N摻雜可以明顯影響碳點(diǎn)（CDs）的發(fā)射和激發(fā)特性,，使雙光子碳點(diǎn)（TP-CDs）具有本征雙光子激發(fā)特性和605 nm的紅光發(fā)射特性,。在638 nm激光照射下，除了長波激發(fā)和發(fā)射外，還可以實(shí)現(xiàn)活性氧（ROS）的產(chǎn)生,，這為光動(dòng)力技術(shù)提供了巨大的可能性。更重要的是,，通過各種表征和理論模擬證實(shí),，摻雜誘導(dǎo)的N雜環(huán)在TP-CDs與RNA的親和力中起關(guān)鍵作用。這種親和力不僅為實(shí)現(xiàn)核仁特異性自我靶向提供了可能,，而且通過ROS斷裂RNA鏈解離TP-CDs@RNA復(fù)合物,，賦予治療過程中的熒光變異。TP-CDs結(jié)合了ROS的產(chǎn)生能力,、光動(dòng)力療法（PDT）過程中的熒光變化,、長波激發(fā)和發(fā)射特性以及核仁的特異性自靶向性，可以認(rèn)為是一種結(jié)合核仁動(dòng)態(tài)變化實(shí)時(shí)處理的智能CDs,。優(yōu)勢來源于其雙光子光源的非線性光學(xué)效應(yīng),。國內(nèi)熒光激光雙光子顯微鏡作用

雙光子顯微成像技術(shù)不是什么新技術(shù)，早在20多年前就有了,，目前已經(jīng)在生命科學(xué)和材料科學(xué)中廣泛應(yīng)用,。幾年前雙光子**過期后，已經(jīng)推出自己的雙光子顯微鏡的廠家估計(jì)不少于10家以上,。即便如此,，世界上很多實(shí)驗(yàn)室都搭雙光子，自己搭的好處有很多,，首先是便宜,，尤其是實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)有飛秒激光器，那就更很省錢了,。其次是靈活,，可以選擇針對特殊用途的搭配，改動(dòng)也靈活,。結(jié)束后的好處就是可以鍛煉隊(duì)伍,，一趟走下來可以把新手帶出來，后期維護(hù)也更加自由,。當(dāng)然壞處也不少,，首先是操心，特別是第1次搭的時(shí)候,，開始要想方案,，后來要解決各種實(shí)際問題。其次是花時(shí)間,，加上買配件的時(shí)間,，比買一臺現(xiàn)成的商業(yè)化雙光子耗時(shí)長。現(xiàn)在已經(jīng)有不少關(guān)于如何搭雙光子顯微鏡的文章,，各種protocol,，大多是老外寫的,，中文的較少。其實(shí)完全自己搭一套好用的系統(tǒng)還是不容易的,，尤其是沒有經(jīng)驗(yàn)的時(shí)候,，容易走彎路，多花錢,，也多花時(shí)間,，再加上雙光子的重要器件都需要從國外購買，在國內(nèi)買這些東西耗時(shí)較長,。因此,，我想總結(jié)一下我們的經(jīng)驗(yàn)，貼出來分享,，希望能幫到想自己動(dòng)手的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)口熒光雙光子顯微鏡的成像視野雙光子顯微鏡還可以對一些具有特性的染料細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，還有一些短波長可以利用雙光子特性進(jìn)行特定實(shí)驗(yàn)。

在2020年12月22日,，臨研所,、病理科和科研處邀請北京大學(xué)王愛民副教授做了題目為“新一代微型雙光子顯微成像系統(tǒng)介紹及其在臨床醫(yī)療診斷”的學(xué)術(shù)報(bào)告。學(xué)術(shù)報(bào)告由臨研所醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究平臺潘琳老師主持,。王愛民,，北京大學(xué)信息科學(xué)技術(shù)學(xué)院副教授，畢業(yè)于北京大學(xué)物理系,，獲學(xué)士,、碩士學(xué)位，后于英國巴斯大學(xué)物理系獲博士學(xué)位,。該研究組研發(fā)的微型雙光子顯微鏡,，第1次在國際上獲得了小鼠大腦神經(jīng)元和神經(jīng)突觸清晰穩(wěn)定的動(dòng)態(tài)信號，該成果獲得了2017年度“中國光學(xué)進(jìn)展”和“中國科學(xué)進(jìn)展”,，并被Nature Methods評為2018年度“年度方法--無限制行為動(dòng)物成像”。目前,，該研究組正在研究新一代雙光子顯微成像技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用,，為未來即時(shí)病理、離體組織檢測,、術(shù)中診斷等提供新的影像手段和分析方法,。

激光共聚掃描顯微鏡脫離了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的場光源和局部平面成像模式，采用激光束作光源,，激光束經(jīng)照明,，經(jīng)由分光鏡反射至物鏡，并聚焦于樣品上,，對標(biāo)本焦平面上每一點(diǎn)進(jìn)行掃描,。組織樣品中的熒光物質(zhì)受到刺激后發(fā)出的熒光經(jīng)原來入射光路直接反向回到分光鏡,，通過探測***時(shí)先聚焦，然后被光探頭收集,，轉(zhuǎn)化為信號輸送到計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理,。這個(gè)裝置能讓通過探測***的只有焦平面上發(fā)出的熒光，使成像更為清晰準(zhǔn)確,，同時(shí)通過改變物鏡的焦距,，能對不同焦平面進(jìn)行掃描，通過計(jì)算機(jī)繪出普通顯微鏡無法觀測的三維圖像,。雙光子顯微鏡放大倍數(shù)是多少,？

首先我們來簡單介紹一下激光掃描共聚焦和雙光子這兩種當(dāng)紅的顯微成像技術(shù)。激光掃描共聚焦顯微技術(shù),，是熒光顯微成像的一種,，用于激發(fā)樣品的熒光信號并對其放大成像。在激光掃描共聚焦顯微鏡中,，樣品焦平面上每一時(shí)刻只有一個(gè)點(diǎn)被激發(fā)光照射,，縱然焦平面外也有激發(fā)光照射，但通過探測器前的（pinhole）,，有焦平面上的熒光信號能被探測器接收,。也就是說，每個(gè)時(shí)刻,，只有焦平面上一個(gè)點(diǎn)的信號被探測,。通過點(diǎn)掃描的方式，一個(gè)個(gè)點(diǎn)的信號就可以組合出終的圖像,。雙光子顯微鏡（包括多光子顯微鏡）同樣采用點(diǎn)掃描的方式得到圖像,。不同的是，其采用的激發(fā)光波長較長,，只有當(dāng)兩個(gè)（或更多）激發(fā)光光子幾乎同時(shí)轟擊熒光探針的時(shí)候才可能激發(fā)出熒光信號,。所以只有在光子密度特別大的焦點(diǎn)，出才會激發(fā)出熒光,。也就是說,，雙光子顯微鏡中，同樣每個(gè)時(shí)刻只有焦平面上一個(gè)點(diǎn)的信號被探測,，并且連焦平面外的熒光信號也不會有,。對于顯微成像技術(shù)包含：寬場熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡,、轉(zhuǎn)盤共聚焦顯微鏡,、雙光子顯微鏡。美國ultima2PPLUS雙光子顯微鏡掃描深度

雙光子顯微鏡中，同樣每個(gè)時(shí)刻只有焦平面上一個(gè)點(diǎn)的信號被探測,，并且連焦平面外的熒光信號也不會有,。國內(nèi)熒光激光雙光子顯微鏡作用

雙光子技術(shù)在醫(yī)療診斷應(yīng)用中具有巨大的潛力，該領(lǐng)域還未形成標(biāo)準(zhǔn)和體系,，需要系統(tǒng)的醫(yī)學(xué)研究與龐大的醫(yī)療數(shù)據(jù)加以支撐,，通過研究人體基于多光子成像技術(shù)，進(jìn)行細(xì)胞結(jié)構(gòu),、生化成分,、微環(huán)境、組織形態(tài),、代謝功能的影響信息,，找到與疾病的細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué),、組織病理學(xué),、診斷和特征的關(guān)聯(lián)關(guān)系，共同探究生理病理基礎(chǔ)和分子細(xì)胞生物學(xué)機(jī)制,，篩選鑒定,、皮膚病、自身免疫病及其他疑難疾病的診斷及鑒別診斷依據(jù),，建立全新的多光子細(xì)胞診斷的完整數(shù)據(jù)庫,，定義出針對不同疾病的多光子臨床檢測設(shè)備的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)。討論環(huán)節(jié),，來自病理科,、呼吸中心、心臟科,、神經(jīng)科,、皮膚科及研究所的多位醫(yī)師及研究人員紛紛結(jié)合各自的工作領(lǐng)域與王愛民副教授展開了熱烈的討論，其中毛發(fā)中心楊頂權(quán)主任計(jì)劃再次邀請王愛民副教授進(jìn)行學(xué)術(shù)交流,。通過本次學(xué)術(shù)交流,，病理科與研究所分別與王愛民副教授課題組達(dá)成了初步合作意向。國內(nèi)熒光激光雙光子顯微鏡作用