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浙江GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-05-01

Genovis是一家瑞典生物技術(shù)公司,,自2010年起,,為生物制藥公司提供SmartEnzymes工具酶。Genovis提供一系列獨(dú)特、快速且易于使用的酶學(xué)工具,,主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界,。我們?cè)谌蚍秶鷥?nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?,,用于單克隆抗體,、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發(fā),、生產(chǎn)和質(zhì)量控制,。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁面”獲得更多應(yīng)用信息,如果您有興趣,,可以和我們一起做一個(gè)“SmartStories”,,也可以聯(lián)系我們。IgMBRAZOR酶能夠?qū)?fù)雜和高分子量的人 IgM 進(jìn)行中級(jí)分析,,從而促進(jìn)疫苗診斷等過程中的IgM表征和質(zhì)量控制,。浙江GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

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與IdeS不同,Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族,。IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶,,可在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1,而IgASAPSub1+2特異性消化鉸鏈上方的IgA1和IgA2m1,。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段,。IgASAP酶能夠生成完整的單價(jià)Fab片段以及IgA的中級(jí)分析,從而促進(jìn)IgA的表征,,例如,,在疫苗、zhiliao和診斷的開發(fā)過程中,。獨(dú)特的酶促工具,,可實(shí)現(xiàn)IgA的中級(jí)表征和質(zhì)量控制;生成均相的Fab和Fc片段,,并保留免疫反應(yīng)性,;高度特異性–人IgA鉸鏈上方的一個(gè)消化位點(diǎn)。四川GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切FabRICATOR(IdeS)固定在磁珠上,,可同時(shí)快速自動(dòng)消化多種抗體,,促進(jìn)中級(jí)表征工作流程,。

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Blinatumomab(一種對(duì) CD19 和 T 細(xì)胞標(biāo)志物 CD3 具有特異性的 BiTE 分子)的研究級(jí)生物仿制藥在室溫下用固定化過夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通過LC-MS對(duì)消解樣品的直接分析表明,,所有三個(gè)連接子區(qū)域均被消解,,α-CD3 VL和VH鏈洗脫為一個(gè)色譜峰,α-CD19 VH和VL鏈作為單獨(dú)的峰洗脫,。來自連接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 結(jié)構(gòu)域的小峰顯示該短連接子未完全消化,,表明 GlySERIAS 對(duì)短連接子的活性較低。與完整的蛋白質(zhì)分析相比,,四個(gè)結(jié)構(gòu)域的分離提供了具有單同位素分辨率的高質(zhì)量光譜,??梢杂^察到每個(gè)結(jié)構(gòu)域的幾個(gè)不同變體,,剩余的連接子殘基數(shù)量不同。在色譜分離過程中,,α-CD3 VH結(jié)構(gòu)域無法從α-CD19 VH結(jié)構(gòu)域完全基線分離,,導(dǎo)致在相關(guān)質(zhì)譜中觀察到一些共洗脫。四個(gè)結(jié)構(gòu)域的分離產(chǎn)生了有關(guān)在完整蛋白質(zhì)水平上鑒定的蛋白質(zhì)修飾位置的信息,。例如,,在完整水平上鑒定的 37 Da 的蛋白質(zhì)修飾被分配給 α-CD3 VH 鏈。此外,,240Da 和 320da 的兩個(gè)修飾分別被分配給 α-CD3 VL 結(jié)構(gòu)域,。后者還含有一個(gè)帶有五六個(gè)組氨酸殘基的 His 標(biāo)簽。這些數(shù)據(jù)證明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 對(duì)包含多個(gè)柔性連接子蛋白進(jìn)行質(zhì)量控制的中級(jí)工作流程的強(qiáng)大功能,。

大多數(shù)zhiliao抗體攜帶人 IgG1 骨架,,雙特異性或多特異性形式的開發(fā)正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性,,例如單價(jià)結(jié)合,、二硫鍵擾亂和配對(duì) Fc 糖基化。傳統(tǒng)方案包括使用木瓜蛋白酶和 Lys-C 的酶消化,,這需要優(yōu)化以大限度地減少過度消化并獲得足夠的產(chǎn)量,。Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE) 在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人 IgG1,以產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段,。該酶在大多數(shù)人IgG1 上也具有活性,,其中鉸鏈區(qū)域以下的突變已被引入。為了證明FabALACTICA的性能,,我們消化了不同的人IgG1抗體,,并使用RP-HPLC分析了所得片段。用FabALACTICA消化后觀察到的定義峰顯示了不同人IgG1抗體的均質(zhì)片段生成和強(qiáng)大的酶性能,。FabALACTICA 酶也可用于生成完整的 Fc 片段,。為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產(chǎn)物,。

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大多數(shù)zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架,雙特異性和多特異性形式的開發(fā)正在迅速增加,。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性,,例如單價(jià)結(jié)合、二硫鍵擾亂和配對(duì)Fc糖基化,。傳統(tǒng)方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化,,這需要優(yōu)化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產(chǎn)量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性,,它在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人IgG1,,并產(chǎn)生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性,,通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇,。所有底物均實(shí)現(xiàn)了完全消化,包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1,。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗(yàn)證了其在生物制藥開發(fā)中的用途,。IgASAP Sub1+2 可消化分泌物和血清 IgA。福建GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

使用GlySERIAS固定化消化融合蛋白得到均質(zhì)Fc/2,。浙江GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis的FabRICATOR Fab2 (IdeS)試劑盒可消化兔 IgG,,但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段,您需要另一種填料,,而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc,。如果您對(duì)處理兔IgG感興趣,請(qǐng)聯(lián)系Genovis團(tuán)隊(duì),,我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱,。使用FabRICATOR的抗體消化的簡單性、速度和可重復(fù)性也意味著這種酶可以被用于質(zhì)量控制應(yīng)用,。 QC方法需要執(zhí)行簡單,,易于訓(xùn)練,高度可重復(fù),,數(shù)據(jù)易于分析,,這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因?yàn)樗m用于一系列不同的IgG,,這也意味著使用FabRICATOR進(jìn)行QC工作的客戶將能夠在未來的產(chǎn)品中使用它,。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。浙江GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)