在當(dāng)今生物科技領(lǐng)域,大腸桿菌表達(dá)病毒樣顆粒技術(shù)服務(wù)正以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和廣泛的應(yīng)用前景,成為科研和產(chǎn)業(yè)界的關(guān)注焦點(diǎn),。病毒樣顆粒(VLPs)是一種由病毒蛋白自行組裝而成的納米級(jí)結(jié)構(gòu),其形態(tài)和大小與天然病毒相似,,但不含有病毒的遺傳物質(zhì),,因此不具備性。大腸桿菌作為一種常用的原核表達(dá)系統(tǒng),,在VLPs的生產(chǎn)中具有諸多優(yōu)勢(shì),。首先,大腸桿菌生長(zhǎng)迅速、培養(yǎng)成本低廉,,能夠在短時(shí)間內(nèi)大量繁殖,,為VLPs的高效表達(dá)提供了基礎(chǔ)。其次,,其遺傳背景清晰,,基因操作技術(shù)成熟,便于進(jìn)行基因工程改造,,使我們能夠精確地控制VLPs的組裝和表達(dá),。Pfu Master Mix (2x)(With Dye)在自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)中的優(yōu)勢(shì) 預(yù)混配方和染料簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟,適合高通量實(shí)驗(yàn),。浙江CHO細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)技術(shù)服務(wù)
DNA Marker I Plus:精細(xì)的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)DNA Marker I Plus 是一種即用型的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn),,廣應(yīng)用于瓊脂糖凝膠電泳中,用于估算DNA片段的大小和進(jìn)行粗略定量,。它由7條線狀雙鏈DNA條帶組成,,覆蓋100 bp至700 bp的范圍,特別適合用于小片段DNA的分析,。產(chǎn)品特點(diǎn)組成:包含100 bp,、200 bp、300 bp,、400 bp,、500 bp、600 bp和700 bp的DNA條帶,,其中400 bp條帶加亮顯示,。即用型設(shè)計(jì):已預(yù)混1×Loading Buffer,使用時(shí)無需額外添加,,直接上樣,。清晰的條帶:電泳圖像清晰,背景干凈,,條帶亮度均勻,。穩(wěn)定性高:在室溫下可穩(wěn)定保存三個(gè)月,長(zhǎng)期保存建議置于-20℃,。注意事項(xiàng)保存條件:建議低溫保存,,避免反復(fù)凍融,以防止核酸酶污染導(dǎo)致條帶降解,。避免加熱:使用前無需加熱,,直接上樣。電泳緩沖液:及時(shí)更換電泳緩沖液,,使用高質(zhì)量的瓊脂糖,,以獲得比較好分離效果,。染料選擇:如果使用Goldview等染料,由于靈敏度較低,,建議適當(dāng)增加Marker的上樣量,。應(yīng)用場(chǎng)景DNA Marker I Plus 適用于常規(guī)PCR產(chǎn)物、基因組DNA片段等的大小鑒定,,特別適合需要精確測(cè)定DNA片段大小的實(shí)驗(yàn),,如基因編輯驗(yàn)證、小片段插入/缺失分析等,。重組人源膠原蛋白Blood Direct PCR Master Mix (2×) (Without Dye)的推出,,為分子生物學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域帶來了新的變革。
畢赤酵母(Pichiapastoris)表達(dá)服務(wù)在臨床前研究中具有重要應(yīng)用,,主要得益于其多項(xiàng)優(yōu)勢(shì),,包括遺傳操作方便、適合高密度發(fā)酵,、能夠進(jìn)行蛋白的翻譯后修飾等,。以下是畢赤酵母表達(dá)服務(wù)的關(guān)鍵點(diǎn),以及它們?nèi)绾沃С峙R床前研究:1.高效表達(dá)系統(tǒng):畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)能夠有效表達(dá)多種外源蛋白,,如人胰島素前體,,并且可以通過優(yōu)化啟動(dòng)子和碳源來提高產(chǎn)量和簡(jiǎn)化工藝。2.翻譯后修飾:與其他表達(dá)系統(tǒng)相比,,畢赤酵母能夠進(jìn)行類似高等真核生物的信號(hào)肽剪切,、二硫鍵形成、糖基化等過程的翻譯后蛋白加工,,這對(duì)于許多性蛋白尤其重要,。3.高密度發(fā)酵:畢赤酵母適合進(jìn)行高密度發(fā)酵,這有助于提高產(chǎn)量并降低成本,,適合生物制藥業(yè)的應(yīng)用,。4.重組蛋白的分泌表達(dá):畢赤酵母可以分泌表達(dá)重組蛋白,如IL-10/Fc融合蛋白,,這有助于提高蛋白的穩(wěn)定性和活性,。5.透皮功能研究:畢赤酵母表達(dá)的融合蛋白,如TD-1/IL-10/Fc,,可以用于研究透皮給藥的方式,,這對(duì)于藥物的局部具有潛在價(jià)值。6.大規(guī)模蛋白生產(chǎn):畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)可以用于大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白,,如顆粒溶解素,,其表達(dá)量可達(dá)100mg/L。
Thioredoxin-NP-27是一種腸激酶的底物,,用于檢測(cè)腸激酶的活性,。它是由硫氧還蛋白和NP-27融合而成,中間通過腸激酶的酶切位點(diǎn)(DDDDK)連接,。這種底物在經(jīng)過腸激酶酶切后,,可以通過SDS-PAGE電泳觀察到分子量分別為18kDa和27kDa的兩條帶。腸激酶是一種高度專一性識(shí)別Asp-Asp-Asp-Asp-Lys序列的蛋白酶,,它在Lys的C端水解多肽,。腸激酶可以將胰蛋白酶原轉(zhuǎn)變?yōu)橐让福部梢詫в羞@個(gè)識(shí)別序列的融合蛋白切開,。在37℃,,16小時(shí)內(nèi)將0.5mg的反應(yīng)底物Thioredoxin-NP-27切割為NP-27達(dá)95%所需的酶量定義為一個(gè)單位。腸激酶的活性單位定義為在37℃,,16小時(shí)內(nèi)將0.5毫克的Thioredoxin-NP-2795%降解為NP-27所需要的酶量,。這種酶在基因工程產(chǎn)品開發(fā)中具有廣泛的應(yīng)用,特別是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂,。Thioredoxin-NP-27產(chǎn)品的優(yōu)勢(shì)在于它符合GB/T41907-2022標(biāo)準(zhǔn),,適用于腸激酶活性檢測(cè)的底物。產(chǎn)品保存條件為-30~-15℃,,運(yùn)輸條件為≤0℃,,以確保其穩(wěn)定性和活性。使用時(shí),,應(yīng)按照產(chǎn)品說明進(jìn)行操作,,并注意安全防護(hù)措施。在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,,DNA Marker V是一種廣使用的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn),,主要用于瓊脂糖凝膠電泳中分析DNA片段大小。
Tris-硼酸電泳緩沖液(5×TBE, RNase free):RNA電泳的可靠選擇Tris-硼酸電泳緩沖液(5×TBE, RNase free)是一種為RNA電泳設(shè)計(jì)的緩沖液,,廣應(yīng)用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,。其主要成分包括450 mM Tris-硼酸、10 mM EDTA和DEPC處理水,。這種配方經(jīng)過特殊處理,,確保無RNase污染,能夠有效保護(hù)RNA樣品免受降解,。產(chǎn)品特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)無RNase污染:該緩沖液經(jīng)過DEPC處理,,確保無RNase污染,適用于RNA電泳,。高效分離:TBE緩沖液的緩沖能力較弱,,適合分離小于2000 bp的DNA或RN片段。兼容性強(qiáng):適用于多種類型的瓊脂糖凝膠電泳,,兼容常見的核酸染料(如EB或GoldView),。穩(wěn)定性高:5×TBE濃縮液比10×TBE更穩(wěn)定,,不易產(chǎn)生沉淀,適合長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。使用方法稀釋緩沖液:使用時(shí)需用DEPC處理水或其他RNase-free的純水將5×TBE稀釋為0.5×TBE或1×TBE工作液,。制備凝膠:用稀釋后的TBE緩沖液制備瓊脂糖凝膠。電泳操作:將RNA樣品加入凝膠孔中,,使用稀釋后的TBE緩沖液進(jìn)行電泳,。染色與觀察:電泳結(jié)束后,使用RNase-free的核酸染料對(duì)凝膠進(jìn)行染色,,并在紫外透射儀下觀察結(jié)果,。保存與注意事項(xiàng)保存條件:Tris-硼酸電泳緩沖液(5×TBE, RNase free)應(yīng)保存在室溫或4℃條件下,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在高溫或強(qiáng)光下,。Hot-Start Taq Master Mix 以2×濃度的預(yù)混形式提供,,包含了進(jìn)行PCR反應(yīng)所需的所有關(guān)鍵組分如dNTPs MgCl?等。天津重組類人源膠原蛋白技術(shù)服務(wù)
50×TAE液體應(yīng)保存在室溫或4℃條件下,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在高溫或強(qiáng)光下,。浙江CHO細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)技術(shù)服務(wù)
在實(shí)驗(yàn)室中使用Thioredoxin-NP-27腸激酶底物時(shí),應(yīng)遵循以下步驟:1.稀釋底物:首先,,使用反應(yīng)緩沖液(ReactionBuffer)將Thioredoxin-NP-27稀釋至0.1mg/ml,。2.準(zhǔn)備反應(yīng)體系:取數(shù)個(gè)離心管,每個(gè)管中加入40μL稀釋后的Thioredoxin-NP-27溶液,。3.添加腸激酶:然后,,根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),向每個(gè)離心管中加入不同量的腸激酶溶液,,例如0μL,、2μL、3μL等,,以評(píng)估不同酶量對(duì)底物的切割效果,。4.補(bǔ)充反應(yīng)緩沖液:根據(jù)加入的腸激酶溶液量,相應(yīng)減少反應(yīng)緩沖液的量,,以保持總體積不變,。5.進(jìn)行酶切反應(yīng):將離心管置于37℃±0.5℃水浴中,反應(yīng)16小時(shí),。6.終止反應(yīng):反應(yīng)結(jié)束后,,向每個(gè)反應(yīng)管中加入50μL的2×SDS凝膠加樣緩沖液,以終止酶切反應(yīng),。7.電泳分析:取出各反應(yīng)液20μL,,進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳,以觀察酶切效果,。8.計(jì)算腸激酶活性:根據(jù)GB/T41907-2022標(biāo)準(zhǔn),,按照提供的公式計(jì)算腸激酶活性,,單位為腸激酶活性單位每毫克蛋白或固含物(U/mg)。9.保存條件:Thioredoxin-NP-27應(yīng)在-30~-15℃保存,,運(yùn)輸時(shí)溫度應(yīng)≤0℃,。浙江CHO細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)技術(shù)服務(wù)