利用PCR技術(shù)擴(kuò)增得到編碼土豆羧肽酶抑制劑(carboxypeptidaseinhibitorfrompotato,CPI)活性多肽基因,,克隆于表達(dá)載體pGEX一4T一1的多克隆位點(diǎn)中,,得到重組質(zhì)粒pGCPI,測序后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到受體茵EscherichiacoliBL21中,。重組茵經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),超聲波破茵后,,通過谷胱甘肽sepheroseFF親和層析柱一步純化得到融合蛋白,,純度大于97%。融合蛋白經(jīng)凝血酶切割并分離除去谷胱甘肽一S一轉(zhuǎn)移酶后得到純度大于98%的重組CPI,,ELISA鑒定產(chǎn)物具有免疫原性,,體外檢測表明其促進(jìn)纖溶的生物功能與天然CPI無明顯差異。透明質(zhì)酸的衍生物可以作為基因傳遞的載體,,或用于疫苗佐劑,,增強(qiáng)反應(yīng)。Recombinant Cynomolgus IL-1R3/IL-1 RAcP Protein,His Tag
胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶,,可特異切割賴氨酸及精氨酸C末端形成的肽鍵,。重組胰蛋白酶多用大腸桿菌或酵母系統(tǒng)重組表達(dá)并經(jīng)過多步層析純化獲得,無糜蛋白酶等雜酶污染,。重組胰蛋白酶與天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性,,其氨基酸序列與豬源胰蛋白酶序列同源。因其無動(dòng)物源污染性和純度高,,在醫(yī)藥開發(fā),、生化研究、蛋白組學(xué)等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用,。翌圣目前可提供2款重組胰蛋白酶,,分別為藥典級(Cat#40512ES)、質(zhì)譜級(Cat#20416ES)藥典級:大腸桿菌表達(dá)的重組胰蛋白酶,,氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶完全一致,,生產(chǎn)過程不使用任何動(dòng)物源原料,無外源性的病毒污染,,可替代豬胰腺來源胰蛋白酶應(yīng)用于各種生物技術(shù)過程中,,如:細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞發(fā)酵,、蛋白質(zhì)的酶解或各種組織的細(xì)胞分離等,。本產(chǎn)品純度高,、不含雜酶、宿主蛋白和DNA殘留量符合藥典標(biāo)準(zhǔn),,避免了雜質(zhì)對細(xì)胞生長的影響,,pH為7.0-9.0,穩(wěn)定pH為2±0.5,。質(zhì)譜級:畢赤酵母表達(dá)的重組豬胰蛋白酶,,在GMP法規(guī)下生產(chǎn),不含任何動(dòng)物源成分,,無動(dòng)物源性的病毒污染,,天然缺乏糜蛋白酶活性,并已過濾除菌,。Recombinant Cynomolgus/Rhesus macaque Her3 Protein,His Tag透明質(zhì)酸的生物相容性使其在生物材料領(lǐng)域具有潛在應(yīng)用,,如作為藥物遞送載體。
3C蛋白酶(3C Protease),,也稱為3Cpro或3C樣蛋白酶(3CLpro),,是一類在RNA病毒復(fù)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用的酶。它們負(fù)責(zé)切割病毒的多聚蛋白前體,,從而釋放出成熟的病毒蛋白,,這些蛋白對于病毒的復(fù)制和組裝至關(guān)重要。3C蛋白酶在多種病毒中都有發(fā)現(xiàn),,包括冠狀病毒、小RNA病毒等,。結(jié)構(gòu)與功能3C蛋白酶通常具有特定的酶切位點(diǎn),,能夠識別并切割特定的氨基酸序列。例如,,小RNA病毒科的3C蛋白酶識別位點(diǎn)為Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro,,切割位點(diǎn)位于谷氨酰胺(Gln)和甘氨酸(Gly)之間,稱為Q-G位點(diǎn)4,。抗病毒藥物開發(fā)3C蛋白酶因其在病毒生命周期中的關(guān)鍵作用,,成為抗病毒藥物開發(fā)的重要靶點(diǎn)。通過抑制3C蛋白酶的活性,,可以有效阻斷病毒的復(fù)制過程,。例如,SARS-CoV-2(病毒)的3CLpro是抗冠狀病毒藥物的重要靶點(diǎn),,西湖大學(xué)胡奇團(tuán)隊(duì)等合作揭示了SARS-CoV-2 3CLpro潛在耐藥機(jī)制,,為解決潛在的耐藥問題提供了重要信息3。耐藥性研究隨著3CLpro抑制劑的使用,,其耐藥問題也日益受到關(guān)注,。研究表明,,3CLpro的某些突變可能導(dǎo)致病毒對抑制劑產(chǎn)生耐藥性。
抑肽酶(Aprotinin),,又稱為抑蛋白酶肽,,是一種競爭性、可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑,,可與絲氨酸蛋白酶形成穩(wěn)定復(fù)合物并阻斷酶的活性位點(diǎn),,這種結(jié)合是可逆的,大多數(shù)的抑肽酶-蛋白酶復(fù)合物在極端的pH<3.0的條件下解除結(jié)合,。抑肽酶抑制糜蛋白酶,、胰蛋白酶、激肽釋放酶和血纖維蛋白溶酶,,不能抑制Xa因子和凝血酶,。從結(jié)構(gòu)上來說,抑肽酶是一種來自牛肺的單體球狀蛋白,,由58個(gè)氨基酸組成并排列在具有三個(gè)交聯(lián)二硫鍵的單個(gè)多肽鏈中,。重組抑肽酶采用大腸桿菌表達(dá),在GMP法規(guī)下生產(chǎn),,不含任何動(dòng)物源成分,,無動(dòng)物源性的病毒污染,氨基酸序列與來源于牛肺的抑肽酶完全一致,,具有與動(dòng)物源性抑肽酶相同的酶學(xué)性質(zhì),,可替代動(dòng)物源性抑肽酶用于各種生物技術(shù)過程中,如:重組蛋白生產(chǎn)中抑制絲氨酸蛋白酶的活性,;細(xì)胞培養(yǎng)等,。腸激酶能夠特異性識別并切割含有Aspartate-Aspartate-Aspartate-Lysine (DDDK) 序列的蛋白質(zhì)。
重組腸激酶(rEK)是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段,,氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致,,有著和天然提取的腸激酶同樣特異的酶切位點(diǎn),切割位點(diǎn)Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,,可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白,,以除去不需要的融合標(biāo)簽,同時(shí)重組腸激酶(rEK)具有比天然酶更高的切割活性,。重組腸激酶為采用重組大腸桿菌分泌表達(dá)的高純度,、高活性、高特異的牛腸激酶,,不含其他蛋白酶,,可以在較寬pH范圍(4.5-9.5)和較寬溫度范圍內(nèi)有效切割融合蛋白,并且在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。本品不含標(biāo)簽,,由于具有極高酶切活性,,酶切反應(yīng)使用量少,不影響下游蛋白應(yīng)用,,可不考慮除去,。產(chǎn)品信息規(guī)格100U/200U/500U/1000U/5000U產(chǎn)品性質(zhì)來源(Source)大腸桿菌表達(dá)分子量(MolecularWeight)理論值25.85kDa外觀(Appearance)澄清、無色至淡黃色液體酶濃度(EnzymeConcentration)≥5U/uL活性定義(ActivityDefinition)一個(gè)活性單位定義為25°C,,12-16h,,腸激酶用于重組抗體和其他蛋白質(zhì)的質(zhì)量檢測,確保其正確折疊和功能,。Recombinant Human MSLN/Mesothelin Protein,His-Avi Tag
泛素蛋白(Ubiquitin,,簡稱Ub)是一種在真核細(xì)胞中普遍存在的小分子蛋白,具有高度保守性,。Recombinant Cynomolgus IL-1R3/IL-1 RAcP Protein,His Tag
N-糖苷酶F(PNGaseF)酶活定義(UnitDefinition)1個(gè)酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中,,37℃條件下1小時(shí)從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。儲(chǔ)存條件-15~-25℃保存,,有效期1年,。使用說明變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入1μLBuffer1和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg),至終體積10μL,;2)100℃溫度下煮沸10min使其變性,,冰上冷卻,離心10秒,;3)加入2μL的Buffer2,、2μL的10%NP-40、6μL去離子水,,總反應(yīng)體積20μL,;4)加入0.2~0.5μL的PNGase,輕輕混勻,。在37℃孵育1-3h。非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入2μL的Buffer2和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg)至體積為20μL,。2)加入0.5~1μL的PNGaseF,輕輕混勻,。3)37°C孵育4-24h。注意:在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,,在非變性條件下可能需要增加PNGaseF的量和延長孵育時(shí)間,。Recombinant Cynomolgus IL-1R3/IL-1 RAcP Protein,His Tag