重組酶是一類能夠促進(jìn)DNA分子之間同源或非同源序列的重組的酶。它們?cè)诜肿由飳W(xué),、遺傳工程和細(xì)胞生物學(xué)中扮演著重要角色,。重組酶的作用機(jī)制通常涉及識(shí)別特定的DNA序列,催化DNA鏈的斷裂和重新連接,,從而實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重組,。重組酶的主要類型和功能包括:1.限制性內(nèi)切酶**(RestrictionEnzymes):這些酶可以識(shí)別特定的DNA序列并在這些序列處切割DNA鏈。它們是基因工程中常用的工具,,用于DNA片段的精確切割和克隆,。2.連接酶(Ligases):連接酶可以將兩個(gè)DNA片段連接在一起,形成穩(wěn)定的DNA分子,。在DNA克隆和修復(fù)過(guò)程中,,連接酶用于封閉切割位點(diǎn)產(chǎn)生的缺口。3.整合酶(Integrases):整合酶能夠?qū)⒁欢蜠NA序列插入到宿主基因組的特定位置。它們?cè)诨蚝瓦z傳工程中具有應(yīng)用,。4.轉(zhuǎn)座酶(Transposase):轉(zhuǎn)座酶可以催化DNA片段從一個(gè)位置移動(dòng)到另一個(gè)位置,,這種機(jī)制在基因組中存在,并且在遺傳多樣性和進(jìn)化中起著作用,。5.**重組酶**(Recombinases):如RecA蛋白和Rad51蛋白,,它們?cè)谕粗亟M中發(fā)揮作用,促進(jìn)DNA雙鏈斷裂的修復(fù)和遺傳物質(zhì)的重組,。6.DNA聚合酶:這類酶在DNA復(fù)制和修復(fù)中添加新的核苷酸,,以現(xiàn)有DNA鏈為模板合成新的DNA鏈。
5'DNA腺苷?;噭┖惺且环N用于將單鏈DNA(ssDNA)5'端腺苷?;揎椀膶?shí)驗(yàn)工具,其主要應(yīng)用于miRNA等3'端為羥基的RNA或單鏈DNA在克隆,、高通量測(cè)序建庫(kù)或PCR檢測(cè)等時(shí),,在3'端添加的接頭的制備。以下是5'DNA腺苷?;噭┖械囊恍╆P(guān)鍵特點(diǎn)和使用方法:1.**高效轉(zhuǎn)化**:該試劑盒能將95%以上的5'端磷酸化的DNA(pDNA)轉(zhuǎn)化成腺苷?;疍NA(AppDNA),從而提高產(chǎn)量并避免膠回收提純步驟,。2.**操作簡(jiǎn)便**:?jiǎn)尾椒磻?yīng)即可完成腺苷?;?,無(wú)需復(fù)雜的操作或額外的純化步驟,。3.**高溫反應(yīng)**:在65℃的高溫下進(jìn)行反應(yīng),這有助于避免DNA或RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)腺苷?;磻?yīng)的干擾,。4.**適用性廣**:適用于pmol級(jí)別至μmol級(jí)別的底物量,可以方便地根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大反應(yīng)體系,。5.**組成成分**:試劑盒通常包含腺苷?;?Adenylase)、ATP和所需的緩沖液,,以及用于啟動(dòng)反應(yīng)的5'-磷酸化的單鏈DNA,。6.**保存條件**:一般建議在-20℃保存,有效期至少一年,,長(zhǎng)期儲(chǔ)存建議在-70℃,。7.**注意事項(xiàng)**:底物單鏈DNA或RNA的5'端磷酸化是必須的,而3'端可以進(jìn)行氨基化等封閉,也可以不封閉,。反應(yīng)完成后推薦在85℃孵育5分鐘以失活A(yù)denylase,,防止去腺苷酰化現(xiàn)象,。Recombinant Human ULBP-1 Protein,His-Avi TagCas9 NLS與CRISPR/Cas9系統(tǒng)中的gRNA兼容,,可以進(jìn)行位點(diǎn)特異性的DNA切割 。
5'DNA腺苷?;噭┖型ㄟ^(guò)酶學(xué)方法高效地將單鏈DNA(ssDNA)5'端腺苷?;ǔ^D(zhuǎn)化效率可達(dá)95%以上,。以下是實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵步驟和特點(diǎn):1.**單步反應(yīng)**:與傳統(tǒng)化學(xué)方法相比,,該試劑盒可以在一個(gè)簡(jiǎn)單的步驟中完成5'端磷酸化修飾的單鏈DNA或RNA的腺苷酰化修飾,,無(wú)需多步驟操作或純化,。2.**高效率**:試劑盒通常能將95%以上的5'端磷酸化的DNA(pDNA)轉(zhuǎn)化成腺苷酰化DNA(AppDNA),,從而提高產(chǎn)量并避免膠回收提純步驟,。3.**高溫孵育**:在65℃的高溫下進(jìn)行反應(yīng),有助于避免DNA或RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)腺苷?;磻?yīng)的干擾,。4.**酶的來(lái)源**:試劑盒中的腺苷酰化酶(Adenylase)通常來(lái)源于嗜熱古細(xì)菌,,在大腸桿菌中表達(dá)獲得,保證反應(yīng)的高效性,。5.**操作簡(jiǎn)便**:使用MthRNA連接酶,、ATP和5'-磷酸化的單鏈DNA進(jìn)行反應(yīng),操作簡(jiǎn)單,,且腺苷化產(chǎn)物通常不需要進(jìn)行電泳切膠回收,,可以直接通過(guò)乙醇沉淀進(jìn)行進(jìn)一步濃縮后用于后續(xù)的連接反應(yīng)。6.**失活酶**:反應(yīng)完成后推薦在85℃孵育5分鐘以失活A(yù)denylase,,防止去腺苷?;F(xiàn)象,確保腺苷?;嚷什幌陆?。
核酸(DNA和RNA)的可視化是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的一項(xiàng)基本技術(shù),用于檢測(cè)和分析核酸的存在,、大小,、數(shù)量和純度。以下是幾種常用的核酸可視化方法:1.**紫外線(UV)檢測(cè)**:-利用核酸分子對(duì)UV光的吸收特性,特別是在260nm波長(zhǎng)下的吸收峰,。-常用的UV檢測(cè)方法包括凝膠電泳后的凝膠成像系統(tǒng),,可以觀察到凝膠中DNA或RNA的條帶。2.**熒光染料染色**:-使用熒光染料,,如溴化乙錠(EthidiumBromide,EB)或SYBRGreen,,這些染料可以與核酸結(jié)合并在特定波長(zhǎng)的光照射下發(fā)出熒光。-EB常用于凝膠電泳后的DNA可視化,,而SYBRGreen可用于實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)中DNA的檢測(cè),。3.**凝膠電泳**:-通過(guò)將核酸樣品加載到凝膠中,利用電場(chǎng)驅(qū)動(dòng)核酸分子按大小分離,,然后通過(guò)上述的UV或熒光染料進(jìn)行可視化,。4.**紫外交聯(lián)**:-某些熒光染料,如BODIPY或Cy5,,可以通過(guò)紫外交聯(lián)直接結(jié)合到核酸上,,提供更高的靈敏度和特異性。5.**銀染**:-一種比EB染色更靈敏的染色方法,,通過(guò)銀離子與核酸的結(jié)合,,然后還原成金屬銀,形成可見的黑色或棕色條帶,。6.**化學(xué)發(fā)光檢測(cè)**:-使用特定的化學(xué)發(fā)光底物,,如熒光素或魯米諾,與核酸結(jié)合后,,在氧化過(guò)程中產(chǎn)生光信號(hào),。使用體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)合成gRNA,確保gRNA的質(zhì)量和純度,,這對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成功至關(guān)重要 ,。
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是通過(guò)將ProteinA與Tn5轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行融合來(lái)構(gòu)建的。ProteinA是一種來(lái)源于金黃色葡萄球菌的蛋白質(zhì),,它具有高親和力結(jié)合大多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG抗體的Fc片段的能力,。Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種能夠識(shí)別特定DNA序列并在基因組上進(jìn)行“剪切-粘貼”或“復(fù)制-粘貼”的酶,。融合ProteinA的目的是為了在實(shí)驗(yàn)中實(shí)現(xiàn)對(duì)特定蛋白質(zhì)的靶向,。下面是pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶融合的一般步驟:1.**基因克隆**:首先,將Tn5轉(zhuǎn)座酶的基因和ProteinA的基因克隆到一個(gè)表達(dá)載體中,。這通常涉及到分子克隆技術(shù),,如PCR擴(kuò)增、限制性內(nèi)切酶消化和連接酶連接,。2.**融合蛋白設(shè)計(jì)**:設(shè)計(jì)一個(gè)融合蛋白,,其中ProteinA的基因序列和Tn5轉(zhuǎn)座酶的基因序列通過(guò)一個(gè)短的連接肽(LinkerPeptide)相連。這個(gè)連接肽通常包含幾個(gè)氨基酸殘基,以確保兩個(gè)蛋白部分在融合后仍能保持各自的構(gòu)象和功能,。3.**表達(dá)載體構(gòu)建**:將融合基因插入到適合的表達(dá)載體中,,這個(gè)載體應(yīng)該包含適當(dāng)?shù)膯?dòng)子、標(biāo)記基因(如抗性基因)和終止子,,以確保融合蛋白在宿主細(xì)胞中得到高效表達(dá),。4.**宿主細(xì)胞表達(dá)**:將構(gòu)建好的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞(如大腸桿菌)中,通過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白,。在基因編輯中,,Pfu DNA Polymerase 可用于目的基因或編輯工具的克隆,減少克隆過(guò)程中的非目標(biāo)突變,。Endo S糖苷內(nèi)切酶S
將合成的gRNA與Cas9 NLS蛋白混合,,形成復(fù)合物。由于Cas9 NLS蛋白兩端都有NLS,,有助于復(fù)合物快速進(jìn)入細(xì)胞核,。Recombinant Cynomolgus CDH3/Cadherin 3 Protein,His Tag
磁珠,也稱為磁性微球,,是一種具有磁性內(nèi)核的微粒,,表面通常包覆有一層特定材料,如聚合物,、硅酸鹽或金屬,。在生物醫(yī)學(xué)研究和診斷領(lǐng)域,磁珠因其獨(dú)特的物理和化學(xué)特性而被廣泛應(yīng)用,。以下是磁珠的一些特異性:1.**磁性內(nèi)核**:-磁珠的內(nèi)核通常由鐵氧化物等磁性材料構(gòu)成,,使其在外部磁場(chǎng)作用下能夠快速聚集或分散。2.**表面修飾**:-磁珠的表面可以進(jìn)行化學(xué)修飾,,如包覆聚合物,、硅酸鹽或金屬等,以適應(yīng)不同的應(yīng)用需求,。3.**特異性結(jié)合**:-磁珠表面可以修飾有特定的配體或抗體,,使其能夠特異性地結(jié)合目標(biāo)分子,如蛋白質(zhì),、核酸或細(xì)胞等,。4.**生物相容性**:-許多磁珠具有良好的生物相容性,可以用于活細(xì)胞的分離和分析,,而不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷,。5.**穩(wěn)定性**:-磁珠在不同的化學(xué)和物理?xiàng)l件下表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性,適用于各種實(shí)驗(yàn)環(huán)境,。6.**易于操作**:-利用簡(jiǎn)單的磁鐵或磁分離裝置,,可以快速實(shí)現(xiàn)磁珠與溶液的分離,,操作簡(jiǎn)便。7.**多功能性**:-磁珠可以用于多種生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用,,包括但不限于核酸提取,、蛋白質(zhì)純化、細(xì)胞分離,、免疫檢測(cè),、藥物篩選等。Recombinant Cynomolgus CDH3/Cadherin 3 Protein,His Tag