外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣,、硬件要求高,、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,,組分經(jīng)過優(yōu)化處理,,適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清,、血漿,、尿液及其他體液(腦脊液、腹水,、羊水,、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒,。注意事項(xiàng):1.對于待測樣品粘度過大時,可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理,。2.當(dāng)血清,、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,,可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過EPF柱離心。3.針對外泌體標(biāo)志蛋白(CD63,CD9,CD81等)進(jìn)行Westernblot檢測,,可以鑒定所提的外泌體,。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量。在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用,。杭州正規(guī)外泌體提取試劑
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心,、試劑盒,、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,,然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,,費(fèi)事費(fèi)力,,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,且損耗量大,,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對于抽提細(xì)胞上清來說,更是極為不請便,試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,,造成濃縮效率低,濃縮管重復(fù)利用差,,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團(tuán),,造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,對于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響太原正規(guī)外泌體提取試劑報價外泌體提?。簶悠分写蠓肿硬荒苓M(jìn)入凝膠孔,,只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱,被流動相洗脫出來,。
外泌體(exosome),,特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中?,F(xiàn)已證實(shí)可以分泌外泌體的細(xì)胞有:肥大細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞,、樹突狀細(xì)胞、瘤細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞等,。外泌體在免疫中抗原呈遞、瘤的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用,。同時,不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,,根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類,包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。其中,外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,,由多種細(xì)胞分泌,,內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不光具有其特異性蛋白分子,,而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子
外泌體(exosome)是所有細(xì)胞釋放出的菌類大小的顆粒。它們天然地存在于血液中,。根據(jù)來自美國德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心的一項(xiàng)新的研究,,對外泌體進(jìn)行基因操縱可能提供一種新的胰腺病治病方法。論文通信作者為德州大學(xué)MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學(xué)系研究員RaghuKalluri博士,。在這項(xiàng)新的研究中,,經(jīng)過基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解,,增加它們的總存活率,。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運(yùn)送小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA)分子來靶向胰腺病細(xì)胞中的KRAS突變基因,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負(fù)荷和存活,。他們證實(shí)外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,,這是因?yàn)檫@些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內(nèi)遷移和進(jìn)入靶細(xì)胞(包括病細(xì)胞)中。外泌體在免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等生理病理上起著重要的作用。外泌體提?。撼x法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎。
外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷:miRNAs是一類含有20~25個核苷酸的非編碼小RNA,,能夠通過下調(diào)或壓制靶mRNAs來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達(dá),,目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中,參與一些病癥的形成和演化過程,。單個miRNA可能通過壓制性復(fù)合物與多個mRNA結(jié)合,,從而阻滯整個生物通路。因此,,外泌體的miRNA具有成為NSCLC標(biāo)志物的優(yōu)勢,。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報道了循環(huán)游離miRNA的表達(dá),與75例健康者相比,,發(fā)現(xiàn)了兩種高表達(dá)的miRNA(miR-25和miR-223),。Rabinonowits等對27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個miRNA的表達(dá)進(jìn)行了評估,結(jié)果顯示,,12個一些病癥相關(guān)的miRNA*在肺病患者中過度表達(dá),。Cazzoli等收集了30個血漿樣本,發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA(miR-378a,、-379a,、-139-5p、-200b-5p)在肺病患者血清中明顯升高,用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積(AUC)為0.908,。超濾離心法簡單高效,,且不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不高的問題,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑哪里買
外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷,。杭州正規(guī)外泌體提取試劑
Exosome,中文名外泌體,,是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),直徑大約40-100nm,。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),,但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年,,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能,。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞,、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),能很好的保護(hù)其包被的物質(zhì),,且能靶向特定細(xì)胞或組織,因此是一種很好靶向給藥系統(tǒng)(targeteddeliverysystem),。杭州正規(guī)外泌體提取試劑