EndoS,，即糖苷內(nèi)切酶S（Endo-S），是一種具有高度特異性的酶,，它在生物化學研究中有著重要應用,，尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯(lián)物（ADCs）的研究中。以下是EndoS的一些關鍵特點：1.**特異性**：EndoS能夠特異性地識別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結(jié)構(gòu),，即在N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間的連接處進行切割,。2.**應用**：在制備糖鏈定點ADC化合物中，EndoS被用于將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體糖基化位點,，提供了一種重要的技術(shù)方法,。3.**兼容性**：EndoS對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性，可以接受不同生物正交基團,、熒光基團等衍生物作為底物,，實現(xiàn)抗體糖基化修飾,。4.**活性**：EndoS的活性對多肽沒有嚴格的要求，可以接受蛋白質(zhì),、肽,、天門冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是,，對于具有三,、四個支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖，EndoS沒有活性,。5.**產(chǎn)品形式**：EndoS通常以帶有His標簽的形式存在,，便于從反應中去除，這在實驗操作中提供了便利,。6.**研究進展**：EndoS在去糖基化方法研究中是一個重要的工具,，特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結(jié)構(gòu)和功能時。

AdvanceFastPCRMasterMix(2×)與高保真DNA聚合酶之間的具體聯(lián)系主要體現(xiàn)在以下幾個方面：1.**成分**：高保真DNA聚合酶是AdvanceFastPCRMasterMix(2×)中的關鍵成分之一,。這種酶負責在PCR過程中合成新的DNA鏈，其保真度決定了擴增過程的準確性,。2.**保真度**：AdvanceFastPCRMasterMix(2×)中的HieffCanace?AdvanceFastHigh-FidelityDNAPolymerase具有高保真度,，這意味著在復制DNA時，它能夠更準確地維持原始模板DNA的序列,，減少錯誤或突變的引入,。3.**酶的活性**：該產(chǎn)品中的高保真DNA聚合酶具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'核酸外切酶活性，這些活性有助于提高PCR擴增的特異性和效率,。4.**擴增速度**：高保真DNA聚合酶在AdvanceFastPCRMasterMix(2×)中提供了快速的擴增速度,，如5秒/kb，這有助于減少PCR擴增過程中的非特異性擴增,。5.**適用性**：高保真DNA聚合酶使得AdvanceFastPCRMasterMix(2×)能夠適用于不同GC含量的基因擴增,，包括高GC和低GC區(qū)域，提高了PCR的適用性和成功率,。

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是通過將ProteinA與Tn5轉(zhuǎn)座酶進行融合來構(gòu)建的。ProteinA是一種來源于金黃色葡萄球菌的蛋白質(zhì),，它具有高親和力結(jié)合大多數(shù)哺乳動物IgG抗體的Fc片段的能力,。Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種能夠識別特定DNA序列并在基因組上進行“剪切-粘貼”或“復制-粘貼”的酶。融合ProteinA的目的是為了在實驗中實現(xiàn)對特定蛋白質(zhì)的靶向。下面是pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶融合的一般步驟：1.**基因克隆**：首先,，將Tn5轉(zhuǎn)座酶的基因和ProteinA的基因克隆到一個表達載體中,。這通常涉及到分子克隆技術(shù)，如PCR擴增,、限制性內(nèi)切酶消化和連接酶連接,。2.**融合蛋白設計**：設計一個融合蛋白，其中ProteinA的基因序列和Tn5轉(zhuǎn)座酶的基因序列通過一個短的連接肽（LinkerPeptide）相連,。這個連接肽通常包含幾個氨基酸殘基,，以確保兩個蛋白部分在融合后仍能保持各自的構(gòu)象和功能。3.**表達載體構(gòu)建**：將融合基因插入到適合的表達載體中,，這個載體應該包含適當?shù)膯幼?、標記基因（如抗性基因）和終止子，以確保融合蛋白在宿主細胞中得到高效表達,。4.**宿主細胞表達**：將構(gòu)建好的表達載體轉(zhuǎn)化到宿主細胞（如大腸桿菌）中,，通過誘導表達融合蛋白。

5'DNA腺苷?；噭┖型ㄟ^特定的酶催化反應,，將5'-磷酸化的單鏈DNA（pDNA）轉(zhuǎn)化為5'-腺苷酰化DNA（AppDNA）,。以下是啟用5'-磷酸化的單鏈DNA的一般步驟：1.**準備反應體系**：-根據(jù)試劑盒說明書,，準備所需的反應組分，包括5'-磷酸化的單鏈DNA,、腺苷?；福ㄈ鏏denylase或MthRNA連接酶）、ATP和相應的緩沖液,。2.**混合組分**：-將5'-磷酸化的單鏈DNA與腺苷?；浮TP和緩沖液混合在適當?shù)姆磻萜髦小?.**孵育反應**：-將混合好的反應體系在指定的溫度（通常是65℃）下孵育一定的時間,，以允許酶將ATP中的AMP部分轉(zhuǎn)移到DNA的5'端,。4.**酶失活**：-反應完成后，在85℃孵育5分鐘以失活腺苷?；?，這一步是為了防止后續(xù)的去腺苷酰化現(xiàn)象,，確保腺苷?；嚷什幌陆怠?.**產(chǎn)物收集**：-由于轉(zhuǎn)化效率高,，通常不需要進行凝膠純化步驟,?？梢酝ㄟ^乙醇沉淀等方法收集腺苷酰化后的DNA產(chǎn)物,。6.**產(chǎn)物應用**：-收集的腺苷?；疍NA可以直接用于后續(xù)的克隆、測序,、連接或其他分子生物學實驗,。7.**注意事項**：-確保所有操作在無RNA酶和無DNA酶的環(huán)境中進行，以避免污染,。-使用時需注意反應體系的準確性,，確保底物、酶和ATP的比例適當,。

EndoS糖苷內(nèi)切酶S（Endo-S）的特異性主要體現(xiàn)在其對糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)的識別和切割能力上,。以下是Endo-S的一些關鍵特異性特點：1.**糖鏈識別**：Endo-S能夠特異性識別糖鏈結(jié)構(gòu)中的某些特定序列或結(jié)構(gòu)，尤其是N-連接糖鏈的殼二糖重要結(jié)構(gòu),。2.**切割位點**：Endo-S在糖鏈的特定位點進行切割,，通常是在N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間的β-N-糖苷鍵。3.**不影響抗原性**：Endo-S的切割位點選擇性高,，不會破壞糖蛋白的抗原決定簇,，因此在某些應用中可以保持糖蛋白的免疫原性。4.**應用多樣性**：Endo-S可以用于多種糖蛋白的去糖基化,，包括抗體和其他具有N-連接糖鏈的蛋白質(zhì),。5.**研究和藥物開發(fā)**：在研究糖蛋白的結(jié)構(gòu)和功能時，Endo-S提供了一種工具來研究糖鏈對蛋白質(zhì)性質(zhì)的影響,。此外,，在藥物開發(fā)中，Endo-S用于制備糖鏈定點ADC化合物,，通過精確控制藥物與抗體的連接點,，提高藥物的療效和減少副作用。6.**兼容性**：Endo-S對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,，可以接受不同生物正交基團,、熒光基團等衍生物作為底物，實現(xiàn)抗體糖基化修飾,。7.**高效性**：Endo-S在催化糖鏈轉(zhuǎn)移或切割反應中表現(xiàn)出高效性,，有助于實現(xiàn)高效獲得功能修飾的糖工程抗體?？梢岳矛F(xiàn)有的計算工具,，如CRISPR design tools，預測gRNA的活性和特異性,，以輔助實驗設計 ,。溴化乙錠溶液(EB,10mg/ml,RNase free)

牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I具有解超螺旋的活性，可以解開雙鏈閉合環(huán)狀DNA的超螺旋結(jié)構(gòu),，便于后續(xù)的酶切反應,。Recombinant Biotinylated Human CCL5 Protein,His-Avi Tag

pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過特殊改造的融合蛋白，由ProteinA和高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶組成,，具有以下主要應用：1.**高通量測序建庫**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶可以用于快速構(gòu)建用于高通量測序的DNA文庫,，通過其轉(zhuǎn)座酶活性實現(xiàn)DNA片段化，同時加上測序接頭,，簡化了傳統(tǒng)DNA測序建庫的多步過程,。2.**CUT&Tag技術(shù)**：這是一種新興的蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究方法，pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶利用ProteinA與特定抗體結(jié)合,，將轉(zhuǎn)座酶帶到目標蛋白附近進行DNA切割和標簽添加,，實現(xiàn)對蛋白質(zhì)結(jié)合位點的高通量測序分析。CUT&Tag技術(shù)具有高特異性,、低背景噪音,、高靈敏度、良好重復性等優(yōu)點,，適用于表觀遺傳學,、干細胞等領域的研究。3.**ATAC-seq**：pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶也可用于ATAC-seq實驗,，這是一種研究染色質(zhì)可及性的方法,，通過轉(zhuǎn)座酶在沒有核酸酶消化的情況下切割染色質(zhì)DNA，然后在切割位點加上測序接頭,，進行后續(xù)的測序分析,。4.**轉(zhuǎn)錄組測序快速建庫**：有研究開發(fā)了基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)錄組測序快速建庫方法，例如SHERRY方法,，它利用Tn5轉(zhuǎn)座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈,，簡化了建庫過程，適用于單細胞轉(zhuǎn)錄組測序,，提高了樣本的利用率和測序速度,。