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CCK8,，即Cell Counting Kit-8，與MTT法的主要區(qū)別如下：一,、原理不同1,、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開(kāi)發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。2,、MTT法：其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中,，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜,，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量,。在一定細(xì)胞數(shù)范...

一直都像個(gè)新手,，從未老道過(guò)。所有新手的迷茫與無(wú)奈我**能體會(huì),?？吹綀@子里有一些同學(xué)在問(wèn)有關(guān)CCK8試驗(yàn)的事情，當(dāng)初我也和他們一樣,，像個(gè)被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進(jìn)園子里,，期待能找到些解決謎團(tuán)的只言片語(yǔ)。希望我寫(xiě)的這些非專(zhuān)業(yè)文字能夠幫助那些在實(shí)驗(yàn)室里沒(méi)有前行者指點(diǎn)迷津的筒子們,。當(dāng)然仁者見(jiàn)仁智者見(jiàn)智,，我寫(xiě)的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得，就供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步,。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的,，道路是曲折的，時(shí)間就是用來(lái)浪費(fèi)的,，科研就是自?shī)首詷?lè)使勁折騰,。**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的，我見(jiàn)過(guò)做**的團(tuán)隊(duì),，買(mǎi)CCK-8都是一整箱,，一整箱的買(mǎi)。上海同仁化學(xué)研究所 cck8 ,、***濃度的確定需要做一個(gè)時(shí)間梯度,，鋪板和上...

CCK8的優(yōu)點(diǎn)：方法方便，不用洗滌細(xì)胞,，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑,；CCK-8快速檢測(cè)；CCK-8檢測(cè)靈敏度高,，細(xì)胞密度低也可以檢測(cè),；CCK-8的重復(fù)性?xún)?yōu)于MTT法；CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性很??；CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中是1瓶溶液，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配,，即開(kāi)即用,。CCK8的缺點(diǎn)：相比于與MTT法，CCK8的價(jià)格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。用途：***篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定,、細(xì)胞毒性測(cè)定,、**藥敏試驗(yàn)。代謝率低了以后,，細(xì)胞呼吸減弱,，NAD+產(chǎn)生減少，測(cè)出的Formazan也會(huì)減少,。上海dojindo cck8說(shuō)明書(shū)沒(méi)有做過(guò)MTT實(shí)驗(yàn),，但...

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比.上海cck8檢測(cè)細(xì)胞增殖步驟實(shí)驗(yàn)材料及試劑96孔板,、CO2培養(yǎng)箱,、酒精燈、移液***,、酶標(biāo)儀等,；細(xì)胞、CCK8等,。實(shí)...

CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專(zhuān)注于生命科學(xué),、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢(xún)和技術(shù)服務(wù)，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究,，中藥功能及機(jī)理研究,，納米靶向***研究，**研究整體方案服務(wù),。CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8）試劑用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活...

當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí),，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1000 個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低,，因此推薦接種量不低于2500 個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基),。酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾，可以通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去,。 注意事項(xiàng)CCK8可以檢測(cè)大腸桿菌，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞,。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過(guò)程中需要避免細(xì)菌污染,，以免影響結(jié)果。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個(gè)月,，在-20℃下避光可以保存1年,。當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時(shí),，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準(zhǔn)確而增加誤差,。一般情況下,，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測(cè)定孔用,。在培...

CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的方法： 1.將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胰酶消化后,，完全培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù),。 2.根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)快慢決定鋪板細(xì)胞密度（多數(shù)為1000-2000 cell/well）,，每組3-5重復(fù)，每孔100-200μl培養(yǎng)基,。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)決定鋪板數(shù)量（如需要檢測(cè)5天,，則鋪5張96孔板），我們以1000 cell/well,，5復(fù)孔,，200μl培養(yǎng)基，檢測(cè)5天為例,，各實(shí)驗(yàn)組需要細(xì)胞數(shù)量為1000×5×5個(gè)細(xì)胞,，從計(jì)數(shù)好的細(xì)胞懸液中取出所需的細(xì)胞量和完全培養(yǎng)基混勻，**終體積為200×5×5μl,。 CCK-8試劑中含有WST–8.湖北cck8檢測(cè)毒性統(tǒng)計(jì)學(xué)處理...

再此,，給大家分享個(gè)小事情，有次,，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)已經(jīng)到,，但是盒子不夠，我們就用了某天的CCK-8試劑盒,，***出來(lái)的結(jié)果如圖3,。這個(gè)結(jié)果是我所不能接受的。后來(lái)用Sigma的再重復(fù)了一次,，如圖4,，這種有深有淺的才是該有的結(jié)果。我想說(shuō)的是在有能力選擇范圍內(nèi),，盡量選擇好一點(diǎn)的試劑,，免得浪費(fèi)時(shí)間。后來(lái)博士換了導(dǎo)師,，換了課題,，沒(méi)有再用Sigma的了，用了一個(gè)日本的牌子,，名字和貨號(hào)如下,，結(jié)果只能說(shuō)justsoso,，肯定沒(méi)有Sigma的好用。二次在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的,，有呼吸,，有能量代謝）.上海cck8結(jié)果統(tǒng)計(jì)。一般情況下,，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基,，不作為測(cè)定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的...

在做每個(gè)東西之前,，都要搞清楚這個(gè)東西是什么。CCK-8的英文全稱(chēng)是Cell Counting Kit-8,，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子,。那它的用途也就大致可以猜到，和細(xì)胞增殖相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以,。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中,，**主要的化學(xué)藥品是WST-8，化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,。它的**基團(tuán)和MTT是一樣的,，是MTT的升級(jí)版本。在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的,，有呼吸,，有能量代謝）存在的情況下，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan),?；罴?xì)胞越多，產(chǎn)生的Formazan就越多,，顏色...

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定,，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).浙江cck8測(cè)的是什么 CKK-8原理 CellCountingKit,，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)...

貼壁生長(zhǎng)的時(shí)間我一般就直接讓它貼壁長(zhǎng)24h了,，這個(gè)時(shí)間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設(shè)置時(shí)間對(duì)自己安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間也方便,。沒(méi)人愿意大半夜爬起來(lái)做實(shí)驗(yàn)吧,。3、加藥后的孵育時(shí)間,，我的實(shí)驗(yàn)摸了3個(gè)時(shí)間,，24h，48h,，72h,。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來(lái)選擇比較好的時(shí)間,。太長(zhǎng)了就沒(méi)有必要了,，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4,、CCK8試劑加入量,，說(shuō)明書(shū)中明確寫(xiě)出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個(gè)問(wèn)題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系,，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內(nèi)呢,。關(guān)于這一點(diǎn)文獻(xiàn)報(bào)道不一致,。本人...

CCK-8的用途1.細(xì)胞增殖測(cè)定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到，比如**相關(guān),、損傷后修復(fù)等,。2.***篩選：在測(cè)定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí)，經(jīng)常會(huì)用到CCK-8,。3.細(xì)胞毒性測(cè)定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響,，比如在UV、低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上,。4.**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見(jiàn)過(guò)做**的團(tuán)隊(duì)，買(mǎi)CCK-8都是一整箱,，一整箱的買(mǎi),，比如果子老師所在的團(tuán)隊(duì)，哈哈哈,。5.微生物對(duì)細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn)在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的,，有呼吸,，有能量代謝）.江蘇mtt與cck8的波長(zhǎng)細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)1.在96孔板中配制100ml的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)...

摸條件包括1,、種板數(shù),；2、種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間,；3,、加藥后的孵育時(shí)間；4,、cck8試劑加入量,；5、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間,?？雌饋?lái)很多，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn),。而且都是種的空白板,，也就是不加藥物，只加細(xì)胞和CCK8,。我沒(méi)有做過(guò)MTT實(shí)驗(yàn),，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）。都說(shuō)CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定,，所以就用了這個(gè)試劑盒,。 當(dāng)然仁者見(jiàn)仁智者見(jiàn)智，我寫(xiě)的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得,，但供參考,。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的,，道路是曲折的,，時(shí)間就是用來(lái)浪費(fèi)的，科研就是自?shī)首詷?lè)使勁折騰,。 細(xì)胞增殖檢測(cè)——CCK8.天津cck8是什么CCK-8沒(méi)有具體規(guī)定反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短...

讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻,，酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的吸光度。 ***率（％）= [（對(duì)照孔吸光度-實(shí)驗(yàn)孔吸光度）/（對(duì)照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50 注意事項(xiàng) CCK8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng),，如果實(shí)驗(yàn)處理?xiàng)l件中存在還原劑的影響,，應(yīng)事先去除。如果實(shí)驗(yàn)條件中存在還原物質(zhì),，需單獨(dú)測(cè)定還原物質(zhì)的空白吸光度,。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計(jì)；但如果吸光度很大,，則需要去除培養(yǎng)基,，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進(jìn)行檢測(cè),。 在CCK-8試劑盒中,，**主要的化學(xué)藥品是WST-8....

CCK-8盒子的選購(gòu)還記得***次做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí)研究生二年級(jí)的時(shí)候，當(dāng)時(shí)用的***個(gè)盒子是Sigma的,，當(dāng)時(shí)的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，還不是現(xiàn)在的Millipore-Sigma,。那個(gè)盒子給了我莫大的鼓勵(lì),，因?yàn)樵谀侵白龇肿涌寺∫恢倍疾皇呛茼樌＿@個(gè)盒子是我的碩士老板從美國(guó)帶回來(lái)的,，品質(zhì)有保證,，***的結(jié)果也是很好的。后面在做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí),，我們?cè)谟羞x擇的情況下都會(huì)買(mǎi)sigma,，下圖2是sigma官網(wǎng)的截圖。其實(shí)也不貴,，只是到貨時(shí)間太慢,。細(xì)胞毒性測(cè)定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響，比如低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上,。天津cellti...

CCK8原理,、優(yōu)勢(shì)和步驟 檢測(cè)原理： ◆ Cell Counting Kit簡(jiǎn)稱(chēng)CCK試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒,。 ◆ WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品,，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）,。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值,，間接反映活細(xì)胞數(shù)量,。 CCK-8試劑中含有WST–8.江蘇cc...

氧化還原試劑對(duì)CCK8測(cè)定的影響：CCK8是一個(gè)氧化還原反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，在整個(gè)操作當(dāng)中,，如果有氧化還原試劑都會(huì)影響**終的結(jié)果,。當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)影響CCK8的測(cè)定，增加OD值,。在有氧化性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)***測(cè)定反應(yīng)的發(fā)生,，減少OD值。在高中化學(xué)我們就知道金屬是氧化還原反應(yīng)中的重要參與者。各個(gè)公司都會(huì)告訴你：“終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵,、硫酸銅會(huì)***5%、15%,、90%的顯色反應(yīng),，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話,，將會(huì)*****,。”我**開(kāi)始看到這句話時(shí)很懵,，因?yàn)椴恢涝诓僮髦性鯓訒?huì)遇到這種情況,。下面就分享我能想到或者在操作中真實(shí)遇到的。cck8試劑盒價(jià)格是多少?上海cck8結(jié)果圖怎...

經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及分享： CCK8的說(shuō)明書(shū)大家一定要認(rèn)真閱讀,，里面很多細(xì)節(jié)的問(wèn)題都有提到,。而且說(shuō)明書(shū)里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過(guò)的比較好數(shù)值,。但無(wú)論如何,，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件。你就算再懶,，這個(gè)懶不得,，否則你都只是在做無(wú)用功。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提,， 如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了,。 摸條件包括1、種板數(shù),；2,、種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間；3,、加藥后的孵育時(shí)間,；4、cck8試劑加入量,；5,、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間?？雌饋?lái)很多,，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn)。而且都是種的空白板,，也就是不加***,，只加細(xì)胞和CCK8,。 在電...

貼壁生長(zhǎng)的時(shí)間我一般就直接讓它貼壁長(zhǎng)24h了，這個(gè)時(shí)間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全,，而且這樣設(shè)置時(shí)間對(duì)自己安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間也方便,。沒(méi)人愿意大半夜爬起來(lái)做實(shí)驗(yàn)吧。3,、加藥后的孵育時(shí)間,，我的實(shí)驗(yàn)摸了3個(gè)時(shí)間，24h,，48h,，72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）,、OD值的范圍（1.0左右）這些來(lái)選擇比較好的時(shí)間,。太長(zhǎng)了就沒(méi)有必要了，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了,。4、CCK8試劑加入量,，說(shuō)明書(shū)中明確寫(xiě)出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%,。這里有一個(gè)問(wèn)題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升,，cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點(diǎn)文獻(xiàn)報(bào)道不一致,。本人...

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見(jiàn)說(shuō)明書(shū)）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。5、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。CCK8雖好,這些情況下不建議用!浙江cck8統(tǒng)計(jì)方法小木蟲(chóng)注意事項(xiàng)1、細(xì)胞密度：MTT要檢測(cè)的只是細(xì)胞的增殖能力...

1、種板數(shù)：這個(gè)要查文獻(xiàn),，看你所用細(xì)胞別人有無(wú)做過(guò)，把范圍大致找出,。記住還要參考說(shuō)明書(shū)，這個(gè)很重要,。然后稀釋一系列濃度種板,。首先你要觀察多長(zhǎng)時(shí)間細(xì)胞可貼壁完全,，一般貼壁生長(zhǎng)24小時(shí),。然后還有在你的實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)，不同細(xì)胞數(shù)下孔內(nèi)生長(zhǎng)情況,。比如我擬定考察4天的時(shí)間,，那么在4天內(nèi)，細(xì)胞是剛好鋪滿還是堆積生長(zhǎng),？因?yàn)槊繅K板都會(huì)設(shè)置對(duì)照孔,，也就是含有細(xì)胞的培養(yǎng)基+CCK8，這個(gè)數(shù)值是板上的比較大數(shù)值,，CCK8試驗(yàn)比較好OD值在1.0附近,，所以這個(gè)比較大數(shù)值比較好能控制在1.0左右。我的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)是不要讓細(xì)胞長(zhǎng)滿,，一旦長(zhǎng)滿了很難去判斷是否堆積生長(zhǎng)了,，對(duì)***能否順利進(jìn)入細(xì)胞有影響此為其一，其二生長(zhǎng)不均勻易導(dǎo)致孔...

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。 MTT實(shí)驗(yàn)操作 1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式： 2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時(shí),； 向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。...

細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)1.在96孔板中配制100ml的細(xì)胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(在37℃,，5%CO2的條件下),。2.向培養(yǎng)板加入10ml不同濃度的待測(cè)物質(zhì),。3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如:6,12,24或48小時(shí)),。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響O.D值的讀數(shù)),。5.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。6.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。7.如果暫時(shí)不測(cè)定O.D值,，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。注意：如果...

cck8試劑加入后孵育時(shí)間,，隨著時(shí)間的增加,，OD值就會(huì)增大,?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h,、1.0h,、2.0h。 再說(shuō)一下關(guān)于種板設(shè)置問(wèn)題,。眾所周知周?chē)蝗滓驗(yàn)檫吘壭?yīng)都是不用來(lái)做實(shí)驗(yàn)的,。一般每組樣品我會(huì)設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，得到的OD值去掉**大值與**小值,，其余取平均值,。我用的是排***，會(huì)省很多力氣,，但是也會(huì)增大組內(nèi)誤差,。這個(gè)只有通過(guò)校正移液***和選用**適***頭了。 能力有限,，表達(dá)不清的大家湊合著看看吧,。有疑問(wèn)的歡迎大家留言討論，我們的目標(biāo)是共同進(jìn)步，哈哈,。 主要是重復(fù)性?xún)?yōu)于MTT,；江蘇cck8統(tǒng)計(jì)分析沒(méi)有做過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)，但其實(shí)原理及目的都是一...

在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時(shí),，對(duì)于大多數(shù)情況孵育2小時(shí)左右就可以了,。6.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度（使用酶標(biāo)儀之前要提前開(kāi)啟10min預(yù)熱）測(cè)定完成后，保存數(shù)據(jù),。7.連續(xù)五天檢測(cè),，每天保持一樣的時(shí)間點(diǎn)加入CCK-8溶液，在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育時(shí)間相同,。注：若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話,，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉***影響,。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更...

注意事項(xiàng)1,、細(xì)胞密度：MTT要檢測(cè)的只是細(xì)胞的增殖能力,，所以不用保證孔內(nèi)細(xì)胞鋪板一定要均勻，只要保證孔與孔之間的細(xì)胞數(shù)量大致相同就可,，也因此細(xì)胞重懸很重要,。每孔加入之前，都需要吹打混勻細(xì)胞,，但即便如此也很難保證每個(gè)孔的細(xì)胞數(shù)量大致一致,。所以我們?cè)O(shè)置了6組實(shí)驗(yàn)組，以便計(jì)算結(jié)果時(shí)可以有所取舍,。2,、對(duì)于MTT而言，預(yù)實(shí)驗(yàn)很重要,。預(yù)實(shí)驗(yàn)要摸清楚兩點(diǎn)：a)細(xì)胞該如何稀釋?zhuān)籦)***濃度,。網(wǎng)上很多人建議將細(xì)胞數(shù)稀釋到某個(gè)數(shù)值才是**合適的，但我認(rèn)為只要保證每個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞數(shù)在70%左右,，且各個(gè)孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量大致相同就可,，不需要強(qiáng)求一定要達(dá)到某個(gè)數(shù)值,，現(xiàn)實(shí)中，這一步需要多次摸索,。那它的用途也就大致可以猜到,，和細(xì)...

CCK8檢測(cè)原理圖2操作步驟1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2,、細(xì)胞處理（不同實(shí)驗(yàn)處理方式不同）,。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。5,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。6,、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。浙江cck8的價(jià)格細(xì)胞活性...

CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的注意事項(xiàng)：1.加入CCK8溶液時(shí)不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù),；2.要設(shè)計(jì)空白對(duì)照組,；3.對(duì)于大多數(shù)情況，加入CCK8溶液后,，孵育2h左右就可以了,；4.使用酶標(biāo)儀之前要提前開(kāi)啟10min預(yù)熱；5.若連續(xù)多天檢測(cè),，必須保持所有條件一致,。相關(guān)鏈接：CCK8的特性、保存方法以及與BrdU的區(qū)別CCK8空白對(duì)照,，測(cè)定參比波長(zhǎng)的設(shè)定以及OD值的合適范圍CCK8標(biāo)準(zhǔn)曲線,、檢測(cè)時(shí)間、終止反應(yīng)以及減少加樣誤差的方法外界因素(金屬/***/細(xì)菌/培養(yǎng)基/培養(yǎng)板)對(duì)CCK8測(cè)定的影響細(xì)胞因素(預(yù)培養(yǎng)/生長(zhǎng)方式/狀態(tài)/細(xì)胞數(shù)/死細(xì)胞)對(duì)CCK8測(cè)定的影響細(xì)胞增殖到底用MTT還...

培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量）,，會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng),，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致,，不要更換其他培養(yǎng)基,。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右,。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,，會(huì)增加空白吸收，但不影響測(cè)定,，扣除空白吸收即可,，可見(jiàn)空白孔非常重要，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照,。另外,，血清不影響測(cè)定，所以我用CCK-8來(lái)測(cè)定病毒對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)病毒復(fù)制的影響時(shí),，我都小心翼翼的測(cè)很多個(gè)時(shí)間點(diǎn),，說(shuō)實(shí)話，效果不是很好,。所以我比較喜歡中性紅,。水溶性，不需要換液,，尤其適合于懸浮細(xì)胞.北京cck8 od值...

CCK8,，即Cell Counting Kit-8，與MTT法的主要區(qū)別如下：一,、原理不同1,、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開(kāi)發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。2,、MTT法：其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中,，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜,，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范...