細(xì)胞RNA提取的方法:實驗提取步驟:標(biāo)準(zhǔn)Trizol提取步驟為液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--離心--加入氯丙醇沉淀--離心--酒精洗滌--離心,。將細(xì)胞培養(yǎng)皿置于冰上,,加入Trizol裂解5-10分鐘,用泵頭輕輕吹打后吸取液體放入進(jìn)口EP管中,。加入1/5體積的氯仿,,上下混勻液體,4度靜置10-15分鐘,。(氯仿為有機(jī)溶劑,,有效的使有機(jī)相和無機(jī)相迅速分離。有機(jī)相中主要是酚和蛋白結(jié)合,,從而使得蛋白和RNA脫離,,RNA進(jìn)入水相)。4度離心15分鐘,,一定注意選擇低溫離心,。離心后分成三層,RNA在上清里,,從離心機(jī)輕輕拿出EP管,,以免管內(nèi)物質(zhì)震蕩導(dǎo)致下層沉淀激起。吸取上清的時候一定要動作輕柔,,切忌吸取太多,,一般吸到400-500ul,避免吸到下層沉淀,,將液體置于新的EP管中,。加入等體積異丙醇,4度靜置10min,,然后12000rpm離心10min,。RNA 提取關(guān)鍵點病菌 RNA 在提取后也仍然具有傳染性,。蕪湖RNA提取試劑價格
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時,,操作方便且經(jīng)濟(jì)實用,。對于動物組織、簡單的植物材料,、各種微生物,、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例,。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線。該產(chǎn)品采用了獨特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),,無需苯酚氯仿抽提等步驟,,簡單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,,提取操作光需20分鐘便可完成,。溫州RNA提取試劑廠家供應(yīng)以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,可調(diào)節(jié)基因表達(dá),。
RNA提取試劑的選擇:對于富含多糖多酚的植物類組織提取是個難點,,Takara精心研發(fā)的柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以輕松解決這個問題。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地從各種簡單的植物組織材料(葉片,、莖,、幼苗等)、富含多糖多酚的植物組織材料(果實,、種子等),、菌類提取高純度的TotalRNA,適用范圍普遍,。按照標(biāo)準(zhǔn)流程,,本試劑盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,也可以按照可選步驟提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA,。試劑盒中包含了RNA提取所需的全部試劑,,無需額外購買其它試劑~
Trizol法是一種新型總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),,能迅速破碎細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶,。雖然Trizol里面含有RNA酶壓制劑的,,1ml的Trizol一般較多只能裂解100mg的組織。但是如果組織過量,,Trizol無法完全浸潤組織無法完全裂解組織,,多余組織內(nèi)的RNA酶等物質(zhì)會導(dǎo)致RNA的降解,。這是RNA降解的很重要的原因。同時,,由于RNA容易降解,,在實驗過程中一般都要求口罩的,避免組織的污染,。同時選用的無RNA酶的進(jìn)口泵頭,、EP管以及DEPC水,在提取過程中,,一定要時刻提醒自已RNaseFree-RNaseFree-RNaseFree,實驗就成功一半啦~排除其它核酸分子(DNA)的污染,。
DNA和RNA的鑒別染色:利用吖啶橙的變色特性可鑒別DNA和RNA。吖啶橙作為一種熒光染料已被用于染色固定,,非固定細(xì)胞核酸,,或作溶酶體的一種標(biāo)記。觀察死亡細(xì)胞熒光變色性變化以及區(qū)別分裂細(xì)胞和靜止細(xì)胞群體,。雖然測定DNA和RNA含量時較難獲得好的重復(fù)性結(jié)果,,但該方法已被許多實驗室普遍采用。RNA是核糖核酸,,DNA是脫氧核酸,。區(qū)別:溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,,常用乙醇來沉淀溶液中的DNA和RNA,。DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚來沉淀RNA,。在實際RNA提取中,,有幾個提取原則:保證RNA一級結(jié)構(gòu)的完整性。溫州貴陽RNA提取試劑
好的試劑盒價格比較貴,,在實驗室可以根據(jù)自己的實驗需要來定奪試劑盒的使用,。蕪湖RNA提取試劑價格
石蠟包埋組織RNA快速提取試劑盒(離心柱型):原理簡介:改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,,漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA(RNA)從硅基質(zhì)膜上洗脫,。試劑盒特點:1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,,柱與柱之間吸附量差異極小,,可重復(fù)性好??朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端,。2,、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點,,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。3,、獨有的MRL裂解液配方,,可以有效的消除基因組污染。4,、多次漂洗去蛋白過程,,提取RNA純度更高蕪湖RNA提取試劑價格