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氧化還原試劑對(duì)CCK8測(cè)定的影響：CCK8是一個(gè)氧化還原反應(yīng)實(shí)驗(yàn),，在整個(gè)操作當(dāng)中,，如果有氧化還原試劑都會(huì)影響**終的結(jié)果,。當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)影響CCK8的測(cè)定,，增加OD值。在有氧化性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)***測(cè)定反應(yīng)的發(fā)生,，減少OD值,。在高中化學(xué)我們就知道金屬是氧化還原反應(yīng)中的重要參與者。各個(gè)公司都會(huì)告訴你：“終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵,、硫酸銅會(huì)***5%、15%,、90%的顯色反應(yīng),，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話,，將會(huì)*****,。”我**開(kāi)始看到這句話時(shí)很懵,，因?yàn)椴恢涝诓僮髦性鯓訒?huì)遇到這種情況,。下面就分享我能想到或者在操作中真實(shí)遇到的,。水溶性，不需要換液,，尤其適合于懸浮細(xì)胞.北京c...

在做每個(gè)東西之前,，都要搞清楚這個(gè)東西是什么。CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8,，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子,。那它的用途也就大致可以猜到，和細(xì)胞增殖相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以,。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中,，**主要的化學(xué)藥品是WST-8，化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,。它的**基團(tuán)和MTT是一樣的,，是MTT的升級(jí)版本。在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的,，有呼吸,，有能量代謝）存在的情況下，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan),?；罴?xì)胞越多，產(chǎn)生的Formazan就越多,，顏色...

CCK-8的原理 所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。為什么是粗略的呢，因?yàn)檫@里沒(méi)有考慮到細(xì)胞代謝水平的高低,，有些細(xì)胞在***處理后,，可能活細(xì)胞數(shù)不變，但是代謝率低了以后,，細(xì)胞呼吸減弱,，NAD+產(chǎn)生減少，測(cè)出的Formazan也會(huì)減少,，所以此時(shí)怎么算呢（此時(shí)我就比較懷戀中性紅了）,？當(dāng)然也有解決的辦法，下期給大家介紹,。因此可利用這個(gè)原理進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,，在吸光度為450時(shí)檢測(cè)讀數(shù)。顏色也會(huì)越深 CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8,，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子,。北京cck8標(biāo)準(zhǔn)曲線cck8試劑加入后孵育時(shí)間，隨著時(shí)間的增加,，OD...

CKK-8原理 CellCountingKit,，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）,，是近年新開(kāi)發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測(cè)，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）,。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,，用酶聯(lián)免疫分析儀測(cè)定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。 細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法及經(jīng)...

3、24小時(shí)后,，吸出培養(yǎng)基,，對(duì)照組和空白組每孔各加入100ul無(wú)血清培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組每孔加入100ul基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制的***,，繼續(xù)作用12或24小時(shí),；4、***作用完畢后,，每孔加入50ulMTT,繼續(xù)作用4小時(shí),；5、棄掉每孔中的MTT,，每孔加入150ul的DMSO或異丙醇,。然后震蕩10分鐘，使孔底的紫色結(jié)晶充分溶解,；6,、在酶聯(lián)免疫機(jī)器上測(cè)定吸光度，波長(zhǎng)為550nm或490nm,。7,、細(xì)胞存活率=（實(shí)驗(yàn)組吸光度值-空白組吸光度值）/(對(duì)照組吸光度值-空白組吸光度值)***。**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見(jiàn)過(guò)做**的團(tuán)隊(duì),，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買,。江蘇cck8數(shù)值四,、方法及步驟：實(shí)驗(yàn)一...

CCK8檢測(cè)原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2、細(xì)胞處理（不同實(shí)驗(yàn)處理方式不同）,。3,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。4,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。6,、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。若細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng),，培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換培養(yǎng)基后再加 CCK-8.江蘇cck8細(xì)胞增殖數(shù)據(jù)分...

培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量）,，會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致,，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右,。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會(huì)增加空白吸收,，但不影響測(cè)定,，扣除空白吸收即可，可見(jiàn)空白孔非常重要,，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照,。另外，血清不影響測(cè)定,。有師妹在做一個(gè)HIF1a***劑實(shí)驗(yàn)時(shí),，多加了這個(gè)***劑的濃度，CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)原理.江蘇cck8圖CCK-8（CellCountingKit-8）細(xì)胞活性和增殖檢測(cè)是醫(yī)學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù),，其原理是...

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線1.先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,，然后接種細(xì)胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度,，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度,，每組3-6個(gè)復(fù)孔。3.接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁,，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定O.D值,，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X軸)，O.D值為縱坐標(biāo)(Y軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提條件是實(shí)驗(yàn)的條件要一致,，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間),。***篩選：在測(cè)定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí)，經(jīng)常會(huì)用到CCK-8,。江蘇cck8 吸光度CCK8...

CCK8檢測(cè)原理圖2操作步驟1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2,、細(xì)胞處理（不同實(shí)驗(yàn)處理方式不同）。3,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。4,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。5,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。6、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。水溶性，不需要換液,，尤其適合于懸浮細(xì)胞.浙江cck8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)原理CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見(jiàn)說(shuō)明書）：...

CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專注于生命科學(xué),、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢和技術(shù)服務(wù)，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究,，中藥功能及機(jī)理研究,，納米靶向***研究，**研究整體方案服務(wù),。CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活...

五,、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：·若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。·如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話,，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉***影響,。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,。·當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1,000個(gè)/孔(100μl培養(yǎng)基),。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低,，因此推薦接種量不低于2,500個(gè)/...

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見(jiàn)說(shuō)明書）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。4,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。5,、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。主要是重復(fù)性優(yōu)于MTT,；江蘇cck8吸光度小于0.1但有趨勢(shì)細(xì)胞活性檢測(cè)1.在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ml/...

CCK8的優(yōu)點(diǎn)：方法方便,，不用洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑,；CCK-8快速檢測(cè),；CCK-8檢測(cè)靈敏度高，細(xì)胞密度低也可以檢測(cè),；CCK-8的重復(fù)性優(yōu)于MTT法,；CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性很小,；CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中是1瓶溶液,，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，即開(kāi)即用。CCK8的缺點(diǎn)：相比于與MTT法,，CCK8的價(jià)格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。用途：***篩選,、細(xì)胞增殖測(cè)定,、細(xì)胞毒性測(cè)定、**藥敏試驗(yàn),。細(xì)胞增殖測(cè)定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到,，比如**相關(guān)、損傷后修復(fù)等,。上海cck8實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng) 經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及分享： CCK8...

酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,；◆細(xì)胞毒性非常低，因此加入WST-8顯色后,，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到比較好測(cè)定時(shí)間,。實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)1、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃,，5%CO2）。2,、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6,、12、24或48小時(shí)）,。4,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。5,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。6,、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。那它的用途也就大致可以猜到，和細(xì)胞增殖,、細(xì)胞毒性相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都...

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定,，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng),。 MTT實(shí)驗(yàn)操作 1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）,、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式： 2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中,，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時(shí)； **藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見(jiàn)過(guò)做**的團(tuán)隊(duì),，買CCK-8都是一整箱，一整箱...

CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖和毒性實(shí)驗(yàn)佰歐晶生物專注于生命科學(xué),、醫(yī)學(xué)及藥學(xué)科研咨詢和技術(shù)服務(wù),，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究，中藥功能及機(jī)理研究,，納米靶向***研究,，**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活...

貼壁生長(zhǎng)的時(shí)間我一般就直接讓它貼壁長(zhǎng)24h了,，這個(gè)時(shí)間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全,，而且這樣設(shè)置時(shí)間對(duì)自己安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間也方便。沒(méi)人愿意大半夜爬起來(lái)做實(shí)驗(yàn)吧,。3,、加藥后的孵育時(shí)間，我的實(shí)驗(yàn)摸了3個(gè)時(shí)間,，24h,，48h，72h,。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）,、OD值的范圍（1.0左右）這些來(lái)選擇比較好的時(shí)間。太長(zhǎng)了就沒(méi)有必要了,，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了,。4、CCK8試劑加入量,，說(shuō)明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%,。這里有一個(gè)問(wèn)題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升,，cck8不算在體系內(nèi)呢,。關(guān)于這一點(diǎn)文獻(xiàn)報(bào)道不一致。本人...

一直都像個(gè)新手,，從未老道過(guò),。所有新手的迷茫與無(wú)奈我**能體會(huì)?？吹綀@子里有一些同學(xué)在問(wèn)有關(guān)CCK8試驗(yàn)的事情,，當(dāng)初我也和他們一樣，像個(gè)被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進(jìn)園子里,，期待能找到些解決謎團(tuán)的只言片語(yǔ),。希望我寫的這些非專業(yè)文字能夠幫助那些在實(shí)驗(yàn)室里沒(méi)有前行者指點(diǎn)迷津的筒子們。當(dāng)然仁者見(jiàn)仁智者見(jiàn)智,，我寫的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得,，就供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步,。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的,，道路是曲折的，時(shí)間就是用來(lái)浪費(fèi)的,，科研就是自?shī)首詷?lè)使勁折騰,。CCK8試驗(yàn)的總體實(shí)驗(yàn)心得.湖北cck8 波長(zhǎng) CKK-8原理 CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯...

7,、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話,，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下,，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可?；盍τ?jì)算：保存條件：4℃避光保存一年有效,，-20℃避光保存兩年有效。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比.湖北cck8細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn) 酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾，可以通過(guò)扣除空白孔中...

7,、若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話,，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉***影響,。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可,。活力計(jì)算：保存條件：4℃避光保存一年有效,，-20℃避光保存兩年有效,。在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的，有呼吸,，有能量代謝）.上海cck8法 CCK-8的原理 所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的...

培養(yǎng)板對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同公司的培養(yǎng)板,，以及培養(yǎng)板是否經(jīng)過(guò)處理對(duì)讀數(shù)都有一定的影響。所以前后實(shí)驗(yàn)要一致,。另外在培養(yǎng)箱中,，培養(yǎng)板**外一圈的孔容易干燥揮發(fā)，從而能導(dǎo)致培養(yǎng)基的體積不一樣,，增加誤差,。如果有可能，**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O,。另外,，注意CCK-8不要貼在板壁上。一定要注意是否是***有問(wèn)題,。解決的方案就是可以在測(cè)定CCK-8的讀數(shù)前,，換個(gè)細(xì)胞液，再測(cè)定,。這樣會(huì)有一定的影響,，但是影響的是所有的，所以均一性還算比較好,。酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,；天津mts cck8 CCK-8的原理 所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正...

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定,，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式：2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，細(xì)胞增殖測(cè)定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到,，比如**相關(guān),、損傷后修復(fù)等。江蘇cck8 數(shù)據(jù)CCK8檢測(cè)原理圖2操作步驟1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100...

培養(yǎng)板對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同公司的培養(yǎng)板,，以及培養(yǎng)板是否經(jīng)過(guò)處理對(duì)讀數(shù)都有一定的影響。所以前后實(shí)驗(yàn)要一致,。另外在培養(yǎng)箱中,，培養(yǎng)板**外一圈的孔容易干燥揮發(fā)，從而能導(dǎo)致培養(yǎng)基的體積不一樣,，增加誤差,。如果有可能，**外一圈的孔只加高壓滅菌的PBS或ddH2O,。另外,，注意CCK-8不要貼在板壁上。一定要注意是否是***有問(wèn)題,。解決的方案就是可以在測(cè)定CCK-8的讀數(shù)前,，換個(gè)細(xì)胞液，再測(cè)定,。這樣會(huì)有一定的影響,，但是影響的是所有的,，所以均一性還算比較好,。CCK8雖好,這些情況下不建議用!湖北細(xì)胞增殖cck8 CKK-8原理 CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名...

CCK8原理,、優(yōu)勢(shì)和步驟 檢測(cè)原理： ◆ Cell Counting Kit簡(jiǎn)稱CCK試劑盒,，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒,。 ◆ WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下,，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）,。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比,。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值,，間接反映活細(xì)胞數(shù)量。 CCK8試驗(yàn)的總體實(shí)驗(yàn)心得.上海doji...

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見(jiàn)說(shuō)明書）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)1,、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2,、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度,。5,、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。cck8結(jié)果處理**終結(jié)果.上海mts cck8CCK-8（CellCountingKit-8）細(xì)胞活性和增殖檢測(cè)...

實(shí)驗(yàn)原理：CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法及經(jīng)驗(yàn)總結(jié)-CCK-8 法.浙江cck8增殖數(shù)據(jù)結(jié)果四,、方法及步驟：實(shí)驗(yàn)一...

CCK8的優(yōu)點(diǎn)：方法方便,，不用洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑,；CCK-8快速檢測(cè),；CCK-8檢測(cè)靈敏度高，細(xì)胞密度低也可以檢測(cè),；CCK-8的重復(fù)性優(yōu)于MTT法,；CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性很小,；CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中是1瓶溶液,，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配,，即開(kāi)即用。CCK8的缺點(diǎn)：相比于與MTT法,，CCK8的價(jià)格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。用途：***篩選,、細(xì)胞增殖測(cè)定,、細(xì)胞毒性測(cè)定、**藥敏試驗(yàn),。向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。北京cck8 數(shù)據(jù)要求特點(diǎn)不同1,、CellCount...

培養(yǎng)基對(duì)CCK8測(cè)定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng),，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基,。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下,，會(huì)增加空白吸收,，但不影響測(cè)定，扣除空白吸收即可,，可見(jiàn)空白孔非常重要,，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外,，血清不影響測(cè)定,。有師妹在做一個(gè)HIF1a***劑實(shí)驗(yàn)時(shí)，多加了這個(gè)***劑的濃度,，不同的種板數(shù)對(duì)檢測(cè)***的IC50影響大嗎,？浙江cck8 細(xì)胞活力五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：·若暫時(shí)不測(cè)定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1...

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定,，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測(cè),。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個(gè)***或者說(shuō)是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來(lái)證明作用效果,。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。 MTT實(shí)驗(yàn)操作 1,、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無(wú)血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無(wú)血清培養(yǎng)基）,，可以采用如下圖的排版方式： 2,、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時(shí),； **藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見(jiàn)過(guò)做**的團(tuán)隊(duì)，買CCK-8都是一整箱,，一整箱...

摸條件包括1,、種板數(shù)；2,、種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間,；3、加藥后的孵育時(shí)間,；4,、cck8試劑加入量；5,、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間,。看起來(lái)很多,，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn),。而且都是種的空白板，也就是不加藥物,，只加細(xì)胞和CCK8,。我沒(méi)有做過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）,。都說(shuō)CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定,，所以就用了這個(gè)試劑盒。 當(dāng)然仁者見(jiàn)仁智者見(jiàn)智,，我寫的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得,，但供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步,。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的,，道路是曲折的，時(shí)間就是用來(lái)浪費(fèi)的,，科研就是自?shī)首詷?lè)使勁折騰,。 接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻,，以避免細(xì)胞沉淀下來(lái)，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致,。湖...