培養(yǎng)板對(duì)CCK8測(cè)定的影響:不同公司的培養(yǎng)板,以及培養(yǎng)板是否經(jīng)過(guò)處理對(duì)讀數(shù)都有一定的影響。所以前后實(shí)驗(yàn)要一致,。另外在培養(yǎng)箱中,,培養(yǎng)板**外一圈的孔容易干燥揮發(fā),,從而能導(dǎo)致培養(yǎng)基的體積不一樣,增加誤差。如果有可能,**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O,。另外,注意CCK-8不要貼在板壁上,。一定要注意是否是***有問(wèn)題,。解決的方案就是可以在測(cè)定CCK-8的讀數(shù)前,換個(gè)細(xì)胞液,,再測(cè)定,。這樣會(huì)有一定的影響,但是影響的是所有的,,所以均一性還算比較好,。CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn).江蘇cck8實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定,,常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)...
用途: ***篩選、 細(xì)胞增殖測(cè)定,、 細(xì)胞毒性測(cè)定,、 **藥敏試驗(yàn)等。 所需設(shè)備及儀器: 10ul,,100-200ul及多通道移液器 酶標(biāo)儀(帶有450nm濾光片) 96孔培養(yǎng)板 二氧化碳培養(yǎng)箱 培養(yǎng)0.5-4小時(shí):細(xì)胞種類(lèi)不同,,形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話,,可以繼續(xù)培養(yǎng),,以確認(rèn)比較好條件。特別是血液細(xì)胞形成的Formazan很少,,需要較長(zhǎng)的顯色時(shí)間(5-6小時(shí)),。 測(cè)定450nm吸光度:建議采用雙波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定,檢測(cè)波長(zhǎng)450-490nm,,參比波長(zhǎng)600-650nm,。 靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,,重現(xiàn)性好.上...
當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí),,貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1000 個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低,,因此推薦接種量不低于2500 個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基),。酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去,。 注意事項(xiàng)CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌,,但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過(guò)程中需要避免細(xì)菌污染,,以免影響結(jié)果,。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月,在-20℃下避光可以保存1年,。當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí),,培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā),由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差,。一般情況下,,**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,不作為測(cè)定孔用,。在培...
CCK-8沒(méi)有具體規(guī)定反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短,,以具體反映比較好顯色的時(shí)間為主,。因?yàn)椴煌募?xì)胞反應(yīng)時(shí)間、顯色標(biāo)準(zhǔn)都不一樣,,所以一定要設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn),。預(yù)實(shí)驗(yàn)中,可以先做幾個(gè)孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時(shí)間,。3,、懸浮細(xì)胞比貼壁細(xì)胞難顯色。在加入CCK-8培養(yǎng)后,,可每隔一小時(shí)觀測(cè)一下顏色的變化情況,,或者之間用酶標(biāo)儀檢測(cè)更為準(zhǔn)確。4,、CCK8作用時(shí)間越長(zhǎng),,OD值就越大,所以對(duì)于作用時(shí)間也不是越長(zhǎng)久越好,,要把OD值控制在1左右,。5、CCK8要求檢測(cè)孔內(nèi)不能有氣泡,。靈敏度高,,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好.江蘇cck8英文說(shuō)明書(shū)CCK-8盒子的選購(gòu)還記得***次做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí)研究生二年級(jí)的時(shí)候,,當(dāng)時(shí)用的***個(gè)盒子是Sigma的...
,。一般情況下,**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,,不作為測(cè)定孔用,。在培養(yǎng)基中加入CCK8,培養(yǎng)一定的時(shí)間,,測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照,。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),還應(yīng)考慮***的吸收,,可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8,,培養(yǎng)一定的時(shí)間,測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照,。金屬對(duì)CCK-8顯色有影響:當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵、硫酸銅會(huì)***5%,、15%,、90%的顯色反應(yīng),使靈敏度降級(jí),。如果終濃度是10 mM的話,,將會(huì)*****,。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難,一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間,。***篩選:在測(cè)定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí),,經(jīng)常會(huì)用到CCK-8。浙江cck8實(shí)驗(yàn)步驟cck8試劑...
CCK-8沒(méi)有具體規(guī)定反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短,,以具體反映比較好顯色的時(shí)間為主,。因?yàn)椴煌募?xì)胞反應(yīng)時(shí)間、顯色標(biāo)準(zhǔn)都不一樣,,所以一定要設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn),。預(yù)實(shí)驗(yàn)中,,可以先做幾個(gè)孔摸索一下接種數(shù)量和培養(yǎng)時(shí)間,。3、懸浮細(xì)胞比貼壁細(xì)胞難顯色,。在加入CCK-8培養(yǎng)后,,可每隔一小時(shí)觀測(cè)一下顏色的變化情況,或者之間用酶標(biāo)儀檢測(cè)更為準(zhǔn)確,。4,、CCK8作用時(shí)間越長(zhǎng),OD值就越大,,所以對(duì)于作用時(shí)間也不是越長(zhǎng)久越好,,要把OD值控制在1左右。5,、CCK8要求檢測(cè)孔內(nèi)不能有氣泡,。***篩選:在測(cè)定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí),經(jīng)常會(huì)用到CCK-8,。湖北cck8 ic50實(shí)驗(yàn)原理:CellCountingKit-8(簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8)試...
酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,,可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去。 · CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌,,但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞,。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過(guò)程中需要避免細(xì)菌污染,以免影響結(jié)果,。 · CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月,,在-20℃下避光可以保存1年。 · 當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí),,培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā),,由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下,,**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS,,不作為測(cè)定孔用,。 · 在培養(yǎng)基中加入CCK8,培養(yǎng)一定的時(shí)間,,測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照,。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),還應(yīng)考慮***的吸收,,可在加入***的培養(yǎng)基中...
在做一些***毒性試驗(yàn)時(shí),,比如做鐵死亡途徑時(shí),我們加入一個(gè)***叫C1,,這個(gè)時(shí)候就需要提前換液,,其實(shí)我們?cè)囘^(guò),還是會(huì)有一些影響,。所以這時(shí)我們用中性紅檢測(cè),。我們實(shí)驗(yàn)室,通常會(huì)用20%的硫酸銅溶液放到細(xì)胞孵箱下層,,預(yù)防******,。理應(yīng)說(shuō),硫酸銅分子在水溶液中是硫酸根離子和銅離子,,是不會(huì)揮發(fā)的,。但是每次只要是新?lián)Q的硫酸銅溶液再做CCK-8,結(jié)果總是不好,,我也不知道是什么原因,。之前在我們實(shí)驗(yàn)室有發(fā)生過(guò)這樣的事情,這種有深有淺的才是該有的結(jié)果,。我想說(shuō)的是在有能力選擇范圍內(nèi),,盡量選擇好一點(diǎn)的試劑,免得浪費(fèi)時(shí)間,。酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,;北京cck8測(cè)細(xì)胞活性加的量 CCK-8的原理 ...
CCK8檢測(cè)原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔),。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(37℃,5%CO2),。2、細(xì)胞處理(不同實(shí)驗(yàn)處理方式不同),。3,、向每孔加入10μLCCK溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)),。4,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。6,、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。CCK-8用途:***篩選,、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定,、**藥敏試驗(yàn).上海cck8的r平方細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)...
注意事項(xiàng)1,、細(xì)胞密度:MTT要檢測(cè)的只是細(xì)胞的增殖能力,所以不用保證孔內(nèi)細(xì)胞鋪板一定要均勻,,只要保證孔與孔之間的細(xì)胞數(shù)量大致相同就可,,也因此細(xì)胞重懸很重要。每孔加入之前,,都需要吹打混勻細(xì)胞,,但即便如此也很難保證每個(gè)孔的細(xì)胞數(shù)量大致一致,。所以我們?cè)O(shè)置了6組實(shí)驗(yàn)組,,以便計(jì)算結(jié)果時(shí)可以有所取舍。2,、對(duì)于MTT而言,,預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要。預(yù)實(shí)驗(yàn)要摸清楚兩點(diǎn):a)細(xì)胞該如何稀釋?zhuān)籦)***濃度,。網(wǎng)上很多人建議將細(xì)胞數(shù)稀釋到某個(gè)數(shù)值才是**合適的,,但我認(rèn)為只要保證每個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞數(shù)在70%左右,且各個(gè)孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量大致相同就可,,不需要強(qiáng)求一定要達(dá)到某個(gè)數(shù)值,,現(xiàn)實(shí)中,這一步需要多次摸索,。換液的意思是將cck8加在培養(yǎng)基...
讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻,,酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的吸光度。 ***率(%)= [(對(duì)照孔吸光度-實(shí)驗(yàn)孔吸光度)/(對(duì)照孔吸光度-空白孔吸光度)]×100=IC50 注意事項(xiàng) CCK8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng),,如果實(shí)驗(yàn)處理?xiàng)l件中存在還原劑的影響,,應(yīng)事先去除。如果實(shí)驗(yàn)條件中存在還原物質(zhì),,需單獨(dú)測(cè)定還原物質(zhì)的空白吸光度,。如果還原物質(zhì)的吸光度很小,可以忽略不計(jì),;但如果吸光度很大,,則需要去除培養(yǎng)基,,再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次,然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進(jìn)行檢測(cè),。 這個(gè)CCK-8的英文全稱(chēng)是Cell Counting ...