鈣成像的熒光指示劑鈣成像的熒光探針一般均為Ca2螯合劑EGTA,，APTRA，BAPTA的衍生物,，它們可以結(jié)合鈣離子從而顯示一個光譜響應(yīng)，使研究者可以用熒光顯微鏡來觀察細胞內(nèi)的自由鈣的濃度,。熒光顯微鏡可以使用普通的倒置熒光顯微鏡來進行鈣信號的測定和成像,。并可結(jié)合電生理設(shè)備、活細胞培養(yǎng)裝置等,，適用于大強度,、廣范圍的鈣信號測定。共聚焦顯微系統(tǒng),，共聚焦以激光為光源,，且可配備氬離子光源，可以選擇可見光激發(fā)的鈣指示劑,，進行層掃,，相比普通熒光顯微鏡有更好的空間分辨率。并且共聚焦除了配備大視野掃描鏡更可配置共振掃描振鏡,，以滿足更高速成像應(yīng)用的需求,。雙光子顯微系統(tǒng)使用長波長來激發(fā)熒光指示劑，具有較低的細胞毒性,，也可適用于紫外激發(fā)的鈣指示劑,，且可獲得和單光子共聚焦系統(tǒng)類似的空間分辨率。小結(jié)綜上可見,，在研究鈣信號時,，可結(jié)合樣品自身特點來選擇相應(yīng)的鈣指示劑，并考慮既有的實驗設(shè)備,，來確定具體的實驗方案,。同時還需進一步摸索實驗數(shù)據(jù)的校正、控制等多種影響因素,，可獲得可靠的圖像及熒光定量數(shù)據(jù),。對于鈣離子成像來說，大多數(shù)情況下速度很重要,。哈爾濱細胞鈣離子鈣成像哪個好

通過篩選天然與人工合成的融合體,，在小鼠與斑馬魚幼蟲身上成功得到以為靶點的致密神經(jīng)回路報告，報告顯示來自神經(jīng)纖維的偽信號明顯減少,，信噪比增加,，神經(jīng)元之間的偽影相關(guān)性降低,。這些結(jié)果均說明GCaMP6f和GCaMP7f的細胞體靶向變體（Soma-GCaMP6f，Soma-GCaMP7f）對提高單光子熒光成像技術(shù)的精細性起到著重要作用,。這種胞體靶向突變體對提高神經(jīng)信號標記的精細性是否具有組織特異性或物種特異性呢,？研究團隊針對這一問題，分別在小鼠不同腦區(qū)以及斑馬魚幼魚的整胚轉(zhuǎn)染和斑馬魚不同發(fā)育時期的信號采集等方面進行研究,。上海熒光顯微鈣成像動物行為學(xué)鈣是模型動物神經(jīng)細胞內(nèi)重要的第二信使,參與細胞多種功能的調(diào)節(jié),可以產(chǎn)生多種細胞內(nèi)信號,。

對于成像和長時間成像，較重要的是要保證細胞的正常生長,。熒光團受激發(fā)光光照后產(chǎn)生的氧化物質(zhì)與蛋白質(zhì),、核酸和脂肪等發(fā)生反應(yīng)，熒光信號降低的同時（光致退色）也降低了細胞壽命（光線損傷）,。在光照過程中氧化劑的產(chǎn)生,主要決定于熒光團的光化學(xué)性質(zhì)和光照劑量,因此減少光照劑量成為解決上述問題的途徑之一,。光漂白（Photobleaching）指在光的照射下熒光物質(zhì)所激發(fā)出來的熒光強度隨著時間推移逐步減弱乃至消失的現(xiàn)象。熒光成像的質(zhì)量很大程度上依賴于熒光信號強度,，提高激發(fā)光強度固然可以提高信號強度,，但激發(fā)光的強度不是可以無限提高的，當激發(fā)光的強度超過一定限度時,，光吸收就趨于飽和,，并不可逆地破壞激發(fā)態(tài)分子，這就是光漂白現(xiàn)象,。在顯微技術(shù)中,，光漂白使得觀測變得很復(fù)雜，因為它會造成破壞,，使螢光團無法繼續(xù)放光,，從而干擾實驗結(jié)果。

使用MPM對神經(jīng)元進行鈣成像時,，通過隨機訪問掃描—即激光束在整個視場上的任意選定點上進行快速掃描—可以只掃描感興趣的神經(jīng)元,，這樣不僅避免掃描到任何未標記的神經(jīng)纖維，還可以優(yōu)化激光束的掃描時間,。隨機訪問掃描可以通過聲光偏轉(zhuǎn)器（AOD）來實現(xiàn),，其原理是將具有一個射頻信號的壓電傳感器粘在合適的晶體上，所產(chǎn)生的聲波引起周期性的折射率光柵,，激光束通過光柵時發(fā)生衍射,。通過射頻電信號調(diào)控聲波的強度和頻率從而可以改變衍射光的強度和方向，這樣使用1個AOD就可以實現(xiàn)一維橫向的任意點掃描,，利用1對AOD,，結(jié)合其他軸向掃描技術(shù)可實現(xiàn)3D的隨機訪問掃描。但是該技術(shù)對樣本的運動很敏感，易出現(xiàn)運動偽影,。目前,，快速光柵掃描即在FOV中進行逐行掃描，由于利用算法可以輕松解決運動偽影而被guangfan的使用,。鈣成像技術(shù)的不斷進步,，使得人們對神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域有了進一步的拓展。

包含鈣離子指示劑的細胞可以通過熒光顯微鏡(fluorescencemicroscope)觀測,，然后通過CCD攝像機捕捉,、記錄圖像。現(xiàn)在鈣成像技術(shù)主要在以下幾類神經(jīng)科學(xué)研究方面有廣泛應(yīng)用：1.記錄培養(yǎng)的神經(jīng)元的活動,。2.記錄腦片上神經(jīng)元的活動,。記錄神經(jīng)元的活動。由于離體實驗本身的限制,，現(xiàn)在越來越多的神經(jīng)方面科學(xué)家傾向于做在體鈣成像實驗,，希望能得到更準確且更能反應(yīng)生理狀況的數(shù)據(jù),。得益于雙光子熒光顯微鏡的發(fā)展,，現(xiàn)在在實驗動物處于huoti狀態(tài)下的鈣成像技術(shù)取得了飛速進展。4.記錄神經(jīng)元樹突和樹突棘（spine）的活動,。由于對于實驗精度的要求,，有些科學(xué)家不僅只想記錄單個神經(jīng)元的反應(yīng)，他們還想更確切地知道神經(jīng)元上哪些樹突和樹突棘參與了某個行為,，也就是說他們需要在huoti條件下,，對單根樹突以及某些spine進行鈣成像記錄實驗。由于雙光子熒光顯微鏡和GCaMP6基因編碼鈣離子指示劑的發(fā)展,，現(xiàn)在,，對樹突和樹突棘用鈣成像實驗進行記錄也成為了可能。鈣離子成像可以追蹤神經(jīng)元動作電位,。哈爾濱熒光鈣成像nVista

傳統(tǒng)鈣成像實驗要求成像的光路極為穩(wěn)定,。哈爾濱細胞鈣離子鈣成像哪個好

多種鈣離子指示劑和鈣成像手段的存在使研究人員能夠根據(jù)具體的實驗需要進行選擇。同樣,，選擇合適的檢測設(shè)備也是至關(guān)重要的,。對于使用CCD/sCMOS相機的成像系統(tǒng)來說，有兩個要求是很基本的：采集速度：根據(jù)不同的應(yīng)用所需的相機幀速也不同,，對于神經(jīng)細胞來說,，一般要求相機速度至少在10fps以上，有些高速應(yīng)用場景可能需要幾百甚至上千Hz的幀速,。靈敏度：為了盡可能降低光漂白和其他副作用（特別是藍光激發(fā)時）,，需要降低激發(fā)光強度。因此相機要在較寬的發(fā)射光波長范圍上具有高靈敏度，才能檢測到弱光條件下的信號,，并適應(yīng)不同的染料的光譜發(fā)射特性,。哈爾濱細胞鈣離子鈣成像哪個好