在生物成像中，我司多光子顯微鏡具有清（清晰）,，快（快速）,，深（深層），活這四個方面,。結合了多光子上轉化材料以及時間編碼的結構光超分辨技術,，實現(xiàn)了快速（50MHz的掃描速度），超分辨（超衍射極限）成像,。作為一種新的高速,，超高分辨率的成像系統(tǒng)，MUTE-SIM可以幫助我們對快速運動的生物圖像進行分辨率高的成像,。盡管關于深度成像的應用我們沒有進一步展示,，但是結合1560nm近紅外光相對于可見光更佳的穿透性，我們相信該技術將有利于對生物組織進行高速，超分辨,，高深度地成像,，有助于生物影像學的發(fā)展。滔博生物TOP-Bright是一家集研發(fā),，生產(chǎn),，銷售于一體的專注于神經(jīng)科學產(chǎn)品及致力于向高校、科研機構等領域提供實驗室一體化方案的高科技企業(yè),。業(yè)務服務范圍已遍布至全國各地幾百家實驗室,。目前公司主營產(chǎn)品是享譽全球的國際品牌和產(chǎn)品,這些儀器設備都是科學研究所必備且不可替代的基礎儀器。 多光子顯微鏡在臨床前評價IA形態(tài),、細胞外基質,、細胞密度和血管形成等方面顯示出強大的作用。多光子顯微鏡系統(tǒng)

根據(jù)阿貝成像原理,，許多光學成像系統(tǒng)是一個低通濾波器,，物平面包含從低頻到高頻的信息，透鏡口徑會限制高頻信息通過,，只允許一定的低頻通過,，因此丟失了高頻信息會使成像所得圖像的細節(jié)變模糊，降低分辨率,。對于三維成像來說,，寬場照明時得到的信息不僅包含物鏡焦平面上樣品的部分信息，同時還包含焦平面外的樣品信息,。由于受到焦平面外的信息干擾,，常規(guī)熒光顯微鏡無法獲得層析圖像。三維結構光照明顯微鏡能夠提高分辨率,、獲得層析圖像,，是因為利用特定結構的照明光能引入樣品的高頻信息，當結構光的空間頻率足夠高時,，只有靠近焦面的部分才能被結構光調制,，超出這一區(qū)域，逐漸轉變?yōu)榫鶆蛘彰?，也就是只有焦面附近的有限區(qū)域具有相對完整的頻譜信息,，離焦后，高頻信息迅速衰減,，所以使用高頻結構光照明可以區(qū)分焦面和離焦區(qū)域來獲得層析圖像,。然后再通過軸向掃描可以獲取樣品不同深度的焦面圖像，重建樣品的三維結構,。bruker多光子顯微鏡成像區(qū)域多光子顯微鏡被認為是,、完整生物組織成像的手段之一，其成像尺度從分子級別到整個有機體。

因斯蔻浦(上海)生物科技有限公司 雙光子顯微鏡的基本原理是：在高光子密度的情況下,，熒光分子可以同時吸收 2 個長波長的光子,，在經(jīng)過一個很短的所謂激發(fā)態(tài)壽命的時間后，發(fā)射出一個波長較短的光子,；其效果和使用一個波長為長波長一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的,。雙光子激發(fā)需要很高的光子密度，為了不損傷細胞,，雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器,。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量，其脈沖寬度只有 100 飛秒,，而其周期可以達到 80至100兆赫茲,。在使用高數(shù)值孔徑的物鏡將脈沖激光的光子聚焦時，物鏡的焦點處的光子密度是比較高的,，雙光子激發(fā)只發(fā)生在物鏡的焦點上，所以雙光子顯微鏡不需要共聚焦***,，提高了熒光檢測效率,。

單束掃描技術可以高速遍歷大視場（FOV）的神經(jīng)組織：使用MPM對神經(jīng)元進行成像時，通過隨機訪問掃描—即激光束在整個視場上的任意選定點上進行快速掃描—可以只掃描感興趣的神經(jīng)元,，這樣不僅避免掃描到任何未標記的神經(jīng)纖維,，還可以優(yōu)化激光束的掃描時間。隨機訪問掃描（圖1）可以通過聲光偏轉器（AOD）來實現(xiàn),，其原理是將具有一個射頻信號的壓電傳感器粘在合適的晶體上,，所產(chǎn)生的聲波引起周期性的折射率光柵，激光束通過光柵時發(fā)生衍射,。通過射頻電信號調控聲波的強度和頻率從而可以改變衍射光的強度和方向,，這樣使用1個AOD就可以實現(xiàn)一維橫向的任意點掃描，利用1對AOD,，結合其他軸向掃描技術可實現(xiàn)3D的隨機訪問掃描,。但是該技術對樣本的運動很敏感，易出現(xiàn)運動偽影,。目前,，快速光柵掃描即在FOV中進行逐行掃描，由于利用算法可以輕松解決運動偽影而被普遍的使用,。多光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器,。

光學成像技術與分子生物學技術的結合為研究上述科學問題提供了條件與可能。因此,，在現(xiàn)代分子生物學技術基礎上,，急需發(fā)展新的成像技術。在動物體內，如何實現(xiàn)基因表達及蛋白質之間相五作用的實時在體成像監(jiān)測是當前迫切需要解決的重大科學技術問題,。這是也生物學,、信息科學（光學）和基礎臨床醫(yī)學等學科共同感興趣的重大問題。對這-一一科學問題的研究不僅有助于闡明生命活動的基本規(guī)律,、認識疾病的發(fā)展規(guī)律,，而且對創(chuàng)新藥物研究、藥物療效評價以及發(fā)展疾病早期診斷技術等產(chǎn)生重大影響,。世界多光子激光掃描顯微鏡產(chǎn)業(yè)主要布局在德國和日本,，德國是徠卡顯微系統(tǒng)和蔡司。美國多光子顯微鏡實驗操作

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以往我們認識的光電效應是單光子光電效應,，即一個電子在極短時間內能吸收到一個光子而從金屬表面逸出。強激光的出現(xiàn)豐富了人們對于光電效應的認識,，用強激光照射金屬,，由于其光子密度極大，一個電子在短時間吸收多個光子成為可能,，從而形成多光子電效應,，這已被實驗證實。為什么一般討論的光電效應都是指單光子光電效應呢,？這是因為,，在使用普通光源的情況下，電子吸收兩個以上光子能量的概率是非常非常小的,，幾乎為零,。事實上，愛因斯坦本人就考慮過在強光下發(fā)生光電效應的可能性問題,。對此,，他有如下的論述：光電效應中的一個電子吸收兩個光子的幾率不會大于下雨天兩個雨滴同事打在一個螞蟻上的幾率。因此,，多光子光電效應在實驗上的研究成為可能,，是二十世紀六十年代激光乃至強激光出現(xiàn)以后的事情。有了激光,，對于雙光子光電效應,，在實驗上和理論上均取得了許多成果。利用強激光,，人們不僅觀察到雙光子和三光子的光電效應,，甚至觀察到金靶材吸收幾十個等效光子實驗現(xiàn)象。多光子顯微鏡系統(tǒng)