細胞轉(zhuǎn)染：(1)轉(zhuǎn)染試劑的準備A.將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,，使用前還需震蕩,，。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞,。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基,。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩,。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘。(4)吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次,。(5)加入混合液，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時,。(6)到時后,，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時,。細胞轉(zhuǎn)染是完成這一過程的必需步驟,。蕪湖細胞高效轉(zhuǎn)染試劑平均價格

影響轉(zhuǎn)染試驗的因素：1.轉(zhuǎn)染試劑跟細胞系不匹配轉(zhuǎn)染試劑跟細胞系也是講究配合默契的，使用同一種試劑,，不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,。但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉(zhuǎn)染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻,，通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉(zhuǎn)染試劑,。當然，較適合的是高效,、低毒,、方便、廉價的轉(zhuǎn)染試劑,。因為有些細胞系是不穩(wěn)定的,，可能隨著培養(yǎng)時間的改變，培養(yǎng)條件的不同,，不同的選擇壓力,，可能引起不同的克隆選擇。因此就算是同一個細胞系,，在不同條件下轉(zhuǎn)染能力的差異可能會很大,。溫州石家莊細胞高效轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染的細胞中，外源基因得以表達但它們并不會整合到細胞的基因組中,。

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術,。分為物理介導方法：電穿孔法、顯微注射和基因,；化學介導方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導的技術,；生物介導方法：有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染,，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉(zhuǎn)染技術。理想細胞轉(zhuǎn)染方法,，應該具有轉(zhuǎn)染效率高,、細胞毒性小等優(yōu)點。細菌介導的轉(zhuǎn)染技術,，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法,，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是細菌轉(zhuǎn)染方法的準備程序復雜,，常常對細胞類型有很強的選擇性,，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉(zhuǎn)染方法,，則各有其特點,。需要指出的一點，無論采用哪種轉(zhuǎn)染技術,，要獲得較優(yōu)的轉(zhuǎn)染結(jié)果,，可能都需要對轉(zhuǎn)染條件進行優(yōu)化。影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多，從細胞類型,、細胞培養(yǎng)條件和細胞生長狀態(tài)到轉(zhuǎn)染方法的操作細節(jié),。

細胞轉(zhuǎn)染那些事兒：1.設置陰性和陽性對照：一般在轉(zhuǎn)染后24-48h,靶基因即在細胞內(nèi)表達?？梢罁?jù)不同的實驗目的,，24-48h后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。2.轉(zhuǎn)染后效率的檢測方法：觀察轉(zhuǎn)染后細胞熒光情況,；qPCR驗證,；WB檢測敲減或過表達蛋白。3. 轉(zhuǎn)染效率低,，可采取以下兩種方法：1 )復轉(zhuǎn)染,，即轉(zhuǎn)染后12-24h再進行轉(zhuǎn)染，前提是該細胞對脂質(zhì)體的耐受性較好,，轉(zhuǎn)染后細胞死亡數(shù)較少,。2 )通過藥篩來殺死未轉(zhuǎn)入成功的細胞，前提是該質(zhì)粒帶有物品抗性的基因,。4. 電轉(zhuǎn)時,，不同的細胞需要的電壓是不一樣的，需要做預實驗,，摸索較佳條件。對于大多數(shù)細胞而言,，較佳電壓位于250-1250v/cm,。電擊后，應該將DNA和細胞混合液在室溫下放置10min,使細胞恢復損傷,。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,。

細胞轉(zhuǎn)染的常用方法：人工脂質(zhì)體法 原理：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物，進而可被細胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染/瞬時性轉(zhuǎn)染,。這種方法幾乎適用于所有細胞,，轉(zhuǎn)染效率高、重復型好,，但轉(zhuǎn)染時需要去除血清,，轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大。實驗步驟：在單獨試管中分別稀釋核酸及轉(zhuǎn)染試劑 → 脂質(zhì)體與核酸的磷酸骨架結(jié)合,，形成復合物 → 脂質(zhì)體上的正電荷有助于復合物與細胞膜結(jié)合 → 復合物通過內(nèi)吞作用進入胞漿 → 分析細胞瞬時基因表達或沉默情況,。瞬時和穩(wěn)定表達DNA轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)入基因的表達可以在1－4天內(nèi)檢測到,。昆明正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑推薦廠家

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,。蕪湖細胞高效轉(zhuǎn)染試劑平均價格

細胞轉(zhuǎn)染簡介：轉(zhuǎn)染 ，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入,，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑,。電穿孔法,、顯微注射和基因?qū)儆谕ㄟ^物理方法將基因?qū)爰毎姆独换瘜W介導方法很多,，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導的技術,；生物介導方法,，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉(zhuǎn)染技術,。理想細胞轉(zhuǎn)染方法,，應該具有轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點,。細菌介導的轉(zhuǎn)染技術,，是目前轉(zhuǎn)染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢,。但是,，細菌轉(zhuǎn)染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性,，在一般實驗室中很難普及,。其它物理和化學介導的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點,。蕪湖細胞高效轉(zhuǎn)染試劑平均價格