新常態(tài)下細(xì)胞凍存指南：細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍速融,，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。典型的細(xì)胞凍存液是在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清，或只是在血清中加入10%的DMSO,。目前在有些實(shí)驗(yàn)室中仍然采用這種自制自配的凍存液,，優(yōu)點(diǎn)是成本低，適合自己的細(xì)胞,。反復(fù)吹吸混勻后,，分裝于細(xì)胞凍存管中，每管500ul-1000ul,。溫州無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家

細(xì)胞凍存時(shí)間和操作步驟：1,、首先我們需要凍存培養(yǎng)液，通常細(xì)胞凍存液含10%的DMSO,，或者是甘油,、10-20%的小牛血清；,、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,，并且還需要用PBS進(jìn)行清洗，需要注意在這里要丟棄掉舊的細(xì)胞凍存液,；3.去除PBS,，加入適量的胰蛋白酶，以覆蓋住培養(yǎng)皿表面為宜,，然后把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化掉,；然后離心1000rpm5min時(shí)間；4,、去除胰蛋白酶,，加入凍存培養(yǎng)液，輕輕吹打使細(xì)胞的分布變得均勻，調(diào)節(jié)細(xì)胞較終的密度為5×106/ml-1×107/ml,，需要注意這是較佳的細(xì)胞密度,；5、將細(xì)胞裝入凍存管之中,，每管的含量應(yīng)該保持在1～1.5ml之間,。在凍存管上標(biāo)明細(xì)名稱、時(shí)間,、操作者,；6、較后要說的就是細(xì)胞凍存的時(shí)間了,，對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序來說,，需要進(jìn)行梯度降溫，降溫速率-1～-2℃/min,，一旦溫度達(dá)到-25℃以下時(shí),，那么就可增至-5℃～-10℃/min；等到-100℃的時(shí)候,，可迅速的放入到液氮之中,。也可將凍存管放入-20℃冰箱中兩小時(shí)，然后放入-70℃冰箱中進(jìn)行過夜,，較后取出凍存管并移入到液氮容器內(nèi),。徐州正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液價(jià)格不同的凍存方法替代了不同的凍存體系。

細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：離心問題：目前主要有兩種見解,。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),，第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),，去除DMSO,，去除死細(xì)胞，這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,，但對(duì)一般人來說,，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間，轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,，細(xì)胞就全被扔掉了,，轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會(huì)受壓過大，死亡,。此外在操作過程中容易污染,，所以不推薦,。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜（DMSO）,，DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈,。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,，結(jié)果無(wú)有異常。

無(wú)血清細(xì)胞凍存液：1.逐滴加入5-7mL的預(yù)熱的培養(yǎng)基到15mL的離心管中,，加入的同時(shí)輕輕混勻,。2.室溫（15-25°C）以300xg離心5分鐘。3.吸出培養(yǎng)基,，使細(xì)胞沉淀完好無(wú)損,。使用2mL血清移液管輕輕將細(xì)胞沉淀重懸于1mL的培養(yǎng)基中。小心保持細(xì)胞作為聚集體,。4.將0.5mL的細(xì)胞混合物轉(zhuǎn)移到含有培養(yǎng)基的預(yù)包被的6孔板的培養(yǎng)孔中（例如,，每個(gè)冷凍管可以鋪板兩個(gè)孔）。注意：鋪板多少孔可能需要根據(jù)凍存的細(xì)胞聚集體數(shù)量進(jìn)行調(diào)整,。通常在復(fù)蘇后,，要比在常規(guī)的傳代鋪板更多的細(xì)胞聚集體數(shù)量。將培養(yǎng)板放入37°C培養(yǎng)箱,?？焖偾昂笞笥业膿u晃培養(yǎng)板數(shù)次，將細(xì)胞聚集體分布均勻,。24小時(shí)內(nèi)不要移動(dòng)培養(yǎng)板,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品特色：可直接存放于-80℃冰箱凍存，無(wú)需經(jīng)過費(fèi)時(shí)的程序降溫過程（省時(shí),、省錢）,。

含血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞時(shí)遇到的問題：1.凍存細(xì)胞時(shí)需現(xiàn)配凍存液(如購(gòu)買市面上通用的含血清細(xì)胞凍存液，此步可省略),。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮）,，步驟繁瑣，耗時(shí)耗力,。3.含血清,，細(xì)胞污染(細(xì)菌、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高,。4.血清批次,、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存,，且不能原位（如孔板）凍存,。Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液是不含血清和動(dòng)物源成分，含DMSO,、糖類,、氨基酸等成分的一款通用型細(xì)胞凍存液。Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液的凍存方法是：將細(xì)胞凍存懸液（凍存管或孔板）直接放置-80℃冰箱長(zhǎng)期保存。在緩慢的凍結(jié)條件下,，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞,。太原無(wú)血清細(xì)胞凍存液?jiǎn)蝺r(jià)

無(wú)血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì)：無(wú)血清細(xì)胞凍存液是不含血清和動(dòng)物源成分。溫州無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家

細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)：1.為保持細(xì)胞較大存活率,，一般都采用慢凍存融的方法,。2.凍存物距液氮面越近溫度越低。標(biāo)準(zhǔn)的低凍速度為－1℃~12℃/分鐘,，當(dāng)溫度下降達(dá)－25℃時(shí),，下降速度可增至－5~－10℃/分鐘，到－100℃時(shí)則可迅速凍入液氮中,。因此要適當(dāng)掌握凍存物下降入液氮中的速度,，過快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促冰晶形成,。3.初次凍存者在下降凍存時(shí),，宜先用細(xì)木棒伸入罐中探測(cè)液面位置，然后需用溫度計(jì)與凍存物并行的辦法,，以觀測(cè)下降凍存物的速度,、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關(guān)系，當(dāng)已掌握以上各參數(shù)和凍存技術(shù)熟練后,，光按下降時(shí)間和下降距離便可獲理想凍存效果,。溫州無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家

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