重組酶是一類能夠促進(jìn)DNA分子之間同源或非同源序列的重組的酶。它們在分子生物學(xué),、遺傳工程和細(xì)胞生物學(xué)中扮演著重要角色,。重組酶的作用機制通常涉及識別特定的DNA序列,催化DNA鏈的斷裂和重新連接,,從而實現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重組,。重組酶的主要類型和功能包括:1.限制性內(nèi)切酶**(RestrictionEnzymes):這些酶可以識別特定的DNA序列并在這些序列處切割DNA鏈。它們是基因工程中常用的工具,,用于DNA片段的精確切割和克隆,。2.連接酶(Ligases):連接酶可以將兩個DNA片段連接在一起,,形成穩(wěn)定的DNA分子。在DNA克隆和修復(fù)過程中,,連接酶用于封閉切割位點產(chǎn)生的缺口,。3.整合酶(Integrases):整合酶能夠?qū)⒁欢蜠NA序列插入到宿主基因組的特定位置。它們在基因和遺傳工程中具有應(yīng)用,。4.轉(zhuǎn)座酶(Transposase):轉(zhuǎn)座酶可以催化DNA片段從一個位置移動到另一個位置,,這種機制在基因組中存在,并且在遺傳多樣性和進(jìn)化中起著作用,。5.**重組酶**(Recombinases):如RecA蛋白和Rad51蛋白,,它們在同源重組中發(fā)揮作用,促進(jìn)DNA雙鏈斷裂的修復(fù)和遺傳物質(zhì)的重組,。6.DNA聚合酶:這類酶在DNA復(fù)制和修復(fù)中添加新的核苷酸,,以現(xiàn)有DNA鏈為模板合成新的DNA鏈。
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過改造的高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶,與ProteinA融合,,形成一種新型融合酶,,應(yīng)用于CUT&Tag技術(shù)中,用于研究蛋白質(zhì)與基因組DNA的相互作用,。這種融合酶具備以下特點:1.**高活性**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是超高活性的突變形式,,體外轉(zhuǎn)座效率比野生型高1000倍。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的N端結(jié)構(gòu)域為ProteinA的一部分,,可以與免疫球蛋白的Fc區(qū)相互作用,,特別是與大多數(shù)哺乳動物的IgG結(jié)合。3.**Tn5轉(zhuǎn)座酶活性**:C端結(jié)構(gòu)域為Tn5轉(zhuǎn)座酶,,能夠特異性識別轉(zhuǎn)座子兩端反向重復(fù)的ME序列(MosaicEnd),,并在形成轉(zhuǎn)座復(fù)合體后隨機插入靶DNA中。4.**應(yīng)用廣**:適用于CUT&Tag技術(shù),、高通量測序建庫,、ATAC-seq等,特別適用于早期胚胎發(fā)育,、干細(xì)胞,、以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域,。5.**操作簡便**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用簡化了實驗步驟,,可以在一步反應(yīng)中實現(xiàn)DNA片段化和接頭連接,從細(xì)胞到二代測序文庫的轉(zhuǎn)化過程需9小時,。6.**低細(xì)胞投入量**:CUT&Tag技術(shù)允許從低至60個細(xì)胞的樣本中獲得結(jié)果,,甚至可以應(yīng)用于單細(xì)胞水平的研究,。7.**高質(zhì)量結(jié)果**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用可以保證DNA片段化,同時獲得的蛋白純度高,、核酸殘留低,。Recombinant Mouse EPHA3 Protein,His Tag在一項研究中,比較了具有不同NLS融合的Cas9蛋白和Cas9 mRNA在斑馬魚基因組編輯中的效率,。
dGTPSolution(脫氧鳥苷三磷酸溶液)在分子克隆中扮演著重要角色,,主要應(yīng)用包括但不限于以下幾個方面:1.**DNA合成**:dGTP作為DNA聚合酶的底物之一,在分子克隆中用于合成新的DNA鏈,,特別是在PCR擴(kuò)增和cDNA合成中,。2.**PCR擴(kuò)增**:在常規(guī)PCR和高保真PCR中,dGTP提供必要的核苷酸,,以確保目標(biāo)DNA片段的準(zhǔn)確復(fù)制,。3.**cDNA合成**:在從mRNA模板合成cDNA的過程中,dGTP是合成互補DNA鏈的關(guān)鍵成分,。4.**DNA測序**:dGTP也用于Sanger測序等DNA測序技術(shù)中,,幫助合成測序反應(yīng)中的DNA鏈。5.**質(zhì)粒構(gòu)建**:在質(zhì)?;蚱渌d體的構(gòu)建過程中,,dGTP可能用于填補缺口或連接DNA片段。6.**引物延伸**:在引物延伸反應(yīng)中,,dGTP用于延伸引物,,以合成完整的DNA鏈。7.**DNA標(biāo)記**:dGTP可以用于DNA片段的標(biāo)記,,便于后續(xù)的克隆和檢測,。dGTPSolution通常以100mM的濃度提供,以便于在實驗中根據(jù)需要進(jìn)行稀釋,。在使用時,,應(yīng)確保產(chǎn)品具有高純度、無DNase和RNase污染,,以保證實驗的準(zhǔn)確性和重復(fù)性,。此外,dGTPSolution應(yīng)儲存在-20°C的條件下,,避免反復(fù)凍融,,以保持其穩(wěn)定性。
Benzonase核酸酶殘留檢測試劑盒的組分經(jīng)過優(yōu)化,,以確保高靈敏度,、高重復(fù)性和高準(zhǔn)確性的檢測結(jié)果。以下是該試劑盒優(yōu)化的組分:1.**2×BenzDetectionSolution**:這是檢測中的關(guān)鍵組分,用于提供反應(yīng)所需的緩沖環(huán)境,,規(guī)格為1mL,。2.**標(biāo)準(zhǔn)品**:試劑盒中包含多個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,包括25ng/ml,、12.5ng/ml,、6.3ng/ml、3.1ng/ml和1.5ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品,,各100μL,。這些標(biāo)準(zhǔn)品用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而準(zhǔn)確計算出樣品中的Benzonase殘留量,。3.**樣品稀釋液**:提供1.5mL的樣品稀釋液,,用于適當(dāng)稀釋待檢測樣品,以適應(yīng)檢測范圍,。4.**反應(yīng)緩沖液(10XReactionBuffer)**:用于調(diào)整反應(yīng)體系的pH值和離子強度,,保證酶活的正常發(fā)揮。5.**Benzonase底物(5XBenzonaseSubstrate)**:這是含有熒光標(biāo)記的DNA探針,,用于檢測Benzonase的活性,。當(dāng)?shù)孜锉籅enzonase切割后,熒光信號增強,,從而可以檢測到Benzonase的存在,。6.**無核酸酶水(Nuclease-freeWater)**:確保在稀釋和樣品準(zhǔn)備過程中不會引入額外的核酸酶污染。FnCas12a的雙鏈或單鏈DNA靶標(biāo)都能激發(fā)其反式剪切活性,,即在形成三元復(fù)合物后,,針對非特異序列ssDNA的剪切。
合成互補DNA(cDNA)的試劑盒是一種實驗室工具,,用于從RNA模板通過逆轉(zhuǎn)錄過程合成DNA,。逆轉(zhuǎn)錄是一種酶促反應(yīng),其中RNA模板被逆轉(zhuǎn)錄酶(一種特殊的DNA聚合酶)讀取,,并根據(jù)RNA序列合成一條互補的DNA鏈,。這個過程在分子生物學(xué)研究中非常重要,因為它允許科學(xué)家從RNA樣品中獲取遺傳信息,,并進(jìn)行進(jìn)一步的分析和應(yīng)用,。cDNA合成試劑盒通常包含以下關(guān)鍵組分:1.**逆轉(zhuǎn)錄酶**:一種特殊的酶,能夠以RNA為模板合成DNA鏈,。例如,,M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶是一種常用的逆轉(zhuǎn)錄酶。2.**RNase抑制劑**:一種蛋白質(zhì),,可以防止RNA樣品在實驗過程中被環(huán)境中的RNase酶降解,。3.**緩沖液**:提供適宜的化學(xué)環(huán)境,,保證逆轉(zhuǎn)錄酶的活性和反應(yīng)的順利進(jìn)行。4.**dNTPs**:四種去氧核苷酸三磷酸(dATP,、dCTP,、dGTP和dTTP),,是合成DNA鏈的原料,。5.**引物**:短的單鏈DNA或RNA基礎(chǔ)片段,用于啟動cDNA的合成,。常見的引物類型包括oligo(dT)引物(針對mRNA的poly(A)尾),、隨機引物或特異性引物。6.**水**:通常是無核酸酶的水,,以避免樣品被污染,。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I具有特異性識別能力,能夠識別雙鏈DNA中的5'-(C/T)CCTT-3'序列,。Recombinant Human IL-18BP Protein,hFc Tag
在目標(biāo)蛋白的C末端添加His標(biāo)簽和Avi標(biāo)簽,。有助于通過親和層析進(jìn)行蛋白純化,而Avi標(biāo)簽則可以用于生物素,。Recombinant Human RETProtein,His Tag
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)是一種用于合成互補DNA(cDNA)的試劑盒,,它通過逆轉(zhuǎn)錄過程從信使RNA(mRNA)或總RNA模板合成cDNA的鏈。這類試劑盒通常包含逆轉(zhuǎn)錄酶(ReverseTranscriptase,,RT)和其他必要的組分,,以確保高效和準(zhǔn)確的cDNA合成。RNaseH-表示該試劑盒使用的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏RNaseH活性,,這意味著在合成cDNA鏈的過程中不會發(fā)生RNA的降解,,從而可以產(chǎn)生更高產(chǎn)量的全長cDNA,特別是從較長的模板(可達(dá)13kb),。該試劑盒通常包括以下組分:-逆轉(zhuǎn)錄酶,,如RevertAidHMinusM-MuLVReverseTranscriptase,它通過點突變完全消除了RNaseH活性,。-RiboLockRNaseInhibitor,,這是一種重組蛋白,可有效保護(hù)RNA在高達(dá)55°C的溫度下不受RNases的降解,。-緩沖液,、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)和其他輔助成分,以支持cDNA合成反應(yīng),。-有時還包括用于去除RNA樣品中污染的基因組DNA的DNaseI,。合成的cDNA可以作為PCR或?qū)崟rPCR的模板直接使用,也適用于第二鏈cDNA合成或線性RNA放大,。此外,,可以在cDNA合成過程中加入放射性或非放射性標(biāo)記的核苷酸,,以便在包括微陣列在內(nèi)的雜交實驗中作為探針使用。Recombinant Human RETProtein,His Tag