)變成了數(shù)字信號(hào),在很大程度上減少了環(huán)境及電路噪音對(duì)信號(hào)的影響,,所以這款放大器便可以輕易獲取非常高質(zhì)量且穩(wěn)定的電生理信號(hào),。ePatch體積只為42*18*78mm,重量200g,,整套設(shè)備的大小只相當(dāng)于傳統(tǒng)膜片鉗設(shè)備的前置放大器,,可以輕松地放入衣服口袋。用USB接口連接電腦后即可使用,,無(wú)需額外電源,,連接和使用都極為簡(jiǎn)便。沒有了占地方的放大器,,數(shù)模轉(zhuǎn)換器以及相互連接的眾多電線,,電源線等等,我們的膜片鉗又進(jìn)一步減小了體積,。膜片鉗80%的工夫在于刺備細(xì)胞,。

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高阻封接技術(shù)還明顯降低了電流記錄的背景噪聲,從而戲劇性地提高了時(shí)間,、空間及電流分辨率,,如時(shí)間分辨率可達(dá)10μs、空間分辨率可達(dá)1平方微米及電流分辨率可達(dá)10-12A,。影響電流記錄分辨率的背景噪聲除了來(lái)自于膜片鉗放大器本身外,,較主要還是信號(hào)源的熱噪聲。信號(hào)源如同一個(gè)簡(jiǎn)單的電阻,,其熱噪聲為σn=4Kt△f/R式中σn為電流的均方差根,,K為波爾茲曼常數(shù),t為溫度,,△f為測(cè)量帶寬,,R為電阻值??梢?,要得到低噪聲的電流記錄,,信號(hào)源的內(nèi)阻必需非常高。如在1kHz帶寬,,10%精度的條件下,,記錄1pA的電流,信號(hào)源內(nèi)阻應(yīng)為2GΩ以上,。電壓鉗技術(shù)只能測(cè)量?jī)?nèi)阻通常達(dá)100kΩ~50MΩ的大細(xì)胞的電流,,從而不能用常規(guī)的技術(shù)和制備達(dá)到所要求的分辨率。膜片鉗的設(shè)計(jì)使得夾持力均勻,,不會(huì)損壞薄片材料,。全自動(dòng)膜片鉗電流鉗制

以膜片鉗為鑰匙,打開細(xì)胞離子通道研究的大門,!全自動(dòng)膜片鉗電流鉗制

ePatch的設(shè)計(jì)的一些亮點(diǎn)還包括:可以在軟件中伴隨數(shù)據(jù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)記錄,,你不用再專門拿一個(gè)實(shí)驗(yàn)記錄本了,也不用再擔(dān)心本本上記錄的內(nèi)容找不到對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)了,,系統(tǒng)會(huì)把他們一一對(duì)應(yīng)起來(lái),。電壓電流刺激模式的編輯更為傻瓜,眾多的模塊,,直接拖拽就可以,,還伴隨著示例圖,讓你對(duì)你編輯的程序一目了然,。實(shí)時(shí)的全細(xì)胞參數(shù)估算,,包括封接電阻,膜電容,,膜電阻等重要參數(shù)強(qiáng)大的在線分析功能,,包括電壓鉗模式下的I/Vgraph,eventdetection,,F(xiàn)FT,,以及電流鉗模式下的APthresholddetection,APfrequency,,APslope等數(shù)據(jù)可保存成多種格式,,你要是個(gè)程序達(dá)人,可以支持使用Matlab進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,,如果沒有這樣的經(jīng)驗(yàn)也沒有問(wèn)題,,數(shù)據(jù)可以保存成.abf用的Clampfit直接分析。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點(diǎn)的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊(duì),7*60小時(shí)隨時(shí)人工在線咨詢.全自動(dòng)膜片鉗電流鉗制