染色質(zhì)由組蛋白和DNA組成,，——147個堿基對的DNA纏繞在8個組蛋白（由H2A,、H2B、H3和H4形成的八聚體）周圍,，形成基本的染色質(zhì)單位,，即核小體。核小體像珠串一樣串連在一起,，并被包裝成更高階的染色質(zhì)結(jié)構(gòu),。DNA帶負(fù)電荷，富含堿性氨基酸的組蛋白帶正電荷,，且組蛋白多聚物有很多疏水區(qū)段,。所有這些特點(diǎn)導(dǎo)致宿主DNA殘留（HCD）能吸附很多物質(zhì)，包括宿主蛋白殘留（HCD）,、色譜填料,、目的病毒顆粒等，因此,，HCD的存在增加了工藝流程的復(fù)雜度,，同時也降低了病毒顆粒的穩(wěn)定性。SAN HQ提高核酸污染去除效率,，同時提高目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)量,。安徽ArcticZymes高鹽核酸酶70921-202

在不同的鹽濃度條件下，AAV病毒載體的存在形式不同,。低鹽濃度條件下,，AAV病毒顆粒表面會通過電荷作用等非特異結(jié)合到HCD上，從而產(chǎn)生病毒顆粒團(tuán)聚現(xiàn)象,。隨著溶液鹽濃度上升,，AAV病毒顆粒與HCD的離子相互作用會被破壞，AAV病毒顆粒會逐漸解離,。當(dāng)鹽濃度升到更高范圍（>400mM左右）,，AAV病毒顆粒與HCD的結(jié)合更弱，AAV顆粒更穩(wěn)定,。因此,，在高鹽濃度溶液中，AAV顆粒更加穩(wěn)定,，且有數(shù)據(jù)表明高鹽濃度不會削弱AAV的侵染能力,。所以,，我們推薦提高AAV病毒生產(chǎn)中的鹽濃度。河南上海倍篤生物高鹽核酸酶SAN HQ高鹽核酸酶是一種新型的,、耐高鹽的工程化內(nèi)切酶,；

綜合腺相關(guān)病毒AAV制備的三個工藝階段介紹，可以看出下游處理可以占病毒生產(chǎn)總成本的很大一部分,，而且難度也是非常大,，尤其是純化過程。原因之一是由于有超過100種不同血清型的變體AAV衣殼,，不同血清型的AAV蛋白存在差異,。因此，各種血清型的表面特性增加AAV純化難度,。原因之二是：針對工藝和產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì)（包括宿主細(xì)胞物質(zhì),，DNA和空衣殼），缺乏一個有效和可重復(fù)的平臺方法,，尤其是來從空衣殼中分離出完整的衣殼,。為了解決以上問題，國內(nèi)外大的藥企公司都致力于純化新產(chǎn)品的開發(fā),，以期達(dá)到：（1）實(shí)現(xiàn)病毒顆粒的分離（2）減少產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（3）保持效力和產(chǎn)量的目標(biāo),。

Mayer等（2023）以measles virus(麻疹病毒，MV)為例,，評估了四種不同核酸酶（BenzonaseTM,、DeneraseTM、M-SAN HQ中鹽核酸酶及SAN HQ高鹽核酸酶）對于染色質(zhì)DNA去除的效果,。Vero細(xì)胞通過微載體貼壁培養(yǎng)來生產(chǎn)麻疹病毒MV,，72hr后收獲上清液，使用3μm cellulose filter(Sartorius)過濾后分裝多份,，置于-80℃保存便于后續(xù)使用,。在解凍后的上清中調(diào)節(jié)對應(yīng)鹽濃度，并加入50 U/ml核酸酶,，37℃孵育2hr進(jìn)行消化,，消化后留樣；將消化后上清液過Capto Core 700 (Cytiva)柱子,，收集流穿液，之后洗雜,、洗脫,，并分別留樣。通過SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn),，相比Benzonase等傳統(tǒng)核酸酶,，在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶更高效將染色質(zhì)DNA剪切成更小片段,，甚至將核小體DNA剪切更徹底。ArcticZymes于2005年在Olso證券交易所上市,，精于規(guī)?；a(chǎn)獨(dú)特特性的酶產(chǎn)品。

ArcticZymes廠家對鹽活性核酸酶系列產(chǎn)品（Salt Active Nucleases,，SANs）的生產(chǎn)及質(zhì)控,，包括SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶，在符合ISO13485:2016體系基礎(chǔ)上,，增加了cGMP質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),，如microbes、endotoxin,、蛋白酶等,；同時提供TSE/BSE聲明、無動物源（Animal-Origin Free）聲明,、非轉(zhuǎn)基因聲明等文件協(xié)助藥物申報,。此外，ArcticZymes的生產(chǎn)場地接受客戶的定期審計,，其第三方審計文件已得到國際TOP CDMO及Biotech的認(rèn)可,，并已經(jīng)成為國際TOP CDMO的供應(yīng)商。具體文件體系可以跟廠家或?qū)?yīng)銷售人員聯(lián)系,。一個美國客戶對SAN HQ高鹽核酸酶純化病毒載體的效率進(jìn)行了評估,。浙江500mM鹽濃度條件高鹽核酸酶70921-160

US FDA指南要求：重組生物制品終產(chǎn)品中，核酸雜質(zhì)含量低于10ng/dose,。安徽ArcticZymes高鹽核酸酶70921-202

宿主細(xì)胞DNA殘留的擔(dān)憂是基于致ai風(fēng)險理論,，特別是生產(chǎn)細(xì)胞系所包含的致ai序列，比如較常見腺病毒基因E1A和E1B（HEK293, PerC.6 和CAP 細(xì)胞系）,，人乳tou瘤病毒E6和E7基因（HeLa細(xì)胞系)等,。當(dāng)使用致ai細(xì)胞系生產(chǎn)AAV時，下游純化須盡可能減少殘留DNA,。工業(yè)上一般使用核酸酶分解殘留DNA，普遍認(rèn)為小于200 bp的DNA片段可有效降低致ai風(fēng)險,。宿主細(xì)胞蛋白殘留與免疫原性,、炎癥或過敏性休克有關(guān)。盡管與非人類的生產(chǎn)原料相比（非人類細(xì)胞系如BHK21或昆蟲細(xì)胞,，以及輔助病毒如HSV,、腺病毒、桿狀病毒），人類細(xì)胞免疫原性比較弱,。安徽ArcticZymes高鹽核酸酶70921-202