慢病毒載體既可以轉(zhuǎn)導分裂細胞也可以轉(zhuǎn)導非分裂細胞,,被認為是安全的,,并且可以提供長期的轉(zhuǎn)基因表達,,是目前較通用的基因轉(zhuǎn)移方法之一,。因慢病毒載體能有效地轉(zhuǎn)導靶細胞,,如造血干細胞和T細胞,,在細胞和基因藥物中的應用越來越guang泛,。源自人類胚胎腎細胞的HEK293細胞系是成熟的生產(chǎn)LV的系統(tǒng),,因為它們非常適合懸浮培養(yǎng)并且易于轉(zhuǎn)染,。在無血清培養(yǎng)基中的懸浮培養(yǎng)在大規(guī)模生產(chǎn)中具有優(yōu)勢,,因為它消除了批次之間的差異并降低了不定因子污染的風險。在150mM NaCl條件下,,M-SAN HQ中鹽核酸酶的酶切活性達到常規(guī)核酸酶的5倍左右,。山東培養(yǎng)基條件中鹽核酸酶70950-150
ArcticZymes廠家對鹽活性核酸酶系列產(chǎn)品(Salt Active Nucleases,,SANs)的生產(chǎn)及質(zhì)控,包括SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶,,在符合ISO13485:2016體系基礎上,,增加了cGMP質(zhì)控標準,如microbes,、endotoxin,、蛋白酶等;同時提供TSE/BSE聲明,、無動物源(Animal-Origin Free)聲明,、非轉(zhuǎn)基因聲明等文件協(xié)助藥物申報。此外,,ArcticZymes的生產(chǎn)場地接受客戶的定期審計,,其第三方審計文件已得到國際TOP CDMO及Biotech的認可,并已經(jīng)成為國際TOP CDMO的供應商,。具體文件體系可以跟廠家或?qū)N售人員聯(lián)系,。黑龍江等滲條件中鹽核酸酶70950-202M-SAN HQ中鹽核酸酶的檢測標準,都符合USP-EP要求,。
核酸酶活性受到很多因素影響,,如鹽濃度、pH,、底物,、溫度等。因此,,不同客戶,、不同項目中核酸酶的使用條件都不一。目前,,生物制藥行業(yè)對Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉,,如生理鹽或低鹽濃度,、脫鹽操作等,。對于大部分使用Benzonase的項目,使用M-SAN HQ中鹽核酸酶可以完全替代,,而且溫度,、Mg2+濃度等條件不用做任何調(diào)整,同樣酶量的M-SAN HQ對宿主細胞DNA(HCD)的去除效果更好,、病毒載體得率更高,。經(jīng)過工藝優(yōu)化后,可以將M-SAN HQ中鹽核酸酶的用量減少到原來的1/3-1/2,,且HCD去除效果及產(chǎn)品得率更高,。
在傳統(tǒng)生物技術行業(yè)(如抗體,、疫苗領域)使用的下游純化工藝步驟,已經(jīng)用于慢病毒的大規(guī)模下游處理,。主要是基于膜(過濾/澄清,,利用切向流過濾TFF進行濃縮/滲濾,基于膜的色譜)和色譜(離子交換色譜IEC,,親和色譜AC,,體積排阻色譜SEC)的技術。這些不同的過程步驟的組合是可變的,,在某些情況下,,不同的純化方法可以用于相同的目的。此外,,采用benzonase/M-SAN HQ中鹽核酸酶降解污染的DNA或者用于下游的一個步驟,,或者用于病毒生產(chǎn)階段。M-SAN HQ中鹽核酸酶在生理鹽濃度下具有較高活性,,較適合鹽濃度為125-250 mM,。
ArcticZymes產(chǎn)品廣泛應用于藥物生產(chǎn)、分子研究,、體外診斷等領域,。例如,在藥物生產(chǎn)領域,,鹽活性核酸酶(SANs)系列產(chǎn)品用于細胞基因藥物及Vaccine的virus載體生產(chǎn)過程,。在分子研究領域,蝦堿酶(SAP),、DNA酶(Dnase),、蛋白酶(AZ Proteinase)、連接酶(R2D Ligase)等用于頭部Life Science品牌的科研kit中,。在體外診斷領域,,等溫擴增酶、UNG酶,、蛋白酶等產(chǎn)品應用于國際TOP診斷公司的生產(chǎn)流程中,。此外,ArcticZymes專注于開發(fā)更好的解決方案,,不斷超越合作伙伴的期待,,從而與合作伙伴建立牢固可靠的關系。M-SAN HQ中鹽核酸酶不含動物源成份,,無蛋白酶活性,;四川培養(yǎng)基條件中鹽核酸酶70950-202
相比于全能核酸酶,在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶將染色質(zhì)DNA剪切成更小片段的效率更高。山東培養(yǎng)基條件中鹽核酸酶70950-150
大多數(shù)研究級別的慢病毒是通過批次濃縮而不是粗制劑之后應用的,,濃縮基本上是通過兩步離心法產(chǎn)生的,。在70000g通過超速離心濃縮后的慢病毒再通過蔗糖緩沖(50000g)純化,然后溶解在配方緩沖液中,。一種改進,,特別是純度方面的改進,基于離心/色譜聯(lián)用的純化方法,。例如,,Kutner等評估了組合純化/濃縮方法。蔗糖緩沖的超速離心結(jié)合陰離子交換層析獲得了88.2%的收率,,而相反的組合則獲得了77.6%的收率,。在兩種方法中,濃縮都超過了100倍,,病毒滴度都超過了1010TU/ml(VSV-g包被的慢病毒),。山東培養(yǎng)基條件中鹽核酸酶70950-150