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鼠尾膠原:1實(shí)驗(yàn)制備:實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料:大鼠尾巴,、剪刀、鑷子,、止血鉗,、彎頭吸管、平皿,、三角燒瓶,、燒杯、量筒,、天平,、生理鹽水,、75%酒精、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶、鉆石筆,、鼠尾膠原,。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:1、制備鼠尾膠原(兩個(gè)同學(xué)一組操作),。2,、切割小玻片。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),。實(shí)驗(yàn)步驟:制備鼠尾膠原:1、取大鼠尾巴洗凈,,75%酒精浸泡5分鐘,;2、手持尾巴,,用止血鉗夾住鼠尾的較高,,折斷尾骨后拉出尾腱;3,、將尾腱剪斷置于平皿中,,生理鹽水浸泡;4,、重復(fù)步驟2,、3,直至尾腱量夠用,;5,、吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克),。利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,。石家莊鼠尾膠原報(bào)價(jià)
鼠尾膠原:鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑。實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料:大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿、三角燒瓶,、燒杯,、量筒,、天平、生理鹽水,、75%酒精,、0.1%醋酸溶液、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶,、鉆石筆、鼠尾膠原,。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:1,、制備鼠尾膠原(兩個(gè)同學(xué)一組操作)。2,、切割小玻片,。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),。制備鼠尾膠原:1,、取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘,;2,、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的,,折斷尾骨后拉出尾腱;3,、將尾腱剪斷置于平皿中,,生理鹽水浸泡;4,、重復(fù)步驟2,、3,直至尾腱量夠用,;5,、吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克),;6,、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中,;7,、按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液,;8,、搖晃,,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期,;9,、離心,4000轉(zhuǎn)/分,,10-15分鐘,;10、吸取上清,,分裝成小瓶,,4℃保存。無錫貴陽鼠尾膠原鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中,。
三維膠原的制備:鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,,pH7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水A.不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻。
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用:鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式,,為人鼻腔黏液纖毛運(yùn)輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞,培養(yǎng)7天時(shí)進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),,應(yīng)用高速攝像技術(shù)測(cè)量纖毛擺動(dòng)頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開,;掃描電鏡下見纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形,,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接;同一細(xì)胞任意兩點(diǎn)纖毛擺動(dòng)頻率是相同的,;同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動(dòng)頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,,為今后研究鼻內(nèi)用藥對(duì)纖毛清理功能的影響提供了良好的方法和途徑。膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,,提高了產(chǎn)率和生物相容性,,降低了成本,適用于生物醫(yī)用材料,。
一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,,采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,,保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,,簡(jiǎn)化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液,并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純,。從提取原料到樣品生成過程中,,進(jìn)行多次真空冷凍干燥,并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3%以下的膠原蛋白微粉,;較后由滅菌,、無菌包裝,成品膠原蛋白粉末的純度在98%以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,,提高了產(chǎn)率和生物相容性,降低了成本,,適用于生物醫(yī)用材料,。在操作過程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,,切勿凍存,,有效期一年。合肥鼠尾膠原服務(wù)電話
按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜,。石家莊鼠尾膠原報(bào)價(jià)
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法:隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展,各種醫(yī)用耗材的更新?lián)Q代也是日新月異,。止血材料是常見的醫(yī)療器械產(chǎn)品,。但是現(xiàn)今市面上的止血材料不光存在著容易引起傷口傳染的缺點(diǎn);同時(shí)還存在著容易與傷口粘附不易去除,,導(dǎo)致傷口潰爛,或者因?yàn)檎掣綄?dǎo)致傳染,;再次就是止血材料多是通過吸收血液及添加凝血酶等外在因素止血,,很少有止血材料是使用能夠自身具有止血性質(zhì)的材料來生產(chǎn)的。現(xiàn)今市面上的可吸收止血材料有氧化纖維素,、α-氰基丙烯酸酯類組織膠,、醫(yī)用止血明膠等,但是都有各自的缺點(diǎn),。如氧化纖維素可引起組織周圍PH值升高,;α-氰基丙烯酸酯類組織膠降解過程中釋放出氰和甲醛等有毒物質(zhì);醫(yī)用止血明膠黏附性較差,,易脫落,,因其吸收血液后膨脹可能壓迫傷口周圍組織等,。石家莊鼠尾膠原報(bào)價(jià)