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為什么需要單細(xì)胞分辨率,？ 生物學(xué)就像宇宙一樣。它非常復(fù)雜，有許多獨(dú)特的單體,，也就是細(xì)胞。這些細(xì)胞相互作用并扮演不同的角色，在更大的體系中構(gòu)建并驅(qū)動(dòng)多個(gè)過(guò)程。就像伽利略探索宇宙的努力一樣,，發(fā)現(xiàn)和定義這些細(xì)胞也需要高分辨率的工具，才能解開(kāi)促成生物學(xué)復(fù)雜性的基因表達(dá)異質(zhì)性。單細(xì)胞測(cè)序能夠在以一個(gè)細(xì)胞為功能單位中開(kāi)展生物學(xué)研究,，闡明具體細(xì)節(jié),，構(gòu)建出一幅更大、更精細(xì)的圖譜,，說(shuō)明導(dǎo)致產(chǎn)生某種外在表型的不同類型的分子和細(xì)胞之間是如何相互作用的：患者為什么會(huì)復(fù)發(fā),？是什么讓這種疫苗能夠有效防止傳染等等諸多問(wèn)題。烈冰生物為您提供多平臺(tái)一站式全流程單細(xì)胞測(cè)序服務(wù),。南京10X單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析培訓(xùn)班細(xì)胞中基因的表達(dá)是...

10× Genomics單細(xì)胞方案要求使用具有較高活性的單細(xì)胞懸液,。在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)因?yàn)闃颖绢愋秃椭苽鋯渭?xì)胞懸液方法的不同,，容易出現(xiàn)單細(xì)胞懸液中死亡細(xì)胞的比例較高的情況,。去除單細(xì)胞懸液中的死細(xì)胞和其他污染物對(duì)獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù)是至關(guān)重要的。這是因?yàn)?，死亡的?xì)胞易裂解導(dǎo)致其中的RNA釋放出來(lái),。這種cell-free RNA會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)的背景噪聲，并會(huì)影響單細(xì)胞數(shù)據(jù)的質(zhì)量,。因此當(dāng)樣本活性較差時(shí),，對(duì)細(xì)胞懸液中細(xì)胞活性檢測(cè)后，需要進(jìn)行一般死細(xì)胞去除的工作（一般懸液活性小于70%時(shí)考慮此操作）,，以保證較高的上機(jī)捕獲細(xì)胞的質(zhì)量,。烈冰生物為您提供一站式全流程高通量測(cè)序服務(wù),。沈陽(yáng)單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析關(guān)于10X ...

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是在單細(xì)胞水平上高通量測(cè)序分析基因表達(dá)譜的技術(shù),，突破傳統(tǒng)高通量測(cè)序的局限性，組織解離后,，單個(gè)樣本一次上機(jī)能捕獲500-20000個(gè)細(xì)胞,， 基于每個(gè)細(xì)胞分別建庫(kù)測(cè)序，獲得單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài),，并鑒定細(xì)胞的類型,，可以在不同樣本間從細(xì)胞類型的組成和豐度角度進(jìn)行比較，反映細(xì)胞間的異質(zhì)性,。而2021年橫空出世的10X Genomics Chromium X平臺(tái)實(shí)現(xiàn)了單塊chip上的百萬(wàn)級(jí)別通量的細(xì)胞捕獲,，系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)16個(gè)通道同時(shí)運(yùn)行，每個(gè)通道可捕獲2000-20000個(gè)細(xì)胞（不混樣）,，并支持原Chromium Controller體統(tǒng)外的多種細(xì)胞捕獲百萬(wàn)級(jí)別通量實(shí)驗(yàn),，可準(zhǔn)確鑒別...

單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個(gè)共同過(guò)程,，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析,。不過(guò)，每種分析在開(kāi)展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA,，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA,。RNA-seq是使用cDNA來(lái)構(gòu)建新一代測(cè)序文庫(kù)，從而測(cè)定整個(gè)轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá),。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn),，并通過(guò)熒光測(cè)定表達(dá)水平。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn),，而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無(wú)偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析,。然而，這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況,。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或...

Fluidigm C1平臺(tái)作為應(yīng)用于單細(xì)胞測(cè)序（Single Cell RNA Sequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù),，基于富魯達(dá)（Fluidigm?）的微流控技術(shù)，大約在幾個(gè)小時(shí)中可以捕獲96個(gè)左右的細(xì)胞,，進(jìn)行各類的Single-Cell測(cè)序建庫(kù),。當(dāng)然，通量還是比較小,。但不可否認(rèn)的是,，現(xiàn)在很多非RNA類Single Cell測(cè)序，仍然在采用這樣的技術(shù),，如Single Cell DNA-Seq,，Single Cell ATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫(kù),。所以可以說(shuō),，至少在10X和BD，或者其他企業(yè)推出有效的Single DNA測(cè)序技術(shù)之前,，C1仍然會(huì)是...

RNA測(cè)序（RNA-seq）或芯片分析等大量樣本的轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法作為一類強(qiáng)大的工具,，可提供混合樣本的基因表達(dá)平均數(shù)據(jù)，幫助科學(xué)家開(kāi)始揭示這種異質(zhì)性,。隨后,，技術(shù)創(chuàng)新的飛躍在單細(xì)胞技術(shù)上達(dá)到新高度——使得科學(xué)家能夠定義細(xì)胞類型特異的基因表達(dá)，從過(guò)去的平均數(shù)據(jù)中分辨出真正驅(qū)動(dòng)其表達(dá)模式的細(xì)胞異質(zhì)性,。這讓研究人員能夠更詳細(xì)地表征組織異質(zhì)性,，鑒定稀有細(xì)胞類型，并逐個(gè)細(xì)胞地仔細(xì)分析其分子機(jī)制,。當(dāng)獲得了對(duì)其研究的生物系統(tǒng)更為真實(shí)的圖譜后,，研究人員就有了更為堅(jiān)實(shí)可靠的知識(shí)基礎(chǔ)，并能在這個(gè)基礎(chǔ)上規(guī)劃下一步實(shí)驗(yàn),，以獲取更深入的可行動(dòng)見(jiàn)解,。十二年測(cè)序經(jīng)驗(yàn),，烈冰生物單細(xì)胞多組學(xué)領(lǐng)域的佼佼者。南京10X Genomics...

機(jī)體為響應(yīng)各種應(yīng)激,，其細(xì)胞會(huì)從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”,；當(dāng)細(xì)胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時(shí)，往往會(huì)經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組,，導(dǎo)致一些基因被沉默,，一些基因被重新“喚醒”，但純化這些瞬態(tài)細(xì)胞進(jìn)行研究是很困難或不可能的,；scRNA-seq擬時(shí)序分析可以讓我們?cè)诓恍枰兓那闆r下查看這些細(xì)胞狀態(tài),。擬時(shí)序分析，即根據(jù)不同細(xì)胞亞群基因表達(dá)量隨時(shí)間的變化情況,，構(gòu)建細(xì)胞譜系發(fā)育,，但這里的時(shí)間并不是真時(shí)間，而是一個(gè)虛擬的時(shí)間,，是指的細(xì)胞與細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡,。即使在同一個(gè)樣本中，也會(huì)存在多種不同的細(xì)胞形態(tài),。因此,，不論測(cè)定了多少樣本，我們都可以采用擬時(shí)序分析對(duì)樣本中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和變化進(jìn)行描述,。烈冰單細(xì)胞測(cè)序...

基于10X Next GEM技術(shù),，單細(xì)胞測(cè)序一次實(shí)驗(yàn)可以同時(shí)檢測(cè)近萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，可在一個(gè)樣本中同時(shí)獲3'端mRNA表達(dá)譜,、如需和免疫組庫(kù)（TCR和BCR）的數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合時(shí),，即某些研究還需結(jié)合基因的表達(dá)譜和V(D)J數(shù)據(jù)進(jìn)行復(fù)雜組織樣本的是影響免疫應(yīng)答分析，監(jiān)測(cè)免疫療法的效果,，研究疾病發(fā)生,、發(fā)展的分子機(jī)制,，可進(jìn)行單細(xì)胞免疫組庫(kù)測(cè)序： 烈冰單細(xì)胞免疫組庫(kù)平臺(tái)具備：1000+項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn),，一次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)獲取1000-20000個(gè)細(xì)胞的文庫(kù)構(gòu)建，獲得轉(zhuǎn)錄組和免疫組數(shù)據(jù),； 具備完善的免疫組庫(kù)測(cè)序和實(shí)驗(yàn)質(zhì)控流程,，獲取V(D)J全長(zhǎng)序列的配對(duì)信息；豐富的免疫組庫(kù)測(cè)序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗(yàn),，實(shí)現(xiàn)專屬個(gè)性化數(shù)據(jù)分析服務(wù),，搭配...

現(xiàn)有的單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)陣營(yíng)在幾個(gè)主要領(lǐng)域存在差別。一個(gè)是分隔單個(gè)細(xì)胞以在其中進(jìn)行微反應(yīng)的物理平臺(tái),。在這個(gè)空間,，單個(gè)細(xì)胞的內(nèi)容物釋放,，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引，以便下游識(shí)別?，F(xiàn)有技術(shù)的另一個(gè)主要區(qū)別是如何添加索引,，就像生成測(cè)序文庫(kù)所涉及的流程步驟一樣。10X Genomics單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)采用動(dòng)態(tài)微流控技（Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理）,。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,，其中一列縱向孔道輸入細(xì)胞，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會(huì)吸附在凝膠微珠上,，并通過(guò)微流控技術(shù),，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中,。這時(shí)候,，就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中。每一個(gè)油滴中會(huì)落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠...

烈冰生物搭建近10臺(tái)10XGemomics平臺(tái),，目前為全國(guó)范圍內(nèi)的高校,、醫(yī)院和研究所等單位的科研學(xué)者提供鼓舞，10X微流體“雙十字”交叉系統(tǒng)為8或16通道系統(tǒng),，每個(gè)通道上限可捕獲20000細(xì)胞,，16通道一次可檢測(cè)細(xì)胞范圍為百萬(wàn)級(jí)別的細(xì)胞水平。此外,，單個(gè)細(xì)胞捕獲效率高達(dá)65%,，可準(zhǔn)確鑒別稀有細(xì)胞類型，利于稀有樣本或小細(xì)胞量類型樣本研究,；細(xì)胞可適性高,，對(duì)細(xì)胞大小（直徑超過(guò)40um細(xì)胞需要制備成細(xì)胞核）及類型無(wú)限制,。細(xì)胞捕獲周期較短,，能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)分離，無(wú)需人工操作,，1天內(nèi)可完成從細(xì)胞懸液到cDNA文庫(kù)構(gòu)建的所有的測(cè)序準(zhǔn)備工作,。單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài)，并鑒定細(xì)胞的類型,。青島單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)機(jī)構(gòu)...

所謂的高通量測(cè)序技術(shù),，又名大規(guī)模平行測(cè)序，是將 DNA（或者 cDNA）隨機(jī)片段化,、加接頭,，制備測(cè)序文庫(kù)，通過(guò)對(duì)文庫(kù)中數(shù)以萬(wàn)計(jì)的克隆(colony)進(jìn)行延伸反應(yīng),，檢測(cè)對(duì)應(yīng)的信號(hào),，獲取序列信息,。與傳統(tǒng)測(cè)序法（Sanger法等）相比，高通量測(cè)序技術(shù)在處理大規(guī)模樣品時(shí)具有明顯的優(yōu)勢(shì),，又快（兩天）又多（數(shù)百萬(wàn)克隆）,，成為目前組學(xué)研究的主要技術(shù)。單細(xì)胞測(cè)序是一個(gè)系統(tǒng)的工程，開(kāi)展項(xiàng)目前您可能會(huì)先評(píng)估它提供的見(jiàn)解是否與您的研究問(wèn)題相匹配,，如果匹配,，實(shí)驗(yàn)過(guò)程如何規(guī)劃,，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)如何選擇,，樣本如何制備,，數(shù)據(jù)如何分析等等,，而在這一切開(kāi)始之前,，我們的服務(wù)就已經(jīng)開(kāi)始了,，從銷售到實(shí)驗(yàn)到專業(yè)技術(shù)支持,，我們開(kāi)通全線對(duì)接渠道，...

一味的追求高細(xì)胞數(shù)量的捕獲,，小心得不償失,，原因在這：?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序所有的分析都是基于細(xì)胞聚類進(jìn)行,，而細(xì)胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后,，獲得細(xì)胞基因表達(dá)譜,，通過(guò)降維（pca）,，無(wú)監(jiān)督聚類以及可視化（t-SNE）得到的,。進(jìn)行細(xì)胞聚類時(shí)需要考慮到每個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)模式，因此即使是相同的數(shù)據(jù),，在剔除幾個(gè)細(xì)胞的情況下,，前后獲得的聚類圖也會(huì)出現(xiàn)明顯不同,。而當(dāng)細(xì)胞捕獲數(shù)過(guò)多時(shí),，無(wú)論是假陰性和假陽(yáng)性數(shù)據(jù)還是多細(xì)胞數(shù)據(jù)，都會(huì)對(duì)正常細(xì)胞聚類產(chǎn)生影響,，造成聚類結(jié)果失真,。這也是很多文章，特別是很多高分文章,，為什么單個(gè)樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在2000-3000的原因了,。烈冰建議單個(gè)樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在3000-5000個(gè)時(shí)...

現(xiàn)有的單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)陣營(yíng)在幾個(gè)主要領(lǐng)域存在差別。一個(gè)是分隔單個(gè)細(xì)胞以在其中進(jìn)行微反應(yīng)的物理平臺(tái),。在這個(gè)空間,，單個(gè)細(xì)胞的內(nèi)容物釋放，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引,，以便下游識(shí)別?，F(xiàn)有技術(shù)的另一個(gè)主要區(qū)別是如何添加索引，就像生成測(cè)序文庫(kù)所涉及的流程步驟一樣,。10X Genomics單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)采用動(dòng)態(tài)微流控技（Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理）,。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠，其中一列縱向孔道輸入細(xì)胞,，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會(huì)吸附在凝膠微珠上,，并通過(guò)微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道,，即油相孔道中,。這時(shí)候，就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中,。每一個(gè)油滴中會(huì)落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠...

10× Genomics官方建議,，當(dāng)單細(xì)胞懸液活性低于70%時(shí)應(yīng)做去除死細(xì)胞操作，并推薦使用MACS? Dead Cell Removal Kit(Miltenyi Biotec)。需要注意到,，去除死細(xì)胞的操作會(huì)損失一定的細(xì)胞數(shù)量,，10× Genomics和Miltenyi Biotec都沒(méi)有給出單細(xì)胞懸液含有多少細(xì)胞數(shù)量才建議做去除死細(xì)胞的操作?；诹冶嗄陠渭?xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)經(jīng)驗(yàn),，建議當(dāng)細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)量和活性檢測(cè)后，考慮對(duì)細(xì)胞活性在50%-70%的懸液進(jìn)行去除死細(xì)胞的操作,。而太低活性的懸液（小于30%）,，懸液中細(xì)胞大量死亡，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細(xì)胞比例和狀態(tài),，失真嚴(yán)重,，建議重新收集樣本進(jìn)行新...

科技的發(fā)展讓單細(xì)胞測(cè)序已經(jīng)應(yīng)用于疾病發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵過(guò)程和事件，如前病變向惡性的轉(zhuǎn)化,、惡性向轉(zhuǎn)移性的發(fā)展,，以及對(duì)多種用藥的反應(yīng)。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)作為一個(gè)需要將組織解離成為單細(xì)胞懸液,，或者是采用細(xì)胞核捕獲的策略捕獲單細(xì)胞核,，進(jìn)而對(duì)于每一個(gè)單細(xì)胞或者細(xì)胞核進(jìn)行測(cè)序得到結(jié)果的技術(shù)，其空間定位信息是丟失的,。這就衍生出了一個(gè)問(wèn)題就是如果單細(xì)胞A與B并不出現(xiàn)在一個(gè)組織區(qū)域中他們會(huì)互相影響或者轉(zhuǎn)化么,？免疫研究中，兩個(gè)具有非常強(qiáng)的PDL1-PD1的配對(duì)關(guān)系的細(xì)胞在組織切片上風(fēng)馬牛不相及,，這樣PDL1-PD1的關(guān)系會(huì)生效么,？烈冰生物首批引進(jìn) Chromium X 平臺(tái)，開(kāi)啟百萬(wàn)級(jí)通量單細(xì)胞測(cè)序新時(shí)代,。烈冰單細(xì)胞測(cè)...

單細(xì)胞測(cè)序結(jié)果動(dòng)輒上百G數(shù)據(jù)量,，龐大的數(shù)據(jù)對(duì)于分析平臺(tái)和分析能力有著很高的要求，首先針對(duì)下機(jī)數(shù)據(jù)的質(zhì)控環(huán)節(jié)：?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序產(chǎn)生數(shù)億的結(jié)果序列,，不可避免的會(huì)出現(xiàn)低質(zhì)量的測(cè)序結(jié)果,，存在各種情況的序列污染。因此序列過(guò)濾及質(zhì)量評(píng)估就會(huì)變得極為重要,。序列質(zhì)量主要通過(guò)測(cè)序質(zhì)量值Q20/Q30的占比來(lái)表征,，即堿基測(cè)序結(jié)果的錯(cuò)誤率在1% / 0.1%以下的比例。理想的測(cè)序結(jié)果reads的堿基質(zhì)量均高于30,。保證數(shù)據(jù)獲得后的處理結(jié)果的準(zhǔn)確性,，為后續(xù)細(xì)胞類型鑒定和功能分析打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。烈冰生物為您提供多平臺(tái)一站式全流程單細(xì)胞測(cè)序服務(wù),。蘇州10X單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié)：主要是對(duì)細(xì)胞數(shù)量,、基因...

現(xiàn)有的單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)陣營(yíng)在幾個(gè)主要領(lǐng)域存在差別。一個(gè)是分隔單個(gè)細(xì)胞以在其中進(jìn)行微反應(yīng)的物理平臺(tái)。在這個(gè)空間,，單個(gè)細(xì)胞的內(nèi)容物釋放,，轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引，以便下游識(shí)別?，F(xiàn)有技術(shù)的另一個(gè)主要區(qū)別是如何添加索引,，就像生成測(cè)序文庫(kù)所涉及的流程步驟一樣。10X Genomics單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)采用動(dòng)態(tài)微流控技（Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理）,。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,，其中一列縱向孔道輸入細(xì)胞,，凝膠微珠與細(xì)胞碰撞后會(huì)吸附在凝膠微珠上,，并通過(guò)微流控技術(shù)，將之輸入到第二縱向孔道,，即油相孔道中,。這時(shí)候，就形成了一個(gè)個(gè)油滴并輸出并收集在EP管中,。每一個(gè)油滴中會(huì)落入一個(gè)細(xì)胞以及一個(gè)凝膠微珠...

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是在單細(xì)胞水平上高通量測(cè)序分析基因表達(dá)譜的技術(shù),，突破傳統(tǒng)高通量測(cè)序的局限性，組織解離后,，單個(gè)樣本一次上機(jī)能捕獲500-20000個(gè)細(xì)胞,， 基于每個(gè)細(xì)胞分別建庫(kù)測(cè)序，獲得單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài),，并鑒定細(xì)胞的類型,，可以在不同樣本間從細(xì)胞類型的組成和豐度角度進(jìn)行比較，反映細(xì)胞間的異質(zhì)性,。而2021年橫空出世的10X Genomics Chromium X平臺(tái)實(shí)現(xiàn)了單塊chip上的百萬(wàn)級(jí)別通量的細(xì)胞捕獲,，系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)16個(gè)通道同時(shí)運(yùn)行，每個(gè)通道可捕獲2000-20000個(gè)細(xì)胞（不混樣）,，并支持原Chromium Controller體統(tǒng)外的多種細(xì)胞捕獲百萬(wàn)級(jí)別通量實(shí)驗(yàn),，可準(zhǔn)確鑒別...

細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力評(píng)估在評(píng)估樣本質(zhì)量時(shí)，需要在細(xì)胞清洗和過(guò)濾之后測(cè)定細(xì)胞活力,，這一點(diǎn)至關(guān)重要,。測(cè)定細(xì)胞活力有許多種方法，烈冰多年單細(xì)胞測(cè)序經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)臺(tái)盼藍(lán)法在鑒定活細(xì)胞與死細(xì)胞的比例時(shí)效果很好,。細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性以及目標(biāo)回收量和實(shí)際回收量之間的一致性,，取決于我們了解樣本中有多少個(gè)細(xì)胞。一旦過(guò)濾和清洗完成,，可采用細(xì)胞計(jì)數(shù)設(shè)備（如血球計(jì)數(shù)器或自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀）進(jìn)行定量,。這些設(shè)備不但能提供準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)，還能計(jì)算出向微流體芯片上樣適量細(xì)胞所需的細(xì)胞懸液體積。測(cè)序的革新讓科學(xué)研究從個(gè)體基因差異逐漸轉(zhuǎn)為個(gè)體細(xì)胞的基因差異,。陜西10X單細(xì)胞測(cè)序多組學(xué)測(cè)序烈冰與國(guó)內(nèi)高校,、研究所、醫(yī)院和藥企單位開(kāi)展深度合作,，服務(wù)于60...

相對(duì)于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問(wèn)題,，10X平臺(tái)普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1000-20000不等的測(cè)序細(xì)胞量，這個(gè)量級(jí)的測(cè)序細(xì)胞量已經(jīng)可以說(shuō)能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型,。因此,，這兩種技術(shù)對(duì)于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上，無(wú)論是從細(xì)胞數(shù)量上來(lái)說(shuō)還是表達(dá)檢測(cè)可靠性來(lái)說(shuō),，都會(huì)更實(shí)用,。同時(shí)依托Random Cell Label技術(shù)，使得其對(duì)于NovaSeq,、HiSeq X Ten,、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象，相對(duì)于Smart-Seq數(shù)據(jù)來(lái)說(shuō),，影響幾乎可以忽略不計(jì)（10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測(cè)試結(jié)果,，顯示...

RNA測(cè)序（RNA-seq）或芯片分析等大量樣本的轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法作為一類強(qiáng)大的工具，可提供混合樣本的基因表達(dá)平均數(shù)據(jù),，幫助科學(xué)家開(kāi)始揭示這種異質(zhì)性,。隨后，技術(shù)創(chuàng)新的飛躍在單細(xì)胞技術(shù)上達(dá)到新高度——使得科學(xué)家能夠定義細(xì)胞類型特異的基因表達(dá),，從過(guò)去的平均數(shù)據(jù)中分辨出真正驅(qū)動(dòng)其表達(dá)模式的細(xì)胞異質(zhì)性,。這讓研究人員能夠更詳細(xì)地表征組織異質(zhì)性，鑒定稀有細(xì)胞類型,，并逐個(gè)細(xì)胞地仔細(xì)分析其分子機(jī)制,。當(dāng)獲得了對(duì)其研究的生物系統(tǒng)更為真實(shí)的圖譜后，研究人員就有了更為堅(jiān)實(shí)可靠的知識(shí)基礎(chǔ),，并能在這個(gè)基礎(chǔ)上規(guī)劃下一步實(shí)驗(yàn),，以獲取更深入的可行動(dòng)見(jiàn)解。助力探索生命時(shí)空多維度的動(dòng)態(tài)變化的生物學(xué)信息,；助力醫(yī)療健康時(shí)代,！南京二代測(cè)序單...

Fluidigm C1平臺(tái)作為應(yīng)用于單細(xì)胞測(cè)序（Single Cell RNA Sequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù)，基于富魯達(dá)（Fluidigm?）的微流控技術(shù),，大約在幾個(gè)小時(shí)中可以捕獲96個(gè)左右的細(xì)胞,，進(jìn)行各類的Single-Cell測(cè)序建庫(kù)。當(dāng)然,，通量還是比較小,。但不可否認(rèn)的是,，現(xiàn)在很多非RNA類Single Cell測(cè)序，仍然在采用這樣的技術(shù),，如Single Cell DNA-Seq,，Single Cell ATAC-Seq等，都是采用此技術(shù)進(jìn)行單細(xì)胞分選后再分別用不同試劑盒建庫(kù),。所以可以說(shuō),，至少在10X和BD，或者其他企業(yè)推出有效的Single DNA測(cè)序技術(shù)之前,，C1仍然會(huì)是...

關(guān)于10X Genomics單細(xì)胞平臺(tái)的樣本類型和樣本制備 ：10X平臺(tái)在上機(jī)前需要注意細(xì)胞消化后的細(xì)胞團(tuán)塊,，獲得分離良好的細(xì)胞懸液、無(wú)細(xì)胞隨便,、極少的細(xì)胞團(tuán)塊,，且細(xì)胞活力高（＞70%）；此外,，了解您所研究細(xì)胞的大小范圍也很重要,。細(xì)胞大小通常與細(xì)胞表達(dá)的轉(zhuǎn)錄本數(shù)量有關(guān),。各種尺寸不同的細(xì)胞（一般直徑不大于50μm）均可與我們基因表達(dá)解決方案中使用的10X Genomics平臺(tái)兼容,。一般來(lái)說(shuō)，細(xì)胞制備方案將根據(jù)組織來(lái)源和細(xì)胞類型而變化,。每種組織類型都是獨(dú)特的,，因此，必須在開(kāi)始任何單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)之前優(yōu)化樣本制備,，烈冰多年樣本解離消化經(jīng)驗(yàn),，累積10+物種、50+組織的消化protocol,，若您的樣本為組織...

相對(duì)于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問(wèn)題,，10X平臺(tái)普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1000-20000不等的測(cè)序細(xì)胞量，這個(gè)量級(jí)的測(cè)序細(xì)胞量已經(jīng)可以說(shuō)能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型,。因此,，這兩種技術(shù)對(duì)于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上，無(wú)論是從細(xì)胞數(shù)量上來(lái)說(shuō)還是表達(dá)檢測(cè)可靠性來(lái)說(shuō),，都會(huì)更實(shí)用,。同時(shí)依托Random Cell Label技術(shù)，使得其對(duì)于NovaSeq,、HiSeq X Ten,、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象，相對(duì)于Smart-Seq數(shù)據(jù)來(lái)說(shuō),，影響幾乎可以忽略不計(jì)（10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測(cè)試結(jié)果,，顯示...

單細(xì)胞多組學(xué)帶來(lái)的突破 單細(xì)胞測(cè)序方法不但改進(jìn)了實(shí)驗(yàn)過(guò)程,，還幫助科學(xué)家在健康和疾病研究的關(guān)鍵領(lǐng)域取得新進(jìn)展。那些過(guò)去從轉(zhuǎn)錄平均值或單項(xiàng)參數(shù)讀取中無(wú)法獲得的新發(fā)現(xiàn)正在改變我們對(duì)傳染病,、神經(jīng)退行性疾病等疾病的認(rèn)識(shí),。從鑒定新的細(xì)胞類型和狀態(tài)，到揭開(kāi)疾病用藥應(yīng)答和耐藥的潛在機(jī)制,，單細(xì)胞測(cè)序正在推動(dòng)突破性的研究,，有望改變生物學(xué)和醫(yī)療。無(wú)論是無(wú)法解釋的疾病,，還是人體或自然界中尚未探索的系統(tǒng),，曾經(jīng)模糊的東西正變得越來(lái)越清晰。隨著我們邁向科學(xué)的未來(lái),，我們手頭的工具就像伽利略的望遠(yuǎn)鏡一樣能夠提高焦距和放大倍數(shù),，而定義科學(xué)未來(lái)的知識(shí)新深度是十年前的人們所無(wú)法想象的。烈冰斥巨資引進(jìn)Novaseq6000,，開(kāi)啟更大...

單細(xì)胞獲得困難,，不同組織要求不盡相同難以搞定？ 烈冰2000+項(xiàng)目消化經(jīng)驗(yàn),，100+組織類型解離protocol,，精心設(shè)計(jì)不同組織實(shí)驗(yàn)的解離、細(xì)胞懸浮實(shí)驗(yàn)體系,，確保單細(xì)胞的獲得,。 凍存樣本無(wú)法實(shí)驗(yàn)，珍貴樣本無(wú)法使用,？ 烈冰采用國(guó)際認(rèn)可的凍存組織復(fù)蘇技術(shù)以及死細(xì)胞過(guò)濾技術(shù),，確保凍存組織使用。 珍貴樣本,，細(xì)胞數(shù)量太少,，消化背景雜無(wú)法做單細(xì)胞？ 采用國(guó)際認(rèn)可的10X Genomics,，BD Rhapsody雙平臺(tái)模式,，根據(jù)樣本實(shí)際情況和用戶需求提供客觀有效的實(shí)驗(yàn)方案,細(xì)胞量少，背景雜也能做單細(xì)胞,。 單細(xì)胞RNA分類精度不足,，部分細(xì)胞無(wú)法細(xì)分？ 烈冰同時(shí)采用單細(xì)胞蛋白質(zhì)組與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),，真正做...

單細(xì)胞獲得困難,，不同組織要求不盡相同難以搞定？ 烈冰2000+項(xiàng)目消化經(jīng)驗(yàn),，100+組織類型解離protocol,，精心設(shè)計(jì)不同組織實(shí)驗(yàn)的解離,、細(xì)胞懸浮實(shí)驗(yàn)體系，確保單細(xì)胞的獲得,。 凍存樣本無(wú)法實(shí)驗(yàn),，珍貴樣本無(wú)法使用？ 烈冰采用國(guó)際認(rèn)可的凍存組織復(fù)蘇技術(shù)以及死細(xì)胞過(guò)濾技術(shù),，確保凍存組織使用,。 珍貴樣本，細(xì)胞數(shù)量太少,，消化背景雜無(wú)法做單細(xì)胞,？ 采用國(guó)際認(rèn)可的10X Genomics，BD Rhapsody雙平臺(tái)模式,，根據(jù)樣本實(shí)際情況和用戶需求提供客觀有效的實(shí)驗(yàn)方案,細(xì)胞量少,，背景雜也能做單細(xì)胞。 單細(xì)胞RNA分類精度不足,，部分細(xì)胞無(wú)法細(xì)分,？ 烈冰同時(shí)采用單細(xì)胞蛋白質(zhì)組與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)，真正做...

單細(xì)胞多組學(xué)提升見(jiàn)解 基于測(cè)序的數(shù)據(jù)能夠?qū)⒄蔑@其強(qiáng)大之處,，因?yàn)樗軌蛄私馔粏渭?xì)胞的多種生物分析指標(biāo),。如果說(shuō)單細(xì)胞基因表達(dá)提供了一種顏色的詳細(xì)信息，那么單細(xì)胞多組學(xué)提供了同一細(xì)節(jié)的全彩色圖譜,，為您帶來(lái)樣本的真實(shí)視圖,。烈冰2021年強(qiáng)勢(shì)引進(jìn)的10x Genomics Chromium單細(xì)胞平臺(tái)能夠從同一單細(xì)胞中讀取細(xì)胞復(fù)雜性的多組學(xué)特征。與傳統(tǒng)方法不同,，單細(xì)胞多組學(xué)簡(jiǎn)化了您需要開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)，也節(jié)省了您需要分析的樣本,，而能獲得相同的結(jié)果,。這不但節(jié)省了寶貴的樣本，還保證了更高的生物學(xué)準(zhǔn)確性,，因?yàn)槟恍枰ヅ洳鸱謽颖镜臄?shù)據(jù)集并通過(guò)計(jì)算來(lái)推斷各個(gè)組學(xué)之間的關(guān)系,。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次顛覆性的改變...

樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化，在對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗和計(jì)數(shù)后,，單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上,，直至用于后續(xù)的上機(jī)和文庫(kù)制備步驟。在理想狀況下,，一旦制備好樣本,，應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而,，您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì),，因?yàn)檫@可能會(huì)影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時(shí)間,，以及它們?cè)谥苽浜蠖嗑帽銘?yīng)當(dāng)被盡快使用。例如,，有些細(xì)胞（如PBMC）如果在冰上放置一段時(shí)間,，它們就開(kāi)始形成團(tuán)塊。這些團(tuán)塊很難解離,，增加了堵塞的風(fēng)險(xiǎn),，而且每個(gè)團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計(jì)數(shù)，又降低了細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,。此外,，有些細(xì)胞更加粘稠，形成團(tuán)塊的速度更快,。對(duì)于這些細(xì)胞,，必須盡量減少制備和使用之間的時(shí)間差。附加流式分選細(xì)胞表面M...

單細(xì)胞RNA-seq,、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）都采用一個(gè)共同過(guò)程,，即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析。不過(guò),，每種分析在開(kāi)展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同,。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA，然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA,。RNA-seq是使用cDNA來(lái)構(gòu)建新一代測(cè)序文庫(kù),，從而測(cè)定整個(gè)轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá)。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點(diǎn),，并通過(guò)熒光測(cè)定表達(dá)水平,。RT-qPCR限于已知靶點(diǎn)，而RNA-seq可實(shí)現(xiàn)無(wú)偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析,。然而,，這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或...