Ca2+是重要的第二信使，對于調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理反應(yīng)具有重要的作用,，開發(fā)和利用雙光子熒光顯微成像技術(shù)對Ca2+熒光信號進(jìn)行觀測,，可以從某些方面對有機(jī)體或細(xì)胞的變化機(jī)制進(jìn)行分析，具有重要的意義,。利用雙光子熒光顯微成像技術(shù)可以觀察細(xì)胞內(nèi)用熒光探針標(biāo)記的 Ca2*的時間和空間的熒光圖像的變化,，還可以觀察細(xì)胞某一層面或局部的（Ca2+）熒光圖像和變化。通過對單細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn),，Ca2+不僅在細(xì)胞局部區(qū)域間的分布是不均勻的,，而且細(xì)胞內(nèi)各局部區(qū)域的不同深度或?qū)哟伍g也存在不同程度的 Ca2+梯差即所謂的空間 Ca2梯差,。從雙光子到三光子甚至四光子，這種非線性成像技術(shù)通常也被統(tǒng)稱為多光子顯微鏡,。美國靈長類多光子顯微鏡價格

國內(nèi)顯微鏡制造市場目前斷層嚴(yán)重。目前我國顯微鏡行業(yè)發(fā)展缺乏技術(shù)沉淀,，20年以上經(jīng)營積累的企業(yè)十分稀缺,，深度精密制造、光學(xué)主要部件設(shè)計及工藝嚴(yán)重制約產(chǎn)業(yè)升級,。目前中國顯微鏡中如多光子顯微鏡,、共聚焦掃描和電子顯微鏡等主要集中在徠卡顯微系統(tǒng)、蔡司,、尼康,、奧林巴斯等國外企業(yè)。國內(nèi)具備生產(chǎn)顯微鏡能力的企業(yè)屈指可數(shù),，若國內(nèi)顯微鏡企業(yè)能打破技術(shù)壁壘,，切入顯微鏡市場，企業(yè)的生產(chǎn)經(jīng)營將騰躍至一個更高的格局,。未來國產(chǎn)多光子激光掃描顯微鏡替代空間大,。目前中國使用的多光子激光掃描顯微鏡幾乎被徠卡顯微系統(tǒng)、蔡司,、尼康和奧林巴斯壟斷,。國內(nèi)有能力開始生產(chǎn)多光子激光掃描顯微鏡的企業(yè)極少，若國內(nèi)能夠制造出高性能,、高可靠性的多光子激光掃描顯微鏡,，無異是會面臨極大的市場機(jī)遇。布魯克多光子顯微鏡準(zhǔn)確定位全球多光子顯微鏡主要消費(fèi)地區(qū)分析,，包括消費(fèi)量及份額等,。

根據(jù)阿貝成像原理，許多光學(xué)成像系統(tǒng)是一個低通濾波器,，物平面包含從低頻到高頻的信息,，透鏡口徑會限制高頻信息通過，只允許一定的低頻通過,，因此丟失了高頻信息會使成像所得圖像的細(xì)節(jié)變模糊,，降低分辨率。對于三維成像來說,，寬場照明時得到的信息不僅包含物鏡焦平面上樣品的部分信息,，同時還包含焦平面外的樣品信息。由于受到焦平面外的信息干擾,，常規(guī)熒光顯微鏡無法獲得層析圖像,。三維結(jié)構(gòu)光照明顯微鏡能夠提高分辨率,、獲得層析圖像，是因為利用特定結(jié)構(gòu)的照明光能引入樣品的高頻信息,，當(dāng)結(jié)構(gòu)光的空間頻率足夠高時,，只有靠近焦面的部分才能被結(jié)構(gòu)光調(diào)制，超出這一區(qū)域,，逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榫鶆蛘彰?，也就是只有焦面附近的有限區(qū)域具有相對完整的頻譜信息，離焦后,，高頻信息迅速衰減,，所以使用高頻結(jié)構(gòu)光照明可以區(qū)分焦面和離焦區(qū)域來獲得層析圖像。然后再通過軸向掃描可以獲取樣品不同深度的焦面圖像,，重建樣品的三維結(jié)構(gòu),。

   多光子顯微鏡的前景巨大 作為一個多學(xué)科交叉、知識密集,、資金密集的高技術(shù)產(chǎn)業(yè),，多光子顯微鏡涉及醫(yī)學(xué)、生物學(xué),、化學(xué),、物理學(xué)、電子學(xué),、工程學(xué)等學(xué)科,，生產(chǎn)工藝相對復(fù)雜，進(jìn)入門檻較高,，是衡量一個國家制造業(yè)和高科技發(fā)展水平的重要標(biāo)準(zhǔn)之一,。過去的5年，多光子顯微鏡市場集中,，由于投產(chǎn)生產(chǎn)的成本較高,，技術(shù)難度大，目前涌現(xiàn)的新企業(yè)不多,。顯微鏡作為一個傳統(tǒng)的高科技行業(yè),，其作用至今沒有被其他技術(shù)顛覆，只是不斷融合并發(fā)展相關(guān)技術(shù),，在醫(yī)療和其他精密檢測領(lǐng)域發(fā)揮著更大的作用,。顯微鏡的商業(yè)化發(fā)展已進(jìn)入成熟期，主要需求來自教學(xué),、生命科學(xué)的研究及精密檢測等,，全球市場呈現(xiàn)平緩的增長態(tài)勢。然而，**,、,、顯微鏡產(chǎn)品（如多光子顯微鏡、電子顯微鏡）正拉動市場需求,，多光子顯微鏡市場發(fā)展?jié)摿薮蟆?光子顯微成像技術(shù)不是什么新技術(shù),，早在20多年前就有了，目前已經(jīng)在生命科學(xué)和材料科學(xué)中廣泛應(yīng)用,。

對兩個遠(yuǎn)距離（相距大于1-2 mm）的成像部位,，通常使用兩條單獨(dú)的路徑進(jìn)行成像；對于相鄰區(qū)域,，通常使用單個物鏡的多光束進(jìn)行成像,。多光束掃描技術(shù)必須特別注意激發(fā)光束之間的串?dāng)_問題,，這個問題可以通過事后光源分離方法或時空復(fù)用方法來解決,。事后光源分離方法指的是用算法來分離光束消除串?dāng)_；時空復(fù)用方法指的是同時使用多個激發(fā)光束,，每個光束的脈沖在時間上延遲,，這樣就可以暫時分離被不同光束激發(fā)的單個熒光信號。引入越多路光束就可以對越多的神經(jīng)元進(jìn)行成像,，但是多路光束會導(dǎo)致熒光衰減時間的重疊增加,，從而限制了區(qū)分信號源的能力；并且多路復(fù)用對電子設(shè)備的工作速率有很高的要求,；大量的光束也需要更高的激光功率來維持近似單光束的信噪比,，這會容易導(dǎo)致組織損傷。多光子顯微鏡可以進(jìn)行深層成像,，且具有三維成像的能力,，可以應(yīng)用于拍攝不透明的厚樣品。飛秒激光多光子顯微鏡數(shù)據(jù)分析

帶寬足以覆蓋鈦藍(lán)寶石激光器的可調(diào)諧范圍和用于多光子顯微鏡的許多其它激光器的典型中心頻率,。美國靈長類多光子顯微鏡價格

多光子激發(fā)的特點(diǎn),。激發(fā)波長∶兩個或多個光子同時激發(fā)，激發(fā)波長是單光子激發(fā)波長的兩倍或多倍（i.e.紅光能激發(fā)UV探針）,。多光子激發(fā)∶依賴于多個光子同時到達(dá)的時間,。使用脈沖飛秒激光器（i.e.10-16 seconds），且能提供更高的峰值功率,。熒光限制在焦點(diǎn)處,，能滿足多個光子同時達(dá)到產(chǎn)生多光子吸收。熒光強(qiáng)度正比于（激光強(qiáng)度）n,。為什么使用飛秒激光器?多光子激發(fā)需要超快的激光器,，皮秒脈沖不能實現(xiàn)三光子激發(fā)。深度成像需要更高、更窄脈沖輸出功率,。多光子激發(fā)光源處于近紅外區(qū),，對細(xì)胞毒性和光漂白更小。美國靈長類多光子顯微鏡價格