N-糖苷酶F(PNGaseF)酶活定義(UnitDefinition)1個(gè)酶活力單位指在10μL的反應(yīng)體系中,37℃條件下1小時(shí)從10μg變性RNaseB中除去超過(guò)95%的碳水化合物所需要的酶量,。儲(chǔ)存條件-15~-25℃保存,,有效期1年。使用說(shuō)明變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入1μLBuffer1和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg),,至終體積10μL,;2)100℃溫度下煮沸10min使其變性,,冰上冷卻,離心10秒,;3)加入2μL的Buffer2,、2μL的10%NP-40、6μL去離子水,,總反應(yīng)體積20μL,;4)加入0.2~0.5μL的PNGase,輕輕混勻,。在37℃孵育1-3h,。非變性條件下蛋白質(zhì)去糖基化1)在水中加入2μL的Buffer2和目標(biāo)糖蛋白(1-20μg)至體積為20μL。2)加入0.5~1μL的PNGaseF,輕輕混勻,。3)37°C孵育4-24h,。注意:在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化,在非變性條件下可能需要增加PNGaseF的量和延長(zhǎng)孵育時(shí)間,。OSM與白血病抑制因子(LIF)密切相關(guān),,實(shí)際上,除了其在人類(lèi)中的特定受體外,,它實(shí)際上還使用了LIF受體,。Recombinant Human Midkine
牛凝血酶(Bovine Thrombin),作為一種高特異性的絲氨酸蛋白水解酶,,具有重要的生物學(xué)功能的科研應(yīng)用,。本文綜述了牛凝血酶的分子特性,、生物學(xué)作用及其在醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用,。引言凝血酶是血液凝固過(guò)程中的關(guān)鍵酶,負(fù)責(zé)將纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,,從而促進(jìn)血栓形成,。牛凝血酶因其高比活度(>2000 IU/mg)和高純度,在生物醫(yī)學(xué)研究中用作工具酶,。材料與方法產(chǎn)品來(lái)源與純化:牛凝血酶從牛血漿中提取,,并通過(guò)一系列生物技術(shù)手段進(jìn)行純化?;钚詼y(cè)定:利用特定的底物或熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)底物測(cè)定凝血酶活性,。應(yīng)用研究:通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)模型,研究牛凝血酶在血液學(xué),、分子生物學(xué)和藥物開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用,。結(jié)果分子特性:牛凝血酶由兩條肽鏈組成,分子量約為37 KD,,具有高度的專(zhuān)一性和高效的催化能力,。生物學(xué)作用:牛凝血酶能夠催化纖維蛋白原水解釋放A肽和B肽,,形成纖維蛋白單體,參與血液凝固和傷口愈合,??蒲袘?yīng)用:牛凝血酶在重組蛋白的特異性斷裂、基因工程產(chǎn)品開(kāi)發(fā),、以及作為診斷學(xué)中的凝血化驗(yàn)工具等方面展現(xiàn)出重要價(jià)值,。Recombinant Human TFF3(CDNF)也是一種新型神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,對(duì)多巴胺能神經(jīng)元的強(qiáng)大活性,,與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞系衍生的(GDNF)相當(dāng),。
分子特性:牛凝血酶的分子特性符合高比活度酶的標(biāo)準(zhǔn),純度達(dá)到SDS-PAGE電泳無(wú)雜蛋白條帶的要求,。穩(wěn)定性:牛凝血酶在室溫下運(yùn)輸穩(wěn)定,,在2~8℃條件下可保存3年而酶活力未有變化。應(yīng)用效果:在1:2000的質(zhì)量比下,,牛凝血酶能有效切割蛋白,,適用于科研和工業(yè)生產(chǎn)中的重組融合蛋白特異性斷裂。討論科研應(yīng)用:牛凝血酶因其高比活度和專(zhuān)一性,,在分子生物學(xué),、生物化學(xué)和生物工程制藥研究中作為工具酶具有重要價(jià)值。臨床:作為止血藥物,,牛凝血酶在外科手術(shù)中的應(yīng)用超過(guò)100年,,因其簡(jiǎn)便和高效而受到青睞6。生產(chǎn)優(yōu)勢(shì):牛凝血酶的生產(chǎn)穩(wěn)定性好,,純度高,,不含有其他蛋白酶活性,適合大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用,。
分子結(jié)構(gòu):牛纖維蛋白原由兩個(gè)相似的三聚體亞基組成,,每個(gè)亞基包含Aα、Bβ和γ三個(gè)多肽鏈,,通過(guò)二硫鍵和非共價(jià)鍵連接,。生物學(xué)功能:牛纖維蛋白原在凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)中被凝血酶裂解為纖維蛋白單體,進(jìn)而聚合形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊,,是止血和傷口修復(fù)的關(guān)鍵組分,。醫(yī)學(xué)應(yīng)用:牛纖維蛋白原在心血管疾病、創(chuàng)傷以及藥物開(kāi)發(fā)中展現(xiàn)出潛在的應(yīng)用價(jià)值,。討論分子特性:牛纖維蛋白原的分子結(jié)構(gòu)為理解其在凝血過(guò)程中的功能提供了基礎(chǔ),,同時(shí)為設(shè)計(jì)新型抗凝血藥物提供了可能。疾病研究:牛纖維蛋白原在血栓形成和溶解中的作用,,為研究如深靜脈血栓,、心肌梗死等疾病的分子機(jī)制提供了重要信息,。生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用:牛纖維蛋白原的穩(wěn)定性和可用性使其成為研究血液凝固機(jī)制和開(kāi)發(fā)新型生物材料的理想模型。α-凝血酶在肝臟中作為非活性前體-凝血酶原合成,,在凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)中被啟用,,這種活性酶由285個(gè)氨基酸組成。
CD30,又稱(chēng)KI抗原和Tnfrsf8,是一種120kdaI型跨膜糖蛋白,屬于tnf受體超家族,。成熟的人CD30由一個(gè)361AA細(xì)胞外域(ECD)和六個(gè)富含半胱氨酸的重復(fù),28AA跨膜段和188AA細(xì)胞質(zhì)域,。相比之下,小鼠和大鼠CD30缺乏90AA的ECD,并且只包含三個(gè)富含半胱氨酸的重復(fù)。在ECD的共同區(qū)域內(nèi),人CD30與小鼠CD30和大鼠CD30的序列認(rèn)同率分別為53%和49%,。人類(lèi)CD30的交替剪接產(chǎn)生一個(gè)等形,包括細(xì)胞質(zhì)域的C132AA,。CD30通常在抗原細(xì)胞和B細(xì)胞上表達(dá)。但是,它在霍奇金氏病(紅-斯特恩伯格細(xì)胞上),、其他淋巴瘤,、慢性炎癥中,以及自體免疫。CD30與CD30配體/tnfsf8結(jié)合,TH細(xì)胞,、單核細(xì)胞,、粒細(xì)胞和髓質(zhì)胸腺上皮細(xì)胞上表達(dá)。產(chǎn)品性質(zhì)別名CD30;CD30KI-1;CD30Lreceptor;TNFRSF8;D1S166EKi-1;CD30KI-1工會(huì)編號(hào)P28908-1表達(dá)區(qū)間及表達(dá)系統(tǒng)重組的人CD30/Tnfrsf8蛋白表達(dá)于在C-端有標(biāo)記和AVI標(biāo)記的HK293細(xì)胞,。它含有……,。分子量大約41.3公里。由于糖基化,蛋白質(zhì)遷移到70-100kda基于三聯(lián)頁(yè)面結(jié)果,。純度SDS-PAGE和高效液相色譜法測(cè)定的95%,。Fractalkine,指定為CX3CL1,,與大多數(shù)其他趨化因子不同,,CX3CL1是I型跨膜(TM)粘附蛋白。HPV16 E7(86-93)
成熟的人IL-28A是一種約22-25 kDa蛋白,,與小鼠和大鼠IL-28A共享66%的氨基酸序列身份,,并顯示跨物種活性,。Recombinant Human Midkine
牛纖維蛋白原:止血中的關(guān)鍵成分及生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用摘要牛纖維蛋白原(Fibrinogen,,F(xiàn)g),也稱(chēng)為凝血因子I,,是一種在血液凝固過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的血漿糖蛋白,。本文討論了牛纖維蛋白原的結(jié)構(gòu)特性、提取方法以及各種生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用,,突出其在研究和中的重要性,。引言牛纖維蛋白原是一種分子量較大的糖蛋白(約340 kDa),由肝臟的肝細(xì)胞合成,。它在血液凝固的然后一步中起著主要作用,,在那里它被轉(zhuǎn)化為不溶性的纖維蛋白網(wǎng),,穩(wěn)定了血凝塊。該分子由兩個(gè)相同的半部分組成,,每個(gè)半部分包含三個(gè)多肽鏈(α,、β和γ),通過(guò)二硫鍵連接,。結(jié)構(gòu)特性纖維蛋白原的結(jié)構(gòu)完整性對(duì)其功能至關(guān)重要,。每個(gè)分子的一半包含三個(gè)鏈(α、β,、γ),,具有不同的分子量(α約63.5 kDa,β約56 kDa,,γ約47 kDa)和大約4%的碳水化合物,。這些鏈通過(guò)二硫鍵相互連接,這對(duì)于維持蛋白質(zhì)的構(gòu)象和活性至關(guān)重要,。提取和純化已經(jīng)開(kāi)發(fā)了各種方法來(lái)提取和純化血漿中的牛纖維蛋白原,。傳統(tǒng)方法包括鹽析、色譜法和乙醇沉淀,。鹽析,,特別是使用硫酸銨,是一種常見(jiàn)的方法,,因其簡(jiǎn)單有效而受到青睞,。然而,通過(guò)這些方法獲得的纖維蛋白原純度可能會(huì)有所不同,,需要進(jìn)一步的純化步驟,,如離子交換色譜法,以實(shí)現(xiàn)更高程度的純化,。Recombinant Human Midkine