多光子顯微鏡對成像深度的改善利用紅光或紅外光激發(fā),，光散射小（小粒子的散射與波長的四次方的成反比）,。不需要***,，能更多收集來自成像截面的散射光子。***不能區(qū)分由離焦區(qū)域或焦點區(qū)發(fā)射出的散射光子,，多光子在深層成像信噪比好,。單光子激發(fā)所用的紫外或可見光在光束到達焦平面之前易被樣品吸收而衰減，不易對深層激發(fā),。多光子熒光成像的特點,。深度成像∶與共聚焦相比能更好地對厚散射物質(zhì)成像。信噪比∶多光子吸收采用的波長是單光子吸收的2倍以上,，所以顯微試樣中的瑞利散射更小,，熒光測定的信噪比更高。觀察活細胞∶離子測量（i.e.Ca2+）,，GFP,，發(fā)育生物學等—減少了光毒性和光漂白，能對細胞長時間觀察,。多光子成像是一種非線性的過程,，信號產(chǎn)生要求功率密度達到MW/cm2的量級。布魯克多光子顯微鏡單分子成像定位

    在生物成像中,，我司多光子顯微鏡具有清（清晰）,，快（快速），深（深層）,，活這四個方面,。結(jié)合了多光子上轉(zhuǎn)化材料以及時間編碼的結(jié)構(gòu)光超分辨技術(shù)，實現(xiàn)了快速（50MHz的掃描速度）,，超分辨（超衍射極限）成像,。作為一種新的高速，超高分辨率的成像系統(tǒng),，MUTE-SIM可以幫助我們對快速運動的生物圖像進行分辨率高的成像,。盡管關于深度成像的應用我們沒有進一步展示，但是結(jié)合1560nm近紅外光相對于可見光更佳的穿透性,，我們相信該技術(shù)將有利于對生物組織進行高速,，超分辨,，高深度地成像，有助于生物影像學的發(fā)展,。滔博生物TOP-Bright是一家集研發(fā),，生產(chǎn)，銷售于一體的專注于神經(jīng)科學產(chǎn)品及致力于向高校,、科研機構(gòu)等領域提供實驗室一體化方案的高科技企業(yè),。業(yè)務服務范圍已遍布至全國各地幾百家實驗室。目前公司主營產(chǎn)品是享譽全球的國際品牌和產(chǎn)品,這些儀器設備都是科學研究所必備且不可替代的基礎儀器,。 靈長類多光子顯微鏡數(shù)據(jù)采集顯微鏡簡史：從光到多光子顯微鏡,。

多光子激發(fā)掃描顯微成像系統(tǒng)的不足。只能對熒光成像,。如果樣品包括能夠吸收激發(fā)光的色團,，如色素,，樣品可能受到熱損傷,。分辨率略有降低，雖然可以通過同時利用共焦的小孔得到改善,，但是信號會有損耗,。受昂貴的超快激光器限制，多光子掃描顯微鏡的成本較高,。多光子激發(fā)顯微鏡應用舉例,。動物和腦片神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)與功能、動物腦皮層的成像,、胚胎發(fā)育過程的長時間動態(tài)觀測,、多光子激發(fā)光解籠、細胞內(nèi)微區(qū)鈣動力學,、多光子激發(fā)自發(fā)熒光,、其它應用。

針對雙光子熒光顯微鏡的特點,，從理論上分析雙光子成像特點，并搭建一套時間,、空間分辨率高,，能實時、動態(tài),、多參數(shù)測量的雙光子熒光顯微鏡系統(tǒng),。具體系統(tǒng)應實現(xiàn)∶（1）能對不同染料的雙光子熒光進行探測;（2）用特定染料對樣品標記以后，能實現(xiàn)雙光子熒光的三維成像;（3）通過實驗的研究,，改進雙光子熒光顯微成像系統(tǒng);（4）在保證成像質(zhì)量的前提下,，簡化整個系統(tǒng),，使得實驗操作方便、安全,。單光子激發(fā)熒光的過程,，就是熒光分子吸收一個光子，從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài),，躍遷以后，能量較大的激發(fā)態(tài)分子,，通過內(nèi)轉(zhuǎn)換把部分能量轉(zhuǎn)移給周圍的分子,，自己回到比較低電子激發(fā)態(tài)的比較低振動能級。處于比較低電子激發(fā)態(tài)的比較低振動能級像在生物醫(yī)學光學成像研究中顯示了較大的優(yōu)勢,。而在顯微成像中，雙光子熒光顯微鏡憑其獨有的優(yōu)點,，成為研究細胞結(jié)構(gòu)和功能檢測的重要工具。多光子激光掃描顯微鏡是建立在激光掃描顯微鏡技術(shù)基礎上的實驗方法,，三維觀察上提供更的光學切片能力,。

雙光子熒光顯微成像主要有以下優(yōu)點∶a.光損傷小∶雙光子熒光顯微鏡使用可見光或近紅外光作為激發(fā)光,，對細胞和組織的光損傷很小，適合于長時間的研究;b.穿透能力強∶相對于紫外光,，可見光或近紅外光具有很強的穿透性,，可以對生物樣品進行深層次的研究;c．高分辨率∶由于雙光子吸收截面很小P,，只有在焦平面很小的區(qū)域內(nèi)可以激發(fā)出熒光,，雙光子吸收局限于焦點處的體積約為λ范圍內(nèi);d.漂白區(qū)域很小，焦點以外不發(fā)生漂白現(xiàn)象,。e．熒光收集率高,。與共聚焦成像相比，雙光子成像不需要光學濾波器,，提高了熒光收集率,。收集效率提高直接導致圖像對比度提高。f.對探測光路的要求低,。由于激發(fā)光與發(fā)射熒光的波長差值加大以及自發(fā)的三維濾波效果,，多光子顯微鏡對光路收集系統(tǒng)的要求比單光子共焦顯微鏡低得多，光學系統(tǒng)相對簡單。g.適合多標記復合測量,。許多染料熒光探針的多光子激發(fā)光譜要比單光子激發(fā)譜寬闊,，這樣，可以利用單一波長的激發(fā)光同時激發(fā)多種染料,，從而得到同一生命現(xiàn)象中的不同信息,，便于相互對照、補充,。中國市場多光子顯微鏡產(chǎn)量,、消費量、進出口分析及未來趨勢,。布魯克多光子顯微鏡技術(shù)

中國市場多光子顯微鏡進出口貿(mào)易趨勢,。布魯克多光子顯微鏡單分子成像定位

比較兩表格中的相關參數(shù)可以看出，基于分子光學標記的成像技術(shù)已經(jīng)在生物活檢和基因表達規(guī)律方面展示了較大的優(yōu)勢,。例如,，正電子發(fā)射斷層成像（PET）可實現(xiàn)對分子代謝的成像,，空間分辨率∶1-2mm,，時間分辨率;分鐘量級。與PET比較,，光學成像的應用場合更廣（可測量更多的參數(shù),，請參見表1-1），且具有更高的時間分辨率（秒級）,，空間分辨率可達到微米,。因此，二者相比,，雖然光學成像在測量深度方面不及PET,，但在測量參數(shù)種類與時空分辨率方面有一定優(yōu)勢。對于小動物（如小白鼠）研究來說,，光學成像技術(shù)可以實現(xiàn)小動物整體成像和在體基因表達成像,。例如，初步研究表明,，熒光介導層析成像可達到近10cm的測量深度;基于多光子激發(fā)的顯微成像技術(shù)可望實現(xiàn)小鼠體內(nèi)基因表達的實時在體成像,。布魯克多光子顯微鏡單分子成像定位