DNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟：1.提前現(xiàn)在細(xì)胞鋪板提前現(xiàn)在將細(xì)胞種植在24孔板中,，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度在60％左右為宜,。2.轉(zhuǎn)染過程⑴將0.8μg的DNA用25μl無血清稀釋液稀釋，充分混勻,，制成DNA稀釋液,。注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM或1640,。⑵將2μlEntransterTM-H4000用25μl無血清稀釋液體稀釋,，充分混勻,，制成EntransterTM-H4000稀釋液。室溫靜置5分鐘,。⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中,，充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上），室溫靜置15分鐘,。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成,。⑷將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到含細(xì)胞和完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器上，輕柔混勻,。注意：①對本試劑,，采用含血清的全培養(yǎng)基有助于提升轉(zhuǎn)染效率。②完全培養(yǎng)基可加物品,。細(xì)胞密度以及轉(zhuǎn)染的時(shí)間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要因素,。金華細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下的幾個(gè)大坑：1.不注意細(xì)節(jié)在轉(zhuǎn)染之前更換一次37℃預(yù)溫的培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)染效率,。脂質(zhì)體和DNA/RNA混合物應(yīng)當(dāng)一滴一滴地滴下來,，從培養(yǎng)皿一邊滴到另一邊，邊滴邊輕搖培養(yǎng)皿,，以確保均勻分布和避免局部高濃度,。這些都是一些細(xì)枝末節(jié)，但是,，如果不注意的話,，也會造成轉(zhuǎn)染效率低下。2.細(xì)胞狀態(tài)不好細(xì)胞狀態(tài)不好,，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低下,。一般進(jìn)行轉(zhuǎn)染的細(xì)胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。如果是貼壁細(xì)胞的話,，貼壁率應(yīng)該在70-80%,；如果是懸浮細(xì)胞的話，應(yīng)該是6X105個(gè)/孔（24孔板）,，一般是轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在換液,，轉(zhuǎn)染前用無血清培養(yǎng)基或PBS洗細(xì)胞一次。轉(zhuǎn)染的整個(gè)過程都不應(yīng)該有物品,。長沙正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家便宜瞬時(shí)和穩(wěn)定表達(dá)DNA轉(zhuǎn)染后,，轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)可以在1－4天內(nèi)檢測到。

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：細(xì)胞鋪板密度用于轉(zhuǎn)染的較佳細(xì)胞密度根據(jù)不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異,。一般轉(zhuǎn)染時(shí),，貼壁細(xì)胞密度為70%-90%，懸浮細(xì)胞密度為2×106-4×106細(xì)胞/ml時(shí)效果較好。確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長滿或處于靜止期,。因?yàn)檗D(zhuǎn)染效率對細(xì)胞密度很敏感,，所以在不同實(shí)驗(yàn)間保持一個(gè)基本的傳代步驟很重要。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量,。在三種不同密度進(jìn)行細(xì)胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的,，CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應(yīng)增加了,。這些結(jié)果說明，對于轉(zhuǎn)染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質(zhì)體試劑的量會因細(xì)胞密度而異

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：血清A,、DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時(shí)不能含血清,，因?yàn)檠鍟绊憦?fù)合物的形成。B,、一般細(xì)胞對無血清培養(yǎng)可以耐受幾個(gè)小時(shí)沒問題,，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認(rèn)為會降低轉(zhuǎn)染效率,，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進(jìn)行優(yōu)化,。C、對于對血清缺乏比較敏感的細(xì)胞,，可以使用營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基,，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞,，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑,。有條件的話，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細(xì)胞兩遍,，注意洗的時(shí)候要輕,，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細(xì)胞而是轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)板讓液體滾動(dòng)在細(xì)胞表面,。如果洗的太厲害,，細(xì)胞又損失一部分，加了脂質(zhì)體后,，細(xì)胞受影響就更大了,，死亡細(xì)胞會增多形成DNA脂復(fù)合物，也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附,。

DNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟：1.提前現(xiàn)在細(xì)胞鋪板提前現(xiàn)在將細(xì)胞種植在24孔板中,，以轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度在60％左右為宜。2.轉(zhuǎn)染過程⑴將0.8μg的DNA用25μl無血清稀釋液稀釋,，充分混勻,，制成DNA稀釋液。注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM,、無血清DMEM或1640,。⑵將2μlEntransterTM-H4000用25μl無血清稀釋液體稀釋,，充分混勻，制成EntransterTM-H4000稀釋液,。室溫靜置5分鐘,。⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中，充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上）,，室溫靜置15分鐘,。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成。⑷將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到含細(xì)胞和完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器上,，輕柔混勻,。注意：①對本試劑，采用含血清的全培養(yǎng)基有助于提升轉(zhuǎn)染效率,。轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染是將外源遺傳物質(zhì)導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程,，是細(xì)胞和分子生物學(xué)研究的重要工具。濟(jì)南細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑生產(chǎn)廠家

再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,。金華細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨

細(xì)胞轉(zhuǎn)染為什么不能加血清：不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同的,。較好是在靠前次實(shí)驗(yàn)前做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)，比如：HeLa,，293,，CHO，COS7,，MCF－7,，HepG2等細(xì)胞，是否加血清,，對不同的細(xì)胞是有不同的影響的,，有些細(xì)胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響,。轉(zhuǎn)染后在6小時(shí)左右較好換液且換為有血清的培養(yǎng)基,，其一因?yàn)槠胀ㄞD(zhuǎn)染試劑對細(xì)胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡,。轉(zhuǎn)染時(shí)不加血清是防止血清的干擾作用,，轉(zhuǎn)染后可適時(shí)加入。加入過早會引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢生長,，過晚會引起較多細(xì)胞死亡,。可實(shí)時(shí)觀察1/5細(xì)胞變圓的時(shí)候加入血清,。金華細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑廠家現(xiàn)貨