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河北GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切

來源: 發(fā)布時間:2024-05-01

與IdeS不同,,Genovis的FabULOUS(SpeB)是一種半胱氨酸蛋白酶,,可在來自多個不同物種和亞類的IgG的鉸鏈區(qū)域消化,產(chǎn)生Fab和Fc片段,。人,、小鼠、大鼠,、山羊和綿羊的IgG被FabULOUS消化,,產(chǎn)生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位點是......KTHT...例如,,制備的Fab片段可用于親和力研究,、Fab糖基化研究和結(jié)構(gòu)研究。對來自多個物種和亞類的IgG有活性–上鉸鏈區(qū)域的消化物;快速-在一小時內(nèi)生成Fab和Fc片段,;有效消化小鼠IgG1,。FabULOUS來源于化膿性鏈球菌,在大腸桿菌中表達(dá),。FabULOUS的分子量為29kDa,,該酶含有His標(biāo)簽。Genovis的IgASAP 是 IgA 消化酶家族,。河北GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切

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Genovis提供色譜柱形式的FabRICATOR(IdeS)酶,,是在鉸鏈下方對IgG進(jìn)行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR(IdeS)是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶,,可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體,,產(chǎn)生均質(zhì)的F(ab')2和Fc片段。酶解后,,可以使用反相HPLC,、質(zhì)譜或其他分析方法分析片段??贵w消化和亞基生成的自動化使生物反應(yīng)器的在線監(jiān)測應(yīng)用成為可能,,例如,作為2D-LC-MS設(shè)置的一部分,,將反應(yīng)器直接耦合到MS,。這種自動化的抗體亞基分析方法減少了操作人員的時間、樣品處理時間并提高了通量,。云南IgGZEROIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶Genovis的GingisREX (RgpB) 是一種精氨酸特異性蛋白酶,。

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對于攜帶突變鉸鏈的 Fc 融合蛋白或抗體來說,F(xiàn)ab 和 Fc 片段的生成可能具有挑戰(zhàn)性,。Genovis的GingisKHAN酶在鉸鏈上方一個可觸及的賴氨酸位點消化人IgG1,在足夠溫和的還原條件下保留鏈內(nèi)和鏈間二硫鍵,,從而產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段,。對于融合蛋白,消化通常在鉸鏈上方獲得,,但融合伴侶的結(jié)構(gòu)和氨基酸序列可能導(dǎo)致其他暴露的消化位點,。如果去除保守的 Fc N-聚糖,F(xiàn)c 中的第二個切割位點也可能被GingisKHAN酶切,。將精選的單克隆人 IgG1 抗體和 Fc 融合蛋白與 GingisKHAN 在 37°C 下孵育 1 小時,,并通過 HPLC 進(jìn)行分析。

不同于IdeS,,Genovis的FabDELLO 是一種蛋白酶,,可在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1,在兩小時內(nèi)產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段,,無需還原條件,。該酶對具有突變鉸鏈區(qū)域的抗體(如 LALA 突變)具有活性,,并啟用中級 LC-MS 來表征具有突變鉸鏈的抗體的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。FabDELLO 在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1 (...KSCDK / THTCPPCP...),,生成完整的 Fab 和 Fc 片段,。FabDELLO 是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單個消化位點是人 IgG1 的三維結(jié)構(gòu)的結(jié)果,,使這種賴氨酸暴露于酶中,。如果去除N-聚糖,則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現(xiàn)額外的消化位點,。FabDELLO在天然條件下具有活性,,需要鈣離子的存在。在37°C和pH 7-8.5下獲得良好活性,。FabDELLO 是從 Bdellovibrio 細(xì)菌克隆而來的,,并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽,,分子量為 32 kDa,。在鉸鏈正上方的一個特定位點消化人 IgG1,產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段,。

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在抗體藥物及核酸藥物領(lǐng)域,,倍篤生物產(chǎn)品線涵蓋藥物研發(fā)的全流程,主要用——RNA轉(zhuǎn)染試劑,、生物活性物質(zhì)純化分離用填料產(chǎn)品,、ADC的payload抗體(如anti-DXD、anti-Eribulin,、anti-MMAE等),、動物造模用陽性及陰性抗體、泊洛沙姆P 188 Bio,、工藝雜質(zhì)及外源污染物殘留檢測產(chǎn)品,、抗體結(jié)構(gòu)域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等,,品牌有瑞典Genovis,、德國BASF、美國QED,、中國君研生物,、中國金傳生物、中國毫厘科技,、中國再帆生物等,。這些國產(chǎn)品牌都具有國內(nèi)自研、自產(chǎn)能力,批次生產(chǎn)穩(wěn)定可靠,、品質(zhì)可控,,為行業(yè)發(fā)展提供更多國產(chǎn)選擇??稍阢q鏈上方的一個特定位點消化人 IgA1,,產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。江西FabRICATORIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

FabRICATOR(IdeS蛋白酶)的一大優(yōu)勢是速度,!河北GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切

為了讓所有實驗室都能同時快速自動消化多種抗體,,Genovis的FabRICATORMagIC的設(shè)計具有靈活性,適用于一系列自動化平臺,。我們在ThermoScientific?KingFisher?純化系統(tǒng)上優(yōu)化了FabRICATORMagIC的工作流程,,但它可以轉(zhuǎn)移到其他自動化平臺,如果沒有自動化,,在振動臺上也能同樣出色地工作,。消解后,將含有處理樣品的深孔板直接轉(zhuǎn)移到LC-MS的自動進(jìn)樣器中進(jìn)行快速色譜分析,,或轉(zhuǎn)移到其他分析方法進(jìn)行分析,。FabRICATORMagIC與在消解緩沖液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容,以極大限度地減少自動化系統(tǒng)中可能發(fā)生的純粹壓力,。使用KingFisher儀器處理樣品時,,樣品制備非常簡單。將樣品,、樹脂和緩沖液移液到指定的孔或板中,,然后將板放入儀器中。設(shè)計用于FabRICATORMagIC的BindIt?協(xié)議將控制每個步驟的孵育溫度和時間,。河北GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切