大規(guī)模生產(chǎn)階段，AAV/LV載體生產(chǎn)流程跟抗體,、疫苗類藥物的生產(chǎn)類似，主要包含上游培養(yǎng),、下游純化及制劑部分,。上游培養(yǎng)分為質粒開發(fā)、細胞擴增,、三質粒共轉染及病毒載體生產(chǎn)等步驟,。下游純化分為細胞裂解釋放AAV病毒顆粒（可以通過去污劑、機械作用,、高滲或凍融操作等）or收獲細胞上清液得到含LV病毒原液,、加入核酸酶以減少宿主細胞核酸污染、澄清是通過離心或過濾等方法去除細胞碎片和雜質等,、超濾濃縮以減少后續(xù)色譜純化體系,、親合及離子交換等純化得到高純度病毒載體。制劑部分主要是超濾更換緩沖液,、過濾除菌及制劑灌裝等,。SAN HQ高鹽核酸酶在鹽濃度400-650mM條件下活性達到峰值,。山西ArcticZymes高鹽核酸酶70921-202

?通過三質粒瞬轉體系生產(chǎn)病毒載體，會引入宿主細胞DNA殘留（HCD）,、蛋白殘留（HCP）,、工藝雜質（如antibiotics、核酸酶等外源物質）等污染,，存在潛在的致瘤性和免疫原性等風險,。藥品監(jiān)管機構一般允許生物制品中存在10ng/dose以下的殘留DNA。此外,，根據(jù)雜質來源,、工藝以及產(chǎn)品類型不同，也會對HCD限度做不同要求,。為了達到這個要求,，一般通過核酸酶處理和色譜聯(lián)用的方法。一般在細胞培養(yǎng)液裂解/收獲,、澄清收獲及超濾濃縮等環(huán)節(jié)加入核酸酶處理,，需要工藝摸索來確認處理方式。甘肅高鹽核酸酶70921-160高鹽濃度下,，宿主DNA與蛋白質能夠更高效解離,，從而更容易被降解。

經(jīng)典的慢病毒載體（LV）的生產(chǎn)工藝如下,，——三質粒系統(tǒng)瞬時轉染HEK293細胞系,，轉染24小時后LV由轉染陽性細胞生產(chǎn)并排出到培養(yǎng)上清液中；收獲上清培養(yǎng)液后,，加入核酸酶去除HCD污染,，通過澄清步驟去除大的細胞碎片等雜質；下游純化步驟分離LV載體,，純化方法包括切向流過濾TFF,、色譜純化及超速離心；純化后的LV病毒顆粒經(jīng)過無菌過濾,，更換到優(yōu)化后的配方中,，灌裝并冷凍保存。每批Car-T生產(chǎn)時取對應量的LV病毒,，切忌反復凍融,，否則LV病毒會失活。

ArcticZymes Technologies成立于20世紀80年代后期,，總部位于挪威北部的特羅姆瑟(Troms?),；立足北極海洋區(qū)，致力于從海洋生物中識別新的冷適應酶，用于分子研究,、體外診斷和藥物領域,。以其產(chǎn)品的獨特性質及超過30年的生產(chǎn)經(jīng)驗積淀，ArcticZymes Technologies得到國際分子診斷及生物藥物領域客戶的肯定及大力支持,，ArcticZymes產(chǎn)品線已用于診斷產(chǎn)品及生物藥物生產(chǎn)中,。2005年，ArcticZymes在Olso證券交易所上市,，并且持續(xù)得到挪威國家基金的支持,。ArcticZymes Technologies的研發(fā)基于北極海洋區(qū)的自然資源。

經(jīng)過多年的經(jīng)驗積累及市場積淀,，倍篤生物已組合多條不同產(chǎn)品線,，分別滿足體外診斷、organoid及干細胞,、細胞基因藥物等領域的需求,。其中，細胞基因藥物領域產(chǎn)品線包含SAN HQ高鹽核酸酶及M-SAN HQ中鹽核酸酶,、泊洛沙姆P 188 Bio,、GMP級MSC/PSC培養(yǎng)基、GMP級膠原酶,、AAV滴度檢測產(chǎn)品,、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產(chǎn)品、AAV中和抗體蛋白酶等,；相關品牌有挪威ArcticZymes Technologies,、德國BASF、德國Sartorius,、德國Nordmark,、瑞典Genovis、中國君研生物等,。SAN HQ提高核酸污染去除效率,，同時提高目標產(chǎn)物產(chǎn)量。江西高鹽條件高鹽核酸酶

SAN HQ GMP是全球shou款市售GMP級別高鹽核酸酶,，于2023年Q4上市。山西ArcticZymes高鹽核酸酶70921-202

在生物工藝中,，核酸酶的主要作用是高效消化宿主細胞DNA（HCD）,，并將其分解成足夠小的片段，以便在下游純化過程中去除,。雖然大多數(shù)核酸酶可以在生理鹽條件下高效地將裸DNA降解成微小片段,，比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸鏈，但實際生產(chǎn)中的核酸污染情況更加復雜,。HCD通常以染色質形式存在,，與細胞裂解碎片,、病毒顆粒等結合在一起，影響核酸酶的識別及剪切,。因此,，HCD去除的關鍵在于——核酸酶如何在復雜的生產(chǎn)體系中識別并剪切HCD。山西ArcticZymes高鹽核酸酶70921-202