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pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過改造的高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶,與ProteinA融合,,形成一種新型融合酶,,應用于CUT&Tag技術(shù)中,用于研究蛋白質(zhì)與基因組DNA的相互作用,。這種融合酶具備以下特點:1.**高活性**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是超高活性的突變形式,,體外轉(zhuǎn)座效率比野生型高1000倍。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的N端結(jié)構(gòu)域為ProteinA的一部分,,可以與免疫球蛋白的Fc區(qū)相互作用,,特別是與大多數(shù)哺乳動物的IgG結(jié)合。3.**Tn5轉(zhuǎn)座酶活性**:C端結(jié)構(gòu)域為Tn5轉(zhuǎn)座酶,,能夠特異性識別轉(zhuǎn)座子兩端反向重復的ME序列(MosaicEnd),,并在形成轉(zhuǎn)座復合體后隨機插入靶DNA中。4.**應用廣**:適用于CUT&Tag技術(shù),、高通量測序建庫,、ATAC-seq等,特別適用于早期胚胎發(fā)育,、干細胞,、以及表觀遺傳學等研究領域。5.**操作簡便**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用簡化了實驗步驟,,可以在一步反應中實現(xiàn)DNA片段化和接頭連接,,從細胞到二代測序文庫的轉(zhuǎn)化過程需9小時,。6.**低細胞投入量**:CUT&Tag技術(shù)允許從低至60個細胞的樣本中獲得結(jié)果,,甚至可以應用于單細胞水平的研究。7.**高質(zhì)量結(jié)果**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的使用可以保證DNA片段化,,同時獲得的蛋白純度高,、核酸殘留低,。通過SDS-PAGE、Western blot,、質(zhì)譜等方法驗證蛋白的純度和分子量,。通過活性測試評估蛋白的生物活性。Recombinant Mouse CD19 Protein,His Tag
Blood Direct PCR Master Mix (2×)的組分通常包括以下幾類:高保真DNA聚合酶:例如,,NEB的Q5 Blood Direct 2X Master Mix中包含的Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase,,這是一種熱穩(wěn)定性DNA聚合酶,具有3'→5'核酸外切酶活性,,并與Sso7d結(jié)構(gòu)域融合以增強過程性3940,。dNTPs:提供DNA合成所需的四種脫氧核苷三磷酸。優(yōu)化的緩沖體系:包含適合于血液樣本PCR擴增的pH和離子強度,,以及能夠抵抗血液樣本中抑制劑的特殊成分,。穩(wěn)定劑:保證預混合溶液在儲存和使用過程中的穩(wěn)定性??挂种苿┏煞郑阂恍〣lood Direct PCR Master Mix含有能夠抵抗血液樣本中可能存在的PCR抑制劑的成分,。可選的染料:某些產(chǎn)品可能含有用于電泳的染料,,允許PCR產(chǎn)物直接上樣進行電泳分析,,無需額外的上樣緩沖液。其他可選組分:根據(jù)需要,,可能包括MgCl2,、EDTA、DMSO等,,用于優(yōu)化特定樣本或反應條件42,。Recombinant Rat MIF利用牛痘DNA拓撲異構(gòu)酶I的連接原理,可以在無需DNA連接酶的情況下,,快速高效地連接DNA片段,,實現(xiàn)克隆。
T4UvsX重組酶是一種來源于T4噬菌體的酶,,屬于RecA/Rad51家族的同源體,。這種重組酶在雙鏈DNA斷裂的修復以及復制叉重新啟動的過程中扮演著重要角色。T4UvsX重組酶能夠與其他DNA結(jié)合蛋白或輔助因子協(xié)同作用,,與單鏈DNA形成核酸蛋白復合物,。該復合物通過尋找與目標DNA互補的區(qū)域進行雜交,以完成鏈置換反應,,且此酶本身不具有核酸酶活性,。產(chǎn)品應用方面,T4UvsX重組酶主要用于等溫擴增技術(shù),如重組酶聚合酶擴增(RPA)技術(shù),。它在實驗中與T4UvsY重組酶,、BsuDNA聚合酶(大片段)、T4基因32蛋白(gp32)等組分一同使用,,以優(yōu)化RPA擴增反應,。T4UvsX重組酶的保存條件為-20℃,可保存3年,,或者-20℃儲存有效期為2年,,避免反復凍融。其儲存液通常包含Tris-HCl,、KCl,、DTT、EDTA和甘油等成分,,以保持酶的穩(wěn)定性和活性,。熱失活處理為60℃孵育10分鐘。在使用T4UvsX重組酶時,,需要注意其保存液中甘油含量較高,,建議單獨分裝保存,并且在操作時穿著實驗服并佩戴一次性手套,,以確保安全,。此外,該產(chǎn)品供科研使用,,不應用于臨床診斷,。
PCR產(chǎn)物直接進行電泳分析通常涉及以下步驟:PCR擴增:首先使用PCR Master Mix和特定的引物對目標DNA片段進行擴增。PCR產(chǎn)物的準備:如果使用的是含有預混凝膠加載染料的PCR Master Mix(如某些Blood Direct PCR Master Mix),,則PCR產(chǎn)物在擴增后已經(jīng)含有了適合電泳的染料,。如果沒有使用含染料的Master Mix,則需要在PCR反應完成后向產(chǎn)物中添加適量的凝膠加載染料,。電泳槽的準備:清潔電泳槽,,確保沒有灰塵或殘留物。安裝電泳板和梳子,,注意密封以防緩沖液泄漏,。灌注緩沖液:向電泳槽中灌注適量的電泳緩沖液,常用的緩沖液有1X TAE或1X TBE,。PCR產(chǎn)物的加載:將PCR產(chǎn)物輕輕混合均勻,,避免氣泡的產(chǎn)生。使用移液槍或微量移液管將PCR產(chǎn)物加入到凝膠孔中,。如果PCR Master Mix中已含有染料,,通常不需要額外添加,。電泳條件的設置:根據(jù)PCR產(chǎn)物的大小和凝膠的濃度選擇合適的電壓和時間進行電泳。例如,,較小的DNA片段可能需要較高的電壓,而較大的片段則可能需要較低的電壓和更長的時間,。FnCas12a特異性識別并剪切帶PAM序列的雙鏈DNA(dsDNA)靶標,,其PAM序列為5'-TTN-3',與Cas9的PAM序列不同,。
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)是一種用于合成互補DNA(cDNA)的試劑盒,,它通過逆轉(zhuǎn)錄過程從信使RNA(mRNA)或總RNA模板合成cDNA的鏈。這類試劑盒通常包含逆轉(zhuǎn)錄酶(ReverseTranscriptase,,RT)和其他必要的組分,,以確保高效和準確的cDNA合成。RNaseH-表示該試劑盒使用的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏RNaseH活性,,這意味著在合成cDNA鏈的過程中不會發(fā)生RNA的降解,,從而可以產(chǎn)生更高產(chǎn)量的全長cDNA,特別是從較長的模板(可達13kb),。該試劑盒通常包括以下組分:-逆轉(zhuǎn)錄酶,,如RevertAidHMinusM-MuLVReverseTranscriptase,它通過點突變完全消除了RNaseH活性,。-RiboLockRNaseInhibitor,,這是一種重組蛋白,可有效保護RNA在高達55°C的溫度下不受RNases的降解,。-緩沖液,、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)和其他輔助成分,以支持cDNA合成反應,。-有時還包括用于去除RNA樣品中污染的基因組DNA的DNaseI,。合成的cDNA可以作為PCR或?qū)崟rPCR的模板直接使用,也適用于第二鏈cDNA合成或線性RNA放大,。此外,,可以在cDNA合成過程中加入放射性或非放射性標記的核苷酸,以便在包括微陣列在內(nèi)的雜交實驗中作為探針使用,。將含有重組質(zhì)粒的表達載體轉(zhuǎn)化到宿主細胞中,,通常是大腸桿菌或其他合適的細胞系。Recombinant Cynomolgus DDT Protein,His Tag
在MAGE-A3基因序列的C末端添加His標簽和Avi標簽序列,。His標簽有助于通過金屬螯合親和層析進行蛋白純化,。Recombinant Mouse CD19 Protein,His Tag
5'DNA腺苷酰化試劑盒通過酶學方法高效地將單鏈DNA(ssDNA)5'端腺苷?;?,通常轉(zhuǎn)化效率可達95%以上,。以下是實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵步驟和特點:1.**單步反應**:與傳統(tǒng)化學方法相比,該試劑盒可以在一個簡單的步驟中完成5'端磷酸化修飾的單鏈DNA或RNA的腺苷?;揎?,無需多步驟操作或純化。2.**高效率**:試劑盒通常能將95%以上的5'端磷酸化的DNA(pDNA)轉(zhuǎn)化成腺苷?;疍NA(AppDNA),,從而提高產(chǎn)量并避免膠回收提純步驟。3.**高溫孵育**:在65℃的高溫下進行反應,,有助于避免DNA或RNA的二級結(jié)構(gòu)對腺苷?;磻母蓴_。4.**酶的來源**:試劑盒中的腺苷?;?Adenylase)通常來源于嗜熱古細菌,,在大腸桿菌中表達獲得,保證反應的高效性,。5.**操作簡便**:使用MthRNA連接酶,、ATP和5'-磷酸化的單鏈DNA進行反應,操作簡單,,且腺苷化產(chǎn)物通常不需要進行電泳切膠回收,,可以直接通過乙醇沉淀進行進一步濃縮后用于后續(xù)的連接反應。6.**失活酶**:反應完成后推薦在85℃孵育5分鐘以失活Adenylase,,防止去腺苷?;F(xiàn)象,確保腺苷?;嚷什幌陆?。