M-MLVUltraReverseTranscriptase(200U/μL)是一種高效的逆轉(zhuǎn)錄酶,,它基于MoloneyMurineLeukemiaVirus(M-MLV)逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行基因工程改造,以提高其熱穩(wěn)定性和合成效率,。以下是該產(chǎn)品的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高濃度**:提供200U/μL的高濃度,,便于進(jìn)行各種規(guī)模的實(shí)驗(yàn)。2.**熱穩(wěn)定性**:該酶具有較高的熱穩(wěn)定性,,可以在高達(dá)55°C的溫度下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),,有助于打開RNA的二級結(jié)構(gòu),提高長鏈cDNA的合成效率,。3.**低RNaseH活性**:與野生型M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶相比,,這種酶的RNaseH活性較低,有助于保護(hù)RNA模板不被降解,,從而提高長鏈cDNA的合成,。4.**合成長鏈cDNA的能力**:能夠合成長達(dá)5kb甚至更長的cDNA,適合于需要合成全長或長片段cDNA的實(shí)驗(yàn),。5.**適用于多種RNA模板**:可以用于從總RNA或mRNA模板合成cDNA鏈,,適用于實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR、3'-和5'-RACE等實(shí)驗(yàn),。6.**儲(chǔ)存條件**:建議在-20°C下保存,,以保持酶的活性和穩(wěn)定性。7.**使用方便**:通常,,該酶會(huì)與5XFirst-StrandBuffer,、0.1MDTT等組分一起提供,方便用戶進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),。8.**產(chǎn)品規(guī)格**:提供不同規(guī)格的產(chǎn)品,,以滿足不同實(shí)驗(yàn)規(guī)模的需求。9.**應(yīng)用廣**:適用于科研,、分子診斷,、基因表達(dá)分析等領(lǐng)域。
TthDNAPolymerase在基因克隆實(shí)驗(yàn)中的具體作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**PCR擴(kuò)增**:TthDNAPolymerase在有Mg2+存在的條件下,具有DNA多聚酶活性,,可以用于PCR反應(yīng),,高效擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。這對于獲取足夠量的特定基因片段至關(guān)重要,,因?yàn)檫@些片段將用于后續(xù)的克隆步驟,。2.**逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)**:TthDNAPolymerase具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性,在Mn2+存在的情況下,,此活性增強(qiáng),,使得該酶可以用于一管式RT-PCR。這意味著它可以在同一反應(yīng)管中完成逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng),,簡化了從RNA模板獲取cDNA的過程,。3.**耐高溫特性**:TthDNAPolymerase的耐熱性比Taq酶高,適用于高GC含量模板的擴(kuò)增,。這一特性對于克隆高GC含量的基因尤其重要,,因?yàn)楦逩C含量可能導(dǎo)致其他DNA聚合酶效率低下。4.**3'→5'外切酶活性的缺乏**:TthDNAPolymerase基本上沒有3'→5'外切酶活性,,這使得它在需要精確末端的克隆實(shí)驗(yàn)中非常有用,,因?yàn)樗梢詼p少由于酶活性引起的末端修飾。5.**5'→3'外切酶活性**:TthDNAPolymerase具有5'→3'外切酶活性,,這在需要精確切除DNA片段的末端或進(jìn)行其他特殊類型的克隆時(shí)非常有用,。江蘇九價(jià)HPV疫苗開發(fā)服務(wù)技術(shù)服務(wù)技術(shù)服務(wù)利用硫酸銨沉淀、離子交換層析和疏水相互作用層析等方法,,從大腸桿菌培養(yǎng)物中提取和純化病毒樣顆粒,。
RNaseInhibitor,HumanPlacenta(人胎盤RNases抑制劑)是一種用于保護(hù)RNA不被核糖核酸酶(RNases)降解的蛋白質(zhì)。以下是它的一些主要特點(diǎn):1.**來源與表達(dá)**:由大腸桿菌重組表達(dá),,表達(dá)基因來源于人胎盤中編碼該酶的基因,。2.**抑制能力**:對RNaseA、RNaseB,、RNaseC和人胎盤核糖核酸酶有極強(qiáng)的抑制能力,,其Ki值約為4×10^-14M,遠(yuǎn)低于通??贵w和抗原的親和常數(shù)(10^-6-10^-9M),。3.**快速結(jié)合**:RNaseInhibitor與人胎盤核糖核酸酶的結(jié)合非常快速,,幾乎在加入的瞬間就會(huì)形成復(fù)合物從而抑制其酶活性,。4.**pH穩(wěn)定性**:在pH5-8范圍內(nèi)保持其RNA酶抑制活性,在pH7-8時(shí)抑制活性比較高,。5.**DTT依賴性**:維持其活力需要至少在溶液中含有1mMDTT,。6.**His-tag**:產(chǎn)品N端帶有His-tag,可以通過相應(yīng)的His抗體檢測或通過磁珠,、鎳柱吸附去除,。7.**用途**:用于cDNA合成,,體外轉(zhuǎn)錄,體外翻譯,,以及mRNA-protein復(fù)合物分離純化等過程中保護(hù)RNA不被降解,;還可用于特定RNase活性的鑒定等。8.**儲(chǔ)存溶液**:含有20mMHEPES-KOH(pH7.5),50mMKCl,5mMDTT,50%(v/v)glycerol,。
這項(xiàng)技術(shù)服務(wù)在多個(gè)領(lǐng)域展現(xiàn)出了巨大的應(yīng)用潛力,。在疫苗研發(fā)領(lǐng)域,VLP作為一種新型的疫苗候選物,,具有良好的免疫原性,,能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。江畢赤酵母表達(dá)的VLP疫苗可以針對多種病毒性疾病,,為預(yù)防和控制傳染病提供了創(chuàng)新的解決方案,。例如,在應(yīng)對一些新興病毒威脅時(shí),,VLP疫苗能夠快速啟動(dòng)研發(fā)和生產(chǎn),,為公眾健康提供及時(shí)的保護(hù)。此外,,在生物醫(yī)學(xué)研究中,,VLP還可以作為藥物載體或診斷試劑的重要組成部分,用于疾病的和檢測,。評估抗體的免疫原性,,包括其在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)誘發(fā)的免疫反應(yīng)。這通常涉及對抗體藥物的抗藥抗體進(jìn)行檢測,。
熱敏感性雙鏈脫氧核糖核酸酶(ThermolabiledsDNase)是一種用于快速,、安全地去除RNA樣品中基因組DNA污染的重組表達(dá)的酶。以下是其主要特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**dsDNA特異性**:ThermolabiledsDNase能夠特異性剪切雙鏈DNA中的磷酸二酯鍵,,產(chǎn)生帶有5’-磷酸與3’-羥基末端的寡核苷酸,,而對單鏈DNA(如cDNA)和RNA幾乎無酶切活性。在鎂離子存在的情況下,,對dsDNA的酶切活性比對ssDNA的酶切活性高約5000倍,。2.**熱不穩(wěn)定性**:該酶在55℃加熱5分鐘即可被不可逆地失活,這使得它非常適合在反轉(zhuǎn)錄之前快速去除RNA樣品中的基因組DNA污染,。3.**活性強(qiáng)**:ThermolabiledsDNase在20-40℃保持高活性狀態(tài),,比牛DNaseI的活力約高30倍。2分鐘孵育即可將RNA樣品中所含有的基因組DNA或1μg基因組DNA消化完畢,。4.**用途**:主要用于制備不含DNA的RNA樣品,;在反轉(zhuǎn)錄前去除RNA樣品中的基因組DNA污染;以及在體外T3、T7,、SP6等RNAPolymerases催化的RNA合成后消化去除模板DNA,。5.**來源**:通過_Pichiapastoris_重組表達(dá)ThermolabiledsDNase基因。6.**分子量**:43kDa,。7.**純度**:不含其他DNA內(nèi)切酶與外切酶活性,,不含RNA酶活性,。畢赤酵母不僅用于實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的蛋白生產(chǎn),,還廣泛應(yīng)用于工業(yè)規(guī)模的生物分子生產(chǎn) 。遼寧畢赤酵母分泌表達(dá)技術(shù)服務(wù)技術(shù)服務(wù)
畢赤酵母是一種異源蛋白表達(dá)平臺(tái)菌株,。人們開發(fā)了各種策略來提高這種酵母菌株重組蛋白的表達(dá)效率,;遼寧重組人源膠原蛋白技術(shù)服務(wù)開發(fā)
使用M-MLVUltraReverseTranscriptase(200U/μL)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄時(shí),通常需要以下緩沖液和其他組分:1.**反應(yīng)緩沖液**:通常提供的5XFirst-StrandBuffer,,使用時(shí)需稀釋成1X工作濃度,。例如,5XReverseTranscriptaseM-MLVBuffer的組成可能包含Tris-HCl(pH8.3),、KCl,、MgCl2、DTT等,。2.**dNTP混合物**:包含四種去氧核苷酸三磷酸(dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP),,通常為10mM的濃度,使用時(shí)稀釋至反應(yīng)所需的濃度(如0.5-1mM),。3.**引物**:可以是Oligo(dT)引物,、隨機(jī)六聚體引物(RandomPrimers)或基因特異性引物(GeneSpecificPrimers),用于與RNA模板退火并啟動(dòng)cDNA合成,。4.**RNA模板**:可以是總RNA或mRNA,,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求確定使用量,一般為10pg至5μg,。5.**RNase抑制劑**:如RNaseInhibitor(40U/μl),,用于防止RNA模板被RNase酶降解。6.**水**:RNase-free的水,,確保反應(yīng)體系中沒有核酸酶污染,。7.**逆轉(zhuǎn)錄酶**:M-MLVUltraReverseTranscriptase(200U/μL),通常在反應(yīng)中加入,,使用量根據(jù)模板RNA的量和酶的活性單位來確定,。遼寧重組人源膠原蛋白技術(shù)服務(wù)開發(fā)