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T4UvsX重組酶的保存和純化是實(shí)驗(yàn)室工作流程中的重要環(huán)節(jié),,確保了酶的穩(wěn)定性和活性。以下是根據(jù)搜索結(jié)果提供的信息:保存條件:-T4UvsX重組酶通常在-20°C的條件下保存,,可以保持3年的有效期,。-某些產(chǎn)品說明中提到,該制品不含甘油,,可用于建立凍干體系,,這可能對(duì)長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸有額外的好處。-建議避免反復(fù)凍融,,因?yàn)檫@可能會(huì)影響酶的活性,。純化過程:-T4UvsX重組酶是由大腸桿菌表達(dá)和純化的。這意味著科學(xué)家首先將T4噬菌體的uvsX基因克隆到適合在大腸桿菌中表達(dá)的質(zhì)粒載體中,。-然后將這個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌宿主細(xì)胞中,,使其表達(dá)T4UvsX蛋白。-接下來,,通過一系列生化步驟從大腸桿菌細(xì)胞中提取和純化T4UvsX蛋白,,這些步驟可能包括細(xì)胞裂解、離心,、層析等技術(shù),。注意事項(xiàng):-T4UvsX重組酶的保存液中甘油含量為20%,建議單獨(dú)分裝保存,,以避免反復(fù)凍融,。-該酶無核酸酶活性,這表明它在催化反應(yīng)時(shí)不會(huì)切割DNA鏈,,而是促進(jìn)DNA鏈的重組,。-本產(chǎn)品用于科研用途,不應(yīng)用于臨床診斷,。應(yīng)用:-T4UvsX重組酶主要用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),,如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA),這是一種快速,、靈敏的核酸檢測(cè)技術(shù),。通過遵循這些保存和純化指南,研究人員可以確保T4UvsX重組酶在實(shí)驗(yàn)中的有效性和可靠性,。FnCas12a特異性識(shí)別并剪切帶PAM序列的雙鏈DNA(dsDNA)靶標(biāo),其PAM序列為5'-TTN-3',與Cas9的PAM序列不同,。Recombinant Human CD24 Protein,His-Avi Tag
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過改造的高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶,,與ProteinA融合,形成一種新型融合酶,,應(yīng)用于CUT&Tag技術(shù)中,,用于研究蛋白質(zhì)與基因組DNA的相互作用。這種融合酶具備以下特點(diǎn):1.**高活性**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是超高活性的突變形式,,體外轉(zhuǎn)座效率比野生型高1000倍,。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的N端結(jié)構(gòu)域?yàn)镻roteinA的一部分,可以與免疫球蛋白的Fc區(qū)相互作用,,特別是與大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG結(jié)合,。3.**Tn5轉(zhuǎn)座酶活性**:C端結(jié)構(gòu)域?yàn)門n5轉(zhuǎn)座酶,能夠特異性識(shí)別轉(zhuǎn)座子兩端反向重復(fù)的ME序列(MosaicEnd),,并在形成轉(zhuǎn)座復(fù)合體后隨機(jī)插入靶DNA中,。4.**應(yīng)用廣**:適用于CUT&Tag技術(shù)、高通量測(cè)序建庫(kù),、ATAC-seq等,,特別適用于早期胚胎發(fā)育、干細(xì)胞,、以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域,。5.**操作簡(jiǎn)便**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟,可以在一步反應(yīng)中實(shí)現(xiàn)DNA片段化和接頭連接,,從細(xì)胞到二代測(cè)序文庫(kù)的轉(zhuǎn)化過程需9小時(shí),。6.**低細(xì)胞投入量**:CUT&Tag技術(shù)允許從低至60個(gè)細(xì)胞的樣本中獲得結(jié)果,甚至可以應(yīng)用于單細(xì)胞水平的研究,。7.**高質(zhì)量結(jié)果**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用可以保證DNA片段化,,同時(shí)獲得的蛋白純度高、核酸殘留低,。Recombinant Mouse ALK Protein,hFc Tag與其他Cas12蛋白相比,,F(xiàn)nCas12a蛋白的分子量較小,大約在400-700個(gè)氨基酸之間,。
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)主要用于從RNA模板合成鏈cDNA,,而不是直接用于線性RNA的放大。然而,,合成的cDNA可以作為模板用于后續(xù)的線性RNA放大過程,,這通常涉及以下幾個(gè)步驟:1.**cDNA合成**:使用1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)按照試劑盒的說明進(jìn)行操作,從線性RNA模板合成鏈cDNA,。2.**第二鏈cDNA合成**:在某些情況下,,可能需要合成雙鏈cDNA,。這可以通過使用DNA聚合酶和第二鏈合成試劑來完成,從而獲得完整的雙鏈cDNA,。3.**線性RNA放大**:一旦獲得了cDNA,,可以使用體外轉(zhuǎn)錄(IVT,InVitroTranscription)技術(shù)來放大RNA。這通常涉及以下步驟:-使用含有RNA聚合酶啟動(dòng)子序列的特定引物對(duì)cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,。-使用含有RNA聚合酶識(shí)別位點(diǎn)的引物進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng),,以合成大量RNA拷貝。4.**RNA純化**:體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的RNA需要通過適當(dāng)?shù)姆椒ǎㄈ缰鶎游龌虺恋恚┻M(jìn)行純化,,以去除DNA模板,、未反應(yīng)的核苷酸和其他雜質(zhì)。5.**RNA質(zhì)量檢測(cè)**:使用凝膠電泳或生物分析儀檢測(cè)RNA的質(zhì)量和大小,,確保RNA的完整性和純度,。
磁珠法質(zhì)粒小量抽提試劑盒中的磁珠分離通常涉及以下步驟:1.**裂解細(xì)胞**:-首先,使用裂解液(含有SDS等成分)裂解細(xì)菌細(xì)胞,,釋放出質(zhì)粒DNA,。2.**結(jié)合磁珠**:-將磁珠加入到裂解后的混合物中,磁珠表面通常修飾有能夠特異性結(jié)合核酸的配體,,使得質(zhì)粒DNA吸附于磁珠表面,。3.**磁分離**:-將含有磁珠和質(zhì)粒DNA的混合物置于磁分離架上。磁分離架產(chǎn)生磁場(chǎng),,使得磁珠迅速聚集在管壁或管底,。4.**未結(jié)合物質(zhì)**:-在磁珠固定后,小心移除上清液,,避免擾動(dòng)磁珠,。上清液中含有未吸附的蛋白質(zhì)、RNA和其他細(xì)胞碎片,。5.**洗滌磁珠**:-向磁珠中加入洗滌液,,輕輕混勻以去除殘留的雜質(zhì),然后再次使用磁分離架分離磁珠和洗滌液,。6.**重復(fù)洗滌**:-根據(jù)試劑盒的說明,,可能需要進(jìn)行多次洗滌以確保高度純化。每次洗滌后都需洗滌液,。7.**干燥磁珠**(如果需要):-在某些情況下,,可能需要去除洗滌后的殘留液體,讓磁珠在磁場(chǎng)作用下干燥,,但要注意不要使磁珠完全干燥,,以免影響DNA的洗脫。8.**洗脫質(zhì)粒DNA**:-使用洗脫液(通常是低鹽或高pH的緩沖液)將質(zhì)粒DNA從磁珠上洗脫,。洗脫液可以破壞磁珠與DNA之間的結(jié)合力,,釋放DNA,。。
轉(zhuǎn)座酶是一類能夠催化轉(zhuǎn)座子(一種可移動(dòng)的DNA序列)在基因組中從一個(gè)位置移動(dòng)到另一個(gè)位置的酶,。轉(zhuǎn)座子可以在DNA分子上“跳躍”,在新的位置上插入自己的拷貝,,而原始位置的轉(zhuǎn)座子則可能被切除或保留,。轉(zhuǎn)座酶的作用是轉(zhuǎn)座過程中的關(guān)鍵因素,它們可以被分為兩類:1.**復(fù)制型轉(zhuǎn)座酶**:在復(fù)制型轉(zhuǎn)座過程中,,轉(zhuǎn)座子首先被復(fù)制,,然后復(fù)制的拷貝到新的基因組位置,原始的轉(zhuǎn)座子留在原位,。這種機(jī)制通常涉及到“復(fù)制-粘貼”的過程,。2.**剪切型轉(zhuǎn)座酶**:在剪切型轉(zhuǎn)座過程中,轉(zhuǎn)座子從原始位置被切除,,然后到新的基因組位置,。這涉及到“剪切-粘貼”的過程。轉(zhuǎn)座酶的活性和轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)可以對(duì)基因組的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生重要影響,,包括:-**基因突變**:轉(zhuǎn)座子的插入可能破壞基因的正常功能,,導(dǎo)致突變。-**基因組多樣性**:轉(zhuǎn)座活動(dòng)增加了基因組的多樣性,,有助于物種適應(yīng)環(huán)境變化,。-**基因調(diào)控**:轉(zhuǎn)座子的插入可能激起或抑制某些基因的表達(dá)。-**新基因產(chǎn)生**:在某些情況下,,轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)可以導(dǎo)致新基因的產(chǎn)生,。
跨膜蛋白的表達(dá)與制備需要采用合適的表達(dá)載體、宿主細(xì)胞,、培養(yǎng)條件和純化工藝等方法,,優(yōu)化表達(dá)和純化過程。Recombinant Human CD24 Protein,His-Avi Tag
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過特殊改造的融合蛋白,,由ProteinA和高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶組成,,具有以下主要應(yīng)用:1.**高通量測(cè)序建庫(kù)**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶可以用于快速構(gòu)建用于高通量測(cè)序的DNA文庫(kù),通過其轉(zhuǎn)座酶活性實(shí)現(xiàn)DNA片段化,,同時(shí)加上測(cè)序接頭,,簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)DNA測(cè)序建庫(kù)的多步過程,。2.**CUT&Tag技術(shù)**:這是一種新興的蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究方法,pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶利用ProteinA與特定抗體結(jié)合,,將轉(zhuǎn)座酶帶到目標(biāo)蛋白附近進(jìn)行DNA切割和標(biāo)簽添加,,實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的高通量測(cè)序分析。CUT&Tag技術(shù)具有高特異性,、低背景噪音,、高靈敏度、良好重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn),,適用于表觀遺傳學(xué),、干細(xì)胞等領(lǐng)域的研究。3.**ATAC-seq**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶也可用于ATAC-seq實(shí)驗(yàn),,這是一種研究染色質(zhì)可及性的方法,,通過轉(zhuǎn)座酶在沒有核酸酶消化的情況下切割染色質(zhì)DNA,然后在切割位點(diǎn)加上測(cè)序接頭,,進(jìn)行后續(xù)的測(cè)序分析,。4.**轉(zhuǎn)錄組測(cè)序快速建庫(kù)**:有研究開發(fā)了基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序快速建庫(kù)方法,例如SHERRY方法,,它利用Tn5轉(zhuǎn)座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈,,簡(jiǎn)化了建庫(kù)過程,適用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,,提高了樣本的利用率和測(cè)序速度,。