CUT&RUN和ChIC是兩種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù)，它們有一些關(guān)鍵的區(qū)別：1.**技術(shù)原理**：-**ChIC（ChromatinImmunocleavage）**：ChIC技術(shù)利用抗體將感興趣的蛋白與ProteinA-MNase相結(jié)合來進(jìn)行DNA切割,。ChIC的優(yōu)勢(shì)在于使用TF特異性抗體系住MNase,，并只在結(jié)合位點(diǎn)裂解。-**CUT&RUN（CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease）**：CUT&RUN技術(shù)則是在核的輕微MNase處理后釋放單核小體和TF-DNA復(fù)合物,，留下寡核小體,。CUT&RUN通過在冰上進(jìn)行簡(jiǎn)短的消化反應(yīng)，在TF結(jié)合的MNase擴(kuò)散到周邊的基因組和裂解可接近的染色質(zhì)之前在上清中恢復(fù)TF-DNA復(fù)合物,。2.**操作步驟和簡(jiǎn)便性**：-**ChIC**：ChIC可能需要甲醛固定操作,，這可能重新引入了ChIP-seq的一些問題，如交聯(lián)導(dǎo)致的DNA和蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾,。-**CUT&RUN**：CUT&RUN簡(jiǎn)化了操作步驟,，使用磁珠固定細(xì)胞核，適用于新鮮和冷凍組織樣本,，縮短了生成DNA測(cè)序文庫(kù)的時(shí)間（1-2天）,。3.**背景信號(hào)和信噪比**：-**ChIC**：ChIC產(chǎn)生的背景信號(hào)可能較高，因?yàn)樗赡苌婕暗椒翘禺愋缘腄NA切割,。

磁珠法在基因克隆中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：1.**質(zhì)粒DNA的提取**：磁珠法可以用于從細(xì)菌細(xì)胞中提取質(zhì)粒DNA，這對(duì)于質(zhì)粒的克隆和表達(dá)至關(guān)重要,。通過磁珠法提取的質(zhì)粒DNA純度高,，適合用于后續(xù)的酶切、連接,、轉(zhuǎn)化等分子克隆步驟,。2.**基因組DNA的提取**：磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA,，這對(duì)于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增,、基因表達(dá)分析,、基因突變檢測(cè)等。3.**mRNA的提取和純化**：在mRNA克隆中,，磁珠法可以用于提取和純化mRNA,，這對(duì)于cDNA的合成和基因表達(dá)分析非常關(guān)鍵。磁珠法提取的mRNA純度高,，可以用于后續(xù)的cDNA合成和RT-PCR等實(shí)驗(yàn),。4.**PCR產(chǎn)物的純化**：磁珠法可以用于純化PCR產(chǎn)物，去除反應(yīng)中的酶,、dNTPs和其他雜質(zhì),，為克隆PCR產(chǎn)物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**：在基因克隆過程中,，可能需要從多個(gè)DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段,。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收，提高克隆效率,。6.**自動(dòng)化和高通量操作**：磁珠法易于與自動(dòng)化設(shè)備結(jié)合,，適合高通量樣本處理，這對(duì)于大規(guī)?；蚩寺№?xiàng)目尤為重要,。自動(dòng)化操作減少了人為操作誤差，提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和可靠性,。Recombinant Biotinylated Human IL-17A&F Protein,His-Avi Tag蛋白在表達(dá)過程中形成包涵體,，需要通過復(fù)性步驟恢復(fù)其活性。這通常涉及物質(zhì)的存在下進(jìn)行蛋白質(zhì)的重折疊,。

在PCR實(shí)驗(yàn)中,，為了避免引物與已知序列的交叉反應(yīng)，從而確保實(shí)驗(yàn)的特異性,，以下是一些關(guān)鍵的引物設(shè)計(jì)原則和策略：1.**選擇高保守性區(qū)域**：引物比較好設(shè)計(jì)在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi),，這樣可以確保引物與目標(biāo)序列的特異性結(jié)合。通過比較不同物種的同一基因序列,，可以確定基因的保守區(qū),。2.**避免引物與非目標(biāo)序列的同源性**：設(shè)計(jì)引物時(shí)，應(yīng)避免與基因組中的重復(fù)序列,、假基因或高同源性區(qū)域設(shè)計(jì)引物,。可以通過BLAST等工具對(duì)引物進(jìn)行同源性分析，確保引物只與目標(biāo)序列結(jié)合,。3.**引物長(zhǎng)度和GC含量**：引物長(zhǎng)度一般在15-30堿基之間,，常用的是18-27bp。GC含量一般為40%-60%,，以45-55%為宜,。過高或過低的GC含量都不利于引發(fā)反應(yīng)，上下游引物的GC含量和Tm值應(yīng)保持接近,。4.**避免引物的3'端錯(cuò)配**：引物3'端的堿基應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),，特別是倒數(shù)第二個(gè)堿基，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗,。引物3'端比較好不要選擇A,，比較好選擇T，因?yàn)楫?dāng)末位鏈為T時(shí),，錯(cuò)配的引發(fā)效率降低,。5.**避免引物自身及引物之間的互補(bǔ)序列**：引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，否則引物自身會(huì)折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu),，影響引物與模板的復(fù)性結(jié)合。前后引物之間也不應(yīng)具有互補(bǔ)性,，尤其應(yīng)避免3'端的互補(bǔ)重疊以防止引物二聚體的形成,。

T7EndonucleaseI（T7EI）是一種特殊的DNA內(nèi)切酶，具有以下特點(diǎn)：1.**識(shí)別錯(cuò)配DNA**：T7EI能夠識(shí)別并切割不完全配對(duì)的DNA,、十字型結(jié)構(gòu)DNA,、Holliday結(jié)構(gòu)或交叉DNA以及異源雙鏈DNA。2.**切割位點(diǎn)**：T7EI切割錯(cuò)配位點(diǎn)5'端的,、第二或第三個(gè)磷酸二酯鍵,。3.**靈敏度**：T7EI對(duì)錯(cuò)配DNA的識(shí)別非常靈敏，能夠檢測(cè)并切割單堿基和多堿基的錯(cuò)配,。4.**應(yīng)用**：T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)導(dǎo)致的基因突變的鑒定,。它通過識(shí)別錯(cuò)配DNA來幫助鑒定基因編輯是否成功以及是否有非目標(biāo)效應(yīng)。5.**直接電泳檢測(cè)**：T7EI的產(chǎn)物可以直接通過電泳進(jìn)行檢測(cè),，這使得它在實(shí)驗(yàn)操作中更為方便,。6.**來源**：T7EI來源于大腸桿菌菌株，是一種麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）和T7核酸內(nèi)切酶I（T7EI）的融合蛋白,。7.**成本效益**：盡管T7EI在商業(yè)上使用時(shí)成本較高,，但它在大規(guī)模樣本測(cè)試中，尤其是在基因突變鑒定方面,，提供了一種有效的篩選方法,。8.**特殊注意事項(xiàng)**：T7EI能夠識(shí)別長(zhǎng)度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯(cuò)配DNA,，但不能識(shí)別1bp的插入,、缺失或突變,。這些特點(diǎn)使得T7EndonucleaseI成為基因突變鑒定中一個(gè)非常有用的工具，尤其是在CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)的應(yīng)用中,。CRISPR-Cas12a（以前稱為Cpf1）是一種類II型V型內(nèi)切酶,，偏好富含胸腺嘧啶的原間隔短回文重復(fù)序列鄰近基序。

Cre重組酶在基因編輯中的操作主要涉及以下幾個(gè)步驟：1.**識(shí)別與結(jié)合**：-Cre重組酶首先識(shí)別并分別結(jié)合兩個(gè)LoxP序列的兩個(gè)反向重復(fù)序列,，形成一個(gè)二聚體,。2.**四聚體形成**：-兩個(gè)二聚體互相靠近，形成由四個(gè)Cre分子與兩個(gè)LoxP位點(diǎn)結(jié)合形成的四聚體復(fù)合物,。3.**DNA切割與交換**：-Cre重組酶在每個(gè)LoxP位點(diǎn)的間隔序列中引導(dǎo)單鏈切割,，產(chǎn)生帶有3’端羥基的斷裂。每個(gè)LoxP位點(diǎn)的兩個(gè)單鏈分別被切割,。切割產(chǎn)生的自由3’端與對(duì)側(cè)的3’端進(jìn)行交換和重連,，形成Holliday交叉結(jié)構(gòu)。4.**分子重組與解旋**：-Holliday交叉結(jié)構(gòu)通過Cre酶的作用被解旋并重組,，形成新的重組產(chǎn)物,。這個(gè)過程導(dǎo)致兩個(gè)LoxP位點(diǎn)之間的DNA序列被刪除、反轉(zhuǎn)或易位,，具體效果取決于LoxP序列的排列方式（方向和位置）,。5.**條件性基因編輯**：-通過建立特異性Cre小鼠，該小鼠中的Cre重組酶由特定啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng),，可在特定細(xì)胞或組織或全身表達(dá)Cre重組酶,。與帶有Lox位點(diǎn)的Flox小鼠雜交，子代中可以獲得既帶有Cre又帶有Flox基因的小鼠,，實(shí)現(xiàn)條件性基因打靶（表達(dá)或敲除靶基因）,。One Step RT-qPCR SYBR Green Kit 是一種用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的試劑盒，它結(jié)合了反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增步驟,。Recombinant Biotinylated Human FGL1 Protein,His-Avi Tag

泛素激起酶E1（Ubiquitin-activating enzyme E1）在ATP的存在下激發(fā)泛素分子,，形成E1-泛素硫酯中間體。Purified Protein A

Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌（Thermophilic Geobacillus sp）DNA聚合酶I衍生的酶,，缺乏5'-3'外切核酸酶活性,。以下是關(guān)于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關(guān)鍵信息：來源和特性：Bst Plus DNA Polymerase 具有更強(qiáng)的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性,，適合用于抗污染的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),，如LAMP和CPA等。應(yīng)用：主要應(yīng)用于等溫DNA擴(kuò)增,，包括環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）和其他等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),。規(guī)格：活性定義：1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量。溶液成分：包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl,、0.1 mmol/L EDTA,、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100,、50% 甘油,，pH 7.5 @ 25℃。產(chǎn)品形式：提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL),，貨號(hào)14402ES,，以及凍干粉形式的產(chǎn)品，貨號(hào)14405ES,，不含甘油,。靈敏度和穩(wěn)定性：Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度，低至5copies目的基因可測(cè),，且在飛克（fg）級(jí)別的模板量下也能快速達(dá)到閾值,。在37°C下，該酶可以保持相對(duì)穩(wěn)定的效應(yīng)長(zhǎng)達(dá)5天,，并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年,。儲(chǔ)存條件：建議在-25℃至-15℃下儲(chǔ)存，以保持產(chǎn)品活性,，并避免反復(fù)凍融,。Purified Protein A