BstDNA聚合酶對dUTP的耐受性對實驗結果有以下影響:1.**防止交叉污染**:BstDNA聚合酶具有較高的dUTP耐受性,,這意味著它可以在反應體系中添加dUTP/UDG酶防污染系統(tǒng)的情況下工作,,有效防止LAMP產(chǎn)物的交叉污染,,確保數(shù)據(jù)的準確性。2.**保持靈敏度和擴增效率**:即使在引入dUTP/UDG酶防污染系統(tǒng),,使用dUTP替換dTTP的情況下,,BstDNA聚合酶的靈敏度及擴增效率不受影響。實驗數(shù)據(jù)顯示,,在反應體系中添加dUTP對BstDNA聚合酶的擴增靈敏度和效率沒有負面影響,。3.**提高實驗的可靠性**:由于BstDNA聚合酶能夠在高濃度的dUTP存在下保持活性,這使得它在進行等溫擴增時更加可靠,,尤其是在需要防止DNA污染的實驗中,。4.**兼容dUTP/UDG系統(tǒng)**:BstDNA聚合酶對dUTP的耐受性好,高度兼容dUTP/UDG系統(tǒng),,這對于避免交叉污染和提高實驗結果的準確性至關重要,。綜上所述,BstDNA聚合酶的高dUTP耐受性為等溫擴增實驗提供了一個重要的優(yōu)勢,,即在保持高靈敏度和擴增效率的同時,,能夠有效防止交叉污染,從而提高實驗結果的可靠性和準確性,。Tn5 轉座酶能夠特異性識別轉座子兩端反向重復的 ME 序列,,對目標 DNA 的識別具有高度特異性。Recombinant Human NKG2A&CD94 Protein,hFc,Flag Tag
磁珠法PCR/DNA純化試劑盒與傳統(tǒng)純化方法相比具有以下優(yōu)勢:1.**操作簡便快捷**:磁珠法純化過程通??梢栽?5分鐘內完成,,包括結合、洗滌和洗脫步驟,,無需復雜的離心或抽濾操作,。2.**高純度和高回收率**:磁珠法純化得到的DNA純度高,通?;厥章士梢赃_到90%以上,,適用于100bp以上的DNA片段的純化,對達到10kb片段DNA的純化也能保持較好的效果,。3.**適用性廣**:磁珠法PCR/DNA純化試劑盒適用于多種樣本類型,,包括PCR產(chǎn)物、酶切產(chǎn)物,、連接產(chǎn)物等,,也適用于低濃度樣品的濃縮。4.**安全性高**:操作過程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,,更加環(huán)保和安全,。5.**靈活性**:可以根據(jù)實際狀況靈活調節(jié)磁珠用量,適應不同體積和濃度的樣品處理,。6.**自動化和高通量**:磁珠法純化試劑盒適合手工操作,,也可用于自動化工作站或核酸自動提取儀,,實現(xiàn)高通量操作。7.**溫和的條件**:磁珠法條件溫和,,對DNA的損傷小,,適合后續(xù)的多種分子生物學實驗,如酶切,、連接、轉化細菌,、測序,、PCR、雜交等,。8.DNA片段適應性**:適用于從150bp到50kb的DNA片段的純化,,能夠滿足大多數(shù)分子生物學實驗的需求。
BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)是一種來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillussubtilis)的DNA聚合酶。這種酶保留了BsuDNAPolymeraseI的5'-3'聚合酶活性,,但缺失了5'-3'核酸外切酶結構域,,因此它具有鏈置換活性,可以用于重組酶聚合酶擴增(RPA)等恒溫擴增技術,。以下是BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)的一些關鍵特性和應用:1.**活性定義**:在37°C條件下,,30分鐘內將10nmol的dNTP摻入酸不溶性物質所需的酶量定義為1個活性單位(U)。2.**熱失活條件**:75°C,,20分鐘,。3.**酶保存液成分**:25mMTris-HCl,50mMNaCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,50%Glycerol,pH7.4@25°C。4.**儲存條件**:-25~-15°C保存,,有效期2年,。5.**注意事項**:-由于缺乏3'-5'核酸外切酶活性,BsuDNAPolymerase(LargeFragment)不能切除3'未配對的突出末端,,因而不適用于生成平齊末端,。-25°C時BsuDNAPolymerase(LargeFragment)保留50%的活性,是同溫度下Klenow片段(3'-5'exo-)的兩倍,。6.**應用**:-隨機引物法標記,。-cDNA第二條鏈的合成。-單個dA的加尾,。-鏈置換的DNA合成,。
嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶I(BstDNAPolymeraseI)是一種熱穩(wěn)定的酶,它在高溫下(55-65°C)仍然保持活性,,這使得它在分子生物學實驗中非常有用,,尤其是在需要高溫反應的實驗中,,如熱循環(huán)擴增(PCR)。BstDNAPolymeraseI具有以下特性:1.**熱穩(wěn)定性**:BstDNAPolymeraseI在高溫下具有較高的穩(wěn)定性,,適用于高溫反應的實驗,,如PCR。2.**3'到5'外切酶活性**:這種酶具有3'到5'外切酶活性,,能夠切除DNA末端上的非特異性引物和雜交DNA,,使其成為等溫擴增應用的理想酶。3.**耐鹽性**:BstDNAPolymeraseI在高鹽條件下仍能保持穩(wěn)定活性,,這在一些特殊的PCR應用中非常有用,。4.**等溫擴增**:由于其3'到5'外切酶活性,BstDNAPolymeraseI用于等溫擴增反應,,如LAMP技術,,這種技術能夠在恒溫下進行DNA擴增,無需繁瑣的溫度循環(huán),。5.**快速PCR**:由于其高溫穩(wěn)定性,,BstDNAPolymeraseI也可用于快速PCR反應,縮短了實驗時間,。6.**高GC含量模板擴增**:BstDNAPolymeraseI對高GC含量模板的擴增效果較好,,因此在一些難擴增的模板中表現(xiàn)出色。在MAGE-A3基因序列的C末端添加His標簽和Avi標簽序列,。His標簽有助于通過金屬螯合親和層析進行蛋白純化,。
不同的DNA聚合酶在PCR中的應用差異主要體現(xiàn)在以下幾個方面:1.**TaqDNAPolymerase**:是常用的DNA聚合酶之一,來源于Thermusaquaticus,,具有較高的熱穩(wěn)定性及擴增效率,。但它缺乏3'-5'核酸外切酶活性,即沒有校正功能,,因此其保真性相對較低,。Taq酶適合擴增較短的DNA片段(通常不超過3kb),且在PCR產(chǎn)物的3'端帶A堿基,,可直接用于TA克隆,。2.**PfuDNAPolymerase**:來源于Pyrococcusfuriosus,是一種高保真聚合酶,,具有3'-5'外切酶活性,,可以修復并糾正PCR反應中的腺嘌呤堿基誤配,有效防止誤差累積,。Pfu聚合酶適用于需要高度準確的PCR擴增和DNA測序,。3.**VentDNAPolymerase**:來源于Thermuslitoralis,具有中等保真度,比Taq聚合酶高兩倍,。它適用于GC含量高或復雜序列的PCR擴增,,具有較高的熱穩(wěn)定性,半衰期可達6.7小時,。4.**KODDNAPolymerase**:來源于Thermococcuskodakaraensis,,具有高保真性和高熱穩(wěn)定性,保真性是Taq的約50倍,,同時具有合成速度快的特點,,聚合速度約為普通PfuDNAPolymerase的5倍,特別適合于高保真地擴增6kb以內的PCR產(chǎn)物,。牛痘DNA拓撲異構酶I是一種來源于牛痘病毒的酶,,有多種作用于DNA分子的能力。Recombinant Human NKG2A&CD94 Protein,hFc,Flag Tag
CRISPR-Cas12a(以前稱為Cpf1)是一種類II型V型內切酶,,偏好富含胸腺嘧啶的原間隔短回文重復序列鄰近基序,。Recombinant Human NKG2A&CD94 Protein,hFc,Flag Tag
BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶在分子生物學實驗中都是常用的酶,,但它們之間存在一些關鍵的不同點:1.**來源和熱穩(wěn)定性**:-**TaqDNA聚合酶**來源于嗜熱菌Thermusaquaticus,,具有很好的耐熱性,能夠承受PCR的熱變性步驟,。-**BstDNA聚合酶**來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus),,同樣具有較高的熱穩(wěn)定性,適用于等溫擴增,,如LAMP技術,,無需PCR熱循環(huán)。2.**酶活性**:-**TaqDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和5'-3'外切酶活性,,但沒有3'-5'外切酶活性,。這意味著它在DNA合成過程中可以校正一些錯誤,但保真性相對較低,。-**BstDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和強鏈置換活性,,但缺乏5'-3'外切酶活性。這使得它在等溫擴增中更為有效,,尤其是在需要高保真度和快速擴增的應用中,。3.**應用領域**:-**TaqDNA聚合酶**主要用于PCR技術,適用于各種DNA片段的擴增,,包括復雜模板和長片段的擴增,。-**BstDNA聚合酶**特別適用于等溫擴增技術,如LAMP,,這些技術不需要溫度循環(huán),,適用于快速、低成本的DNA擴增。4.**擴增速度和效率**:-**BstDNA聚合酶**在等溫擴增中顯示出比傳統(tǒng)TaqDNA聚合酶更快的擴增速度和更高的產(chǎn)量,,尤其是在優(yōu)化的LAMP反應中,。