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因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象，并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān),。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的,，...

并上下振蕩數(shù)次混勻。備注：為了盡量減少污染,，未使用完的細(xì)胞凍存液**好凍回-20℃,，反復(fù)凍融不影響使用效果。2.用細(xì)胞消化液將生長(zhǎng)良好的細(xì)胞消化成單細(xì)胞,，并用細(xì)胞計(jì)數(shù)器或血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度,。備注：懸浮細(xì)胞不需要消化但仍需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，不易消化成單細(xì)胞...

正確凍存細(xì)胞并從液氮中復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)中**重要的的技術(shù)方法之一,。防止細(xì)胞內(nèi)形成冰晶并**大程度降低細(xì)胞壓力,，是凍存過(guò)程保持細(xì)胞活力的關(guān)鍵。我們可提供各種各樣的無(wú)菌過(guò)濾,、經(jīng)應(yīng)用測(cè)試的冷凍保護(hù)劑,，如DMSO和含/不含DMSO的即用型細(xì)胞凍存培養(yǎng)基，可**大...

所以非程序降溫凍存方法便應(yīng)運(yùn)而生,，它能極大簡(jiǎn)化凍存流程,，細(xì)胞可直接置于-80°C冰箱完成凍存過(guò)程，更為簡(jiǎn)便高效,。03細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的比較好時(shí)間細(xì)胞在體外生長(zhǎng)期間,，通常分為三個(gè)階段：潛伏期,、指數(shù)生長(zhǎng)期和平臺(tái)期。潛伏期通常是細(xì)胞剛剛傳代,，此時(shí)細(xì)胞開(kāi)始貼附基...

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種...

注意事項(xiàng)1）本品（fireflyluciferin）和甲蟲(chóng)熒光素（beetleluciferin）,、螢光素鉀鹽只是不同別名，以CAS號(hào)115144-35-9為準(zhǔn),。2）注射方式,、動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，確定...

不同細(xì)胞系請(qǐng)參照附表,。細(xì)胞系凍存密度備注正常人成纖維細(xì)胞1-3x106cells/mL雜交瘤細(xì)胞1-3x106cells/mL某些hybridoma會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24小時(shí)后死去。貼壁腫瘤細(xì)胞5-7x106cells/mLHela除外,1～3×...

并實(shí)現(xiàn)了在非常高通量的應(yīng)用中使用報(bào)告基因檢測(cè),。[1]隨著UltraGlo?螢光素酶的發(fā)展,，現(xiàn)在已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了“加樣-讀數(shù)”的ATP檢測(cè)方法。ATP是細(xì)胞健康的重要指標(biāo),，這使得CellTiter-Glo?能有效測(cè)定細(xì)胞活力,，尤其是在高通量應(yīng)用中。該檢測(cè)原理還...

去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗1-2次,；去掉培養(yǎng)瓶里的殘余血清；3,、加入適量胰酶（濃度一般為）,，使胰酶覆蓋整個(gè)瓶，放入培養(yǎng)箱消化,；4,、細(xì)胞消化（具體時(shí)間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷），顯微鏡下觀察細(xì)胞,，細(xì)胞胞質(zhì)回縮,，細(xì)胞間不再連接成片，此時(shí)加入完全培養(yǎng)基終止消化,；5,、...

**常用的凍存液通常為胎牛血清中添加10％二甲基亞砜(DMSO)，二甲基亞砜(DMSO),，可以減少冰晶的形成,，減輕自由基對(duì)細(xì)胞損害,，改變生物膜對(duì)電解質(zhì)、藥物,、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性,，可以很好地在細(xì)胞凍存過(guò)程中保護(hù)細(xì)胞。但近年來(lái),，隨著人們對(duì)安全無(wú)毒的追求...

按照150mg/kg的熒光素/體重濃度進(jìn)行注射,，以小鼠為例，每只小鼠體重假定20g,，每只小鼠用量3mg,；4）注射入體內(nèi)10-15min（待光信號(hào)達(dá)到更強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期）后進(jìn)行成像分析。注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,，從而確定更高信號(hào)檢測(cè)...

酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇,；比較大吸收波長(zhǎng)（水）,。中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉；熒光橙紅鈉,；熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級(jí)：BS物性數(shù)據(jù)編輯播報(bào)1.性狀：未確定2.密度（g/cm3,25/4℃）：.相對(duì)蒸...

常須將培養(yǎng)物進(jìn)行冷凍保存,，并在需要的時(shí)候重新復(fù)蘇和培養(yǎng)。目前,，細(xì)胞凍存**常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,，主要采用加適量保護(hù)局的緩慢冷凍法保存細(xì)胞。無(wú)血清非程序細(xì)胞凍存液,，添加了細(xì)胞沉降穩(wěn)定劑可防止或延緩細(xì)胞在凍存過(guò)程中的沉降,，防止細(xì)胞互相擠壓，影響細(xì)胞凍...

可運(yùn)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析其相對(duì)活性,。c.驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用,，將該序列（通常為啟動(dòng)子區(qū)域）插入報(bào)告基因載體，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞***轉(zhuǎn)過(guò)表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子,，可分析轉(zhuǎn)錄因子過(guò)表達(dá)是否提高熒光素酶活性,。d.可以分析信號(hào)通路是否***，將該信號(hào)通路的...

而發(fā)出不同顏色的熒光,。螢火蟲(chóng)有2000多種,，而叩甲總科（包括螢火蟲(chóng)、叩頭蟲(chóng)和相關(guān)昆蟲(chóng)）則有更多,，因此它們的熒光素酶對(duì)于分子系統(tǒng)學(xué)研究很有用,。目前研究得更透徹的熒光素酶是來(lái)自Photinini族螢火蟲(chóng)中的北美螢火蟲(chóng)（Photinuspyralis）。熒光...

因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會(huì)產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,，并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān),。結(jié)構(gòu)與性能熒光素在氧氣,、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin),，并產(chǎn)生長(zhǎng)發(fā)生光現(xiàn)象,。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的，...

我們將與LgBiT具有極強(qiáng)親和作用的,。HiBiT作為一種易于檢測(cè)且具有高靈敏度的蛋白質(zhì)標(biāo)簽,，具有多種功能，例如當(dāng)與基于CRIPSR的標(biāo)簽一起使用時(shí),，可以創(chuàng)建內(nèi)源性報(bào)告基因模型,。[1]2020Lumit?技術(shù)隨著NanoBiT?技術(shù)的發(fā)展，人們認(rèn)識(shí)到可以...

作者：普拉特澤生物鏈接：zhuanlan./p/來(lái)源：知乎著作權(quán)歸作者所有,。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán),，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處,。首先我們?cè)趦龃娴倪^(guò)程中要減少冰晶的形成,，尤其是大冰晶的形成：緩慢凍存細(xì)胞，可使細(xì)胞內(nèi)避免產(chǎn)生大的冰晶,。那么我們?cè)撛鯓觾龃婕?xì)胞呢...

酸化后消失,，中和或堿化后又出現(xiàn)，微溶于乙醇,；比較大吸收波長(zhǎng)（水）,。中文名稱：熒光素鈉中文別名：熒光黃鈉；熒光橙紅鈉,；熒光素二鈉英文名FLUORESCEINSODIUM等級(jí)：BS物性數(shù)據(jù)編輯播報(bào)1.性狀：未確定2.密度（g/cm3,25/4℃）：.相對(duì)蒸...

**常用的凍存液通常為胎牛血清中添加10％二甲基亞砜(DMSO),，二甲基亞砜(DMSO)，可以減少冰晶的形成,，減輕自由基對(duì)細(xì)胞損害,，改變生物膜對(duì)電解質(zhì)、藥物,、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性,，可以很好地在細(xì)胞凍存過(guò)程中保護(hù)細(xì)胞。但近年來(lái),，隨著人們對(duì)安全無(wú)毒的追求...

去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗。3.去除PBS,，加入適量胰蛋白酶(覆蓋培養(yǎng)皿表面)把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái);4.離心1000rpm,，5min;5.去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,，計(jì)數(shù),，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的**終密度為5×1...

可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式進(jìn)行半衰期為一小時(shí)的“輝光型”信號(hào)在大量檢測(cè)板之間提供一致的信號(hào)與標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基兼容海腎熒光素酶海腎螢光素酶是一種從海桑（Renillareniformis）分離的36kDa蛋白。與螢火蟲(chóng)熒光素酶相比,，海腎...

請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。8）本產(chǎn)品只作科研用途！D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物,，存在于多種發(fā)光生物體中,。在ATP和熒光素酶的催化作用下，D-熒光素鉀被氧化,，產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm),，當(dāng)?shù)孜镞^(guò)量時(shí)，產(chǎn)生的Chemicalbook光量子數(shù)與...

可運(yùn)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析其相對(duì)活性,。c.驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用,，將該序列（通常為啟動(dòng)子區(qū)域）插入報(bào)告基因載體，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞***轉(zhuǎn)過(guò)表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子,，可分析轉(zhuǎn)錄因子過(guò)表達(dá)是否提高熒光素酶活性,。d.可以分析信號(hào)通路是否***，將該信號(hào)通路的...

2-乙磺酸)PIPES磷酸烯醇**酸三(環(huán)已胺)鹽PEP病毒保存液肝素鋰乙二胺四乙酸二鉀/EDTA二鉀血清分離膠/血液分離膠肝素抗凝劑乙二胺四乙酸三鉀/EDTA三鉀血液促凝劑高效促凝粉高效硅化劑水溶性硅化劑草酸鉀鈣離子螫合抗凝劑弱效抗凝劑吖啶酯己二酰阱...

室溫培育30min后加入細(xì)胞孔板中,，置于培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng),。2)單克隆細(xì)胞篩選轉(zhuǎn)染24h后胰酶消化細(xì)胞并按1∶6比例接種到新6孔板中，同時(shí)加入實(shí)驗(yàn)確定的濃度G418,，隨后每2d更換一次培養(yǎng)基并維持G418篩選直至單細(xì)胞抗性克隆的出現(xiàn),。分別挑選單一抗性克隆至...

Mag-Bind?PlantRNAKit（12*96）22116磁珠組織RNA提取試劑盒：用磁珠純化方式從各種組織樣品中提取RNAM6938-00Mag-Bind?TissueRNAKit（5）198M6938-01Mag-Bind?TissueRNA...

脊椎動(dòng)物mRNA的半衰期差異極大，平均約為3小時(shí),。[2]4.長(zhǎng)度差異大哺乳動(dòng)物mRNA長(zhǎng)度為5×102~1×105nt原核生物與真核生物的mRNA雖然在結(jié)構(gòu)上有差異,，但功能一樣，都是指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的模板,。[2]轉(zhuǎn)移RNA轉(zhuǎn)移RNA（tRNA）在蛋白...

[4],。此外，部分RNA5′端或3′端有特殊的核苷酸序列,，而且RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)中沒(méi)有DNA那樣復(fù)雜的順序組織,。[4]3.絕大多數(shù)RNA為單鏈分子，單鏈可自身折迭形成發(fā)夾（hairpin）樣結(jié)構(gòu)而有局部雙螺旋結(jié)構(gòu)的特征,，這是各種RAN空間結(jié)構(gòu)的共同特征...

用移液器反復(fù)吹打,。【注】：加入TotalRNAExtractionReagent前應(yīng)避免洗滌細(xì)胞,，否則會(huì)增加mRNA降解的可能性,。裂解某些酵母和細(xì)菌可能需要使用勻漿器。C.動(dòng)、植物組織取-70℃凍存動(dòng)物組織在液氮中充分研磨,，按照表1加入適當(dāng)量Total...