實(shí)驗應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用,。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞,，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽性,，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,，并且制作簡便,成本低廉,。除了從整條鼠尾中提取的鼠尾膠原蛋白，老鼠的尾巴尖尖也是制備「耗子尾汁」的好材料,。上海鼠尾膠原直銷廠家

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞,。也可用于制備三維膠,，模擬真實(shí)的生長環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長,。1,，在使用鼠膠原蛋白型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細(xì)胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上,，pH左右時可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,，檢查到NIH-3T3細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12細(xì)胞在三維膠表面正常生長,。使用方法：1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。武漢正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價膠原蛋白就像骨骼中的一張充滿小洞的網(wǎng),，它會牢牢地留住就要流失的鈣質(zhì)。

膠原蛋白的提取方法：1.堿法提?。簤A法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉、碳酸鈉等,。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白,。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低,。所以,，若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，此法不可取,。2.鹽法提?。蝴}法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉,、檸檬酸鹽等,。在中性條件下，當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時,，膠原溶解,。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,，pH左右時可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,，在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液（均需要無菌、預(yù)冷）10mg/L酚紅用于pH指示）0.1mol/LNaOH,，0.1mol/L乙酸(一般不用),，雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）立即混勻,。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試)。鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過夜,。

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。徐州正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦

它可以用于監(jiān)測小鼠血液成分的變化,，確糖尿病或者某些能夠改變小鼠的血糖等,。上海鼠尾膠原直銷廠家

鼠尾膠原使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例,，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL,。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,。開蓋在超凈臺上過夜晾干,，也可以在室溫放置1小時后，用PBS洗3~4次后直接使用,。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間,。三維膠原凝膠的制備：A、無細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,，加入690μL雙蒸水,，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要測定pH值）,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。上海鼠尾膠原直銷廠家