膠原蛋白按其應(yīng)用可以分為食品級、一般級,、醫(yī)藥級,。食用膠原一般來源于動物的真皮,、肌腱和骨膠原.其中皮膠原是主要的食用膠原,。食用級膠原通常外觀為白色,,口感柔和,味道清淡,易消化,。膠原的獨(dú)特品質(zhì).使得它在許多食品中用作功能物質(zhì)和營養(yǎng)成分,,具有其它替代材料無可比擬的優(yōu)越性:①膠原大分子的螺旋結(jié)構(gòu)和存在結(jié)晶區(qū).使其具有一定的熱穩(wěn)定性;②膠原天然的緊密的纖維結(jié)構(gòu),,使膠原材料顯示出很強(qiáng)的韌性和強(qiáng)度,,適用于薄膜材料的制備;③大較膠原被用作制造腸衣等可食用包裝材料.其獨(dú)特之處是:在熱處理過程中.隨著水分和油脂的蒸發(fā)和熔化.膠原幾乎與肉食的收縮率一致,。而其他的可食用包裝材料還沒被發(fā)現(xiàn)具有這品質(zhì),。將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,,制備成濃度為0.1%的溶液,。金華廣州鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白提取、分離,、純化方法的建立及鑒定:通過對鼠尾進(jìn)行剝離獲得鼠尾腱,用Tris-HCl緩沖液,、胃蛋白酶處理獲得鼠尾膠原蛋白原液、反復(fù)使用氯化鈉溶液進(jìn)行分級鹽析,、醋酸溶液復(fù)溶進(jìn)行鼠尾膠原蛋白的純化.超純水透析除去無機(jī)鹽類獲得純化的鼠尾膠原蛋白,。通過SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳、氨基酸含量分析等技術(shù)手段鑒定.結(jié)果 本研究建立的方法可以獲得高純度的鼠尾膠原蛋白,純度達(dá)到電泳純.與國外進(jìn)口的商業(yè)化鼠尾膠原蛋白產(chǎn)品相比無差異,。研究了提取,、分離、純化參數(shù)對得率,、純度的影響,建立了較優(yōu)的鼠尾膠原蛋白提取條件,,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解時間:72 h,鹽析濃度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05 mol/L醋酸溶液.結(jié)論 為鼠尾膠原蛋白的擴(kuò)大化生產(chǎn)提供了合適的工藝參數(shù),為大量獲得鼠尾膠原蛋白并進(jìn)行更深層次的功效方面研究提供了理論支持和實(shí)踐基礎(chǔ)。成都鼠尾膠原服務(wù)電話鼠尾膠原醋酸溶解:制備成濃度為0.1%的溶液,。
鼠尾膠原蛋白I型,,用那一種膠原酶可以溶解:1.將膠原加入到0.1M 的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。5.從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥,。如果膠原溶液不是無菌的,這時候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。 在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗,。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):三維膠原的制備 鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上, pH 左右時可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度 1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸 中,,在成膠過程中需要加入 0.06體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。 需要的溶液 (均需要無菌,、 預(yù)冷) 10mg/L 酚紅用于pH 指示) 0.1mol/LNaOH,,0.1mol/L乙酸(一 般不用),雙蒸水 200ul鼠尾膠原蛋白 型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入 690ul H2O 12ul0.1mol/L NaOH 12ul0.1mol/LNaOH 加到膠原溶液中,, 會由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的 膠原凝結(jié)) 立即混勻。再加入 100ul 10PBS 10培養(yǎng)液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后 pH 左右,,如果PBS 或培養(yǎng)液中沒有加 酚紅,初次使用時需要用 pH 試紙測試),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時程記錄,并且制作簡便,,成本低廉,。制備鼠尾膠原(兩個同學(xué)一組操作)。
鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I,、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水、無菌1M NaOH,。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3)在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I。4)在無菌條件下執(zhí)行以下步驟,。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL),。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無菌冰冷1M NaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10× PBS)—V(1M NaOH)4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中,。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,,混勻,冰上備用,。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時,。6)使用時,無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時程記錄,。濟(jì)南正規(guī)鼠尾膠原服務(wù)電話
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鼠尾膠原蛋白的用途是什么:在工業(yè)應(yīng)用方面,,鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的內(nèi)部涂層,。設(shè)備上的膠原蛋白薄層通常被允許干燥。它還可以用來制造一種凝膠,,可當(dāng)作懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)基,。此外,還可以把它當(dāng)膠水使用,。在化妝品行業(yè),,鼠尾膠原蛋白可當(dāng)作沐浴液和肥皂中的凝膠。它還用于生產(chǎn)能減少皺紋和改善皮膚質(zhì)量的面霜或護(hù)膚霜,。不過,,用于撫紋,,或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從?;蜇i提取。不過,,用于撫紋,,或使嘴唇顯得更大更飽滿的注射用膠原蛋白通常是從牛或豬提取,。金華廣州鼠尾膠原